Réactifs de dissociation cellulaire
Pour reproduire leur environnement endogène, les phénotypes de cellules adhérentes (comme les cellules épithéliales) sont typiquement ensemencés sur des surfaces traitées pour la culture cellulaire, auxquelles ils se fixent afin de survivre et de proliférer. La propagation, la numération et l'analyse en aval nécessitent de dissocier les cellules adhérentes et les cellules issues de tissus solides pour créer des suspensions. Ces suspensions de cellules individuelles sont nécessaires pour le comptage des cellules, le ré-ensemencement en vue du repiquage, et les tests et analyses cellulaires.
Les réactifs de dissociation peuvent inclure des enzymes naturelles ou des alternatives non enzymatiques plus douces. Ces réactifs agissent en chélatant le calcium pour empêcher les cadhérines d'adhérer à la surface ou les unes aux autres, libérant ainsi les cellules de ces surfaces au cours du processus de culture. Les réactifs de dissociation cellulaire qui sont utilisés dans le workflow de culture cellulaire peuvent être spécifiques à certains substrats de la matrice extracellulaire (MEC).
Notre collection complète de réactifs de dissociation cellulaire comprend :
Trypsine, trypsine recombinante et trypsine StableCell™
La trypsine, protéase à sérine, est l'une des enzymes de détachement les plus couramment utilisées avec les lignées de cellules adhérentes et pour la dissociation des tissus. Il a été montré que les préparations de trypsine brutes sont typiquement plus efficaces dans les deux applications, mais une incubation des cellules avec une concentration de trypsine trop élevée ou pendant trop longtemps risque d'endommager les membranes cellulaires et de provoquer la mort des cellules. Les cellules cultivées sont donc plus fréquemment retirées du substrat de culture par un traitement associant de la trypsine et de l'EDTA (acide éthylènediaminetétraacétique), avec une concentration en trypsine de 0,025 % à 0,5 %.
Les solutions de trypsine StableCell™ ont été mises au point de façon à avoir le même pouvoir de détachement cellulaire que les solutions de trypsine standard, mais sans avoir besoin de créer des aliquotes, de congeler puis de décongeler la trypsine. Cela permet de gagner un temps significatif pour le repiquage ou les expériences en se débarrassant de l'aliquotage et du temps de décongélation de la trypsine, et libère un espace précieux dans les congélateurs du laboratoire. Il est recommandé de conserver nos solutions de trypsine StableCell™ entre 2 et 8 °C, mais nos études indiquent que la trypsine StableCell™ conserve > 90 % de son activité et de ses performances lorsqu'elle est stockée à 37 °C.
Collagénase et dispase
La collagénase clive les liaisons peptidiques du collagène endogène à triple hélice. Du fait de sa capacité unique à hydrolyser le collagène endogène, elle est largement utilisée pour isoler les cellules de tissus animaux. Les collagénases sont présentes dans divers micro-organismes et dans un grand nombre de cellules animales différentes. La plus puissante est la collagénase "brute" sécrétée par la bactérie anaérobie Clostridium histolyticum.
Les dispases sont des protéases rapides, efficaces, douces et neutres, capables de séparer du substratum des feuillets épithéliaux intacts en culture. La dispase I est utilisée pour digérer les tissus pulmonaires, traiter les cellules en vue d'une coloration pour cytométrie en flux, et isoler les lymphocytes T CD4 murins.
Réactifs de dissociation pour cultures spécialisées
Pour dissocier ou détacher les types de cellule ou de tissu pouvant nécessiter une activité enzymatique plus douce, les solutions Accutase® et Accumax™ contiennent des enzymes efficaces à plus basse température. Ces solutions :
- Détachent efficacement les cellules souches embryonnaires et neuronales
- Assurent un détachement en douceur pour préserver la viabilité cellulaire et peuvent améliorer le rendement cellulaire
- Ne nécessitent aucune neutralisation
Analyse de cellules individuelles
L'analyse de cellules individuelles nécessite des cellules individuelles viables comme intrant lorsqu'on travaille avec des échantillons de tissus. Grâce à ces analyses, les chercheurs peuvent étudier les variations dans les populations de cultures cellulaires dans le cadre de la recherche sur les cellules souches, l'immunologie et le cancer. Découvrez nos réactifs de dissociation de haute qualité, qui sont essentiels pour optimiser les protocoles, créer de bonnes pratiques et garantir des données d'analyse de cellules individuelles fiables.
Ressources produits apparentées
- Brochure: Enzymes for Cell Dissociation and Lysis
- Trypsin Cell Dissociation Protocol
Trypsin is commonly used for dissociating adherent cells from surfaces. A wide variety of trypsin solutions are available to meet your specific cell line requirements.
- Tissue Dissociation Guide: Collagenase, Dispase, and Liberase Enzyme Types
Collagenase Guide.Collagenases, enzymes that break down the native collagen that holds animal tissues together, are made by a variety of microorganisms and by many different animal cells.
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