DN25

Désoxyribonucléase I from bovine pancreas

lyophilized powder, Protein ≥85 %, ≥400 Kunitz units/mg protein

• Synonyme(s) : Désoxyribonucléase, DNase I, Désoxyribonucléate-5′-oligonucléotido-hydrolase
• Numéro CAS: 9003-98-9
• Numéro de classification (Commission des enzymes): 3.1.21.1 (BRENDA, IUBMB)
• Numéro CE : 232-667-0
• Numéro MDL: MFCD00130918
• Code UNSPSC : 12352204
• Nomenclature NACRES : NA.54

Propriétés

• Source biologique: bovine pancreas
• Forme: lyophilized powder
• Activité spécifique: ≥400 Kunitz units/mg protein
• Poids mol.: ~31 kDa
• Composition: Protein, ≥85%
• Technique(s): DNA extraction: suitable
• Solubilité: 0.15 M NaCl: soluble 5.0 mg/mL, hazy
• Adéquation: suitable for molecular biology
• Application(s): diagnostic assay manufacturing; diagnostic assay manufacturing
• Activité étrangère: RNase ≤0.02%
• Conditions d'expédition: wet ice
• Température de stockage: −20°C

Description

Description générale

La désoxyribonucléase I ou DNase I est une endonucléase isolée dans le pancréas des bovins.

• Notre DNase I digère l'ADN double brin et l'ADN simple brin en oligonucléotides et en mononucléotides.
• La DNase pancréatique bovine se présente sous quatre formes différentes : les isoenzymes A, B, C et D. Leurs points isoélectriques sont les suivants : 5,22, 4,96, 5,06 et 4,78.3. L'isoenzyme A est la forme prédominante, les isoenzymes B et C étant présentes en plus faibles quantités et la forme D en quantités minimes.
• La structure de la DNase I ressemble à celle de l'exonucléase III. Elle comprend deux feuillets β centraux. Chaque feuillet β est composé de six brins β. Ce complexe de feuillets β est entouré de régions de boucles et de régions α-hélicoïdales importantes. Cette enzyme présente des similitudes structurales avec l'exonucléase III.^[1]

Application

• Diminue la viscosité, pour de meilleurs rendements, en éliminant l'ADN lors de l'isolement de cellules primaires
• Incorporation de bases marquées dans l'ADN : coupure simple brin
• Marquage radioactif
• Bioprocédés : élimination de l'ADN
• Élimination de l'ADN génomique des préparations d'ARN avant RT-PCR
• Transcription in vitro
• Translation de coupure
• Footprinting à la DNase
• Régulation de la polymérisation de l'actine dans les cellules et régulation de l'actine dans l'apoptose cellulaire
• Fixation des protéines sur les acides nucléiques par réticulation UV
• La DNase joue un rôle dans la régulation de la polymérisation de l'actine dans les cellules et est impliquée dans le processus d'apoptose^[1]

Produit utilisé pour éliminer l'ADN présent dans les échantillons de protéines.

Actions biochimiques/physiologiques

La DNase I est une endonucléase qui agit sur les liaisons phosphodiester adjacentes à des pyrimidines et qui produit des polynucléotides ayant des groupements 5′-phosphate terminaux. En présence de Mg²⁺, la DNase I clive indépendamment chaque brin d'ADN et les sites de clivage sont aléatoires. Les deux brins d'ADN sont clivés approximativement au niveau du même site en présence de Mn²⁺. Les cations divalents tels que Mn²⁺, Ca²⁺, Co²⁺ et Zn²⁺ sont des activateurs de cette enzyme. Une concentration en Ca²⁺ de 5 mM la stabilise vis-à-vis de la digestion protéolytique. Il a été montré que le pH optimal se situe entre 7 et 8. La DNase I de pancréas de bovin est constituée de quatre éléments, A, B, C et D, qui peuvent être distingués par chromatographie. Le rapport molaire des éléments A, B et C est de respectivement 4:1:1. L'élément D est présent en très faible quantité. Le 2-mercaptoéthanol, les chélateurs, le dodécylsulfate de sodium (SDS) et l'actine sont connus pour inhiber l'activité de cette enzyme.

Caractéristiques et avantages

Notre désoxyribonucléase DNAse I est essentiellement dépourvue de RNAse, ce qui facilite la mise en œuvre du produit.

Définition de l'unité

Une unité Kunitz provoque une variation de A₂₆₀ de 0,001 par minute et par ml à pH 5,0 et 25 °C, en utilisant comme substrat de l'ADN de type I ou III.

Forme physique

Préparation brute, contient du chlorure de calcium

Notes préparatoires

Une solution de DNase I à 10 mg/ml dans du NaCl 0,15 M peut perdre < 10 % de son activité lorsqu'elle est conservée une semaine en aliquotes à −20 °C. La perte d'activité peut être d'environ 20 % si la même solution est conservée en aliquotes entre 2 et 8 °C. Elle reste active pendant 5 heures maximum à 60 °C entre pH 5 et pH 7 et devient inactive après moins de 10 minutes à 68 °C. Sa perte d'activité est de 6 % par heure dans un tampon acétate (pH 5,0) ou un tampon Tris (pH 7,2) à une concentration de 1 mg/ml.

Remarque sur l'analyse

Protéine déterminée par la réaction du biuret.

Informations sur la sécurité

• Pictogrammes: GHS08
• Mention d'avertissement: Danger
• Mentions de danger: H334
• Conseils de prudence: P261 - P284 - P501
• Classification des risques: Resp. Sens. 1
• Code de la classe de stockage: 11 - Combustible Solids
• Classe de danger pour l'eau (WGK): WGK 3
• Point d'éclair (°F): Not applicable
• Point d'éclair (°C): Not applicable
• Équipement de protection individuelle: Eyeshields, Gloves, type N95 (US)