D4263

Désoxyribonucléase I from bovine pancreas

Standardized vial containing 2,000 Kunitz units of DNase I (D4527), vial of ≥0.25 mg total protein

• Synonyme(s) : DNase I, Désoxyribonucléate-5′-oligonucléotido-hydrolase
• Numéro CAS: 9003-98-9
• Numéro de classification (Commission des enzymes): 3.1.21.1 (BRENDA, IUBMB)
• Numéro CE : 232-667-0
• Numéro MDL: MFCD00130918
• Code UNSPSC : 12352204
• Nomenclature NACRES : NA.54

Propriétés

• Source biologique: bovine pancreas
• Forme: powder
• Activité spécifique: 1700—2300 U/vial
• Poids mol.: ~31 kDa
• Produit purifié par: chromatography
• Conditionnement: vial of ≥0.25 mg total protein
• Technique(s): DNA extraction: suitable
• Solubilité: 0.15 M NaCl: soluble 5.0 mg/mL, clear
• Adéquation: suitable for molecular biology
• Application(s): diagnostic assay manufacturing; diagnostic assay manufacturing
• Température de stockage: −20°C

Description

Application

La DNase I est utilisée lors d'une première étape pour couper l'ADN afin d'y incorporer des bases marquées. La DNAse I de Sigma a été utilisée, avec d'autres enzymes, pour le prélèvement et la dissociation de cellules tumorales lors de l'isolement et de la caractérisation moléculaire des cellules souches cancéreuses de tumeurs mammaires de souris MMTV-Wnt-1.[1]

La désoxyribonucléase I de pancréas de bovin a été utilisée pour établir que les désoxyribonucléases I de mammifères se classent en trois types selon leur concentration tissulaire. La désoxyribonucléase I de pancréas de bovin a également été utilisée dans une étude visant à comparer les trois structures primaires de désoxyribonucléases isolées dans le pancréas de bovins, d'ovins et de porcins.

Produit utilisé pour éliminer l'ADN présent dans les échantillons de protéines.

Actions biochimiques/physiologiques

La DNase I est une endonucléase qui agit sur les liaisons phosphodiester adjacentes à des pyrimidines et qui produit des polynucléotides ayant des groupements 5′-phosphate terminaux. En présence de Mg²⁺, la DNase I clive indépendamment chaque brin d'ADN et les sites de clivage sont aléatoires. Les deux brins d'ADN sont clivés approximativement au niveau du même site en présence de Mn²⁺.[2] Il a été montré que le pH optimal se situe entre 7 et 8. Les cations divalents tels que Mn²⁺, Ca²⁺, Co²⁺ et Zn²⁺ sont des activateurs de cette enzyme.[3] Une concentration en Ca²⁺ de 5 mM la stabilise vis-à-vis de la digestion protéolytique. La DNase I de pancréas de bovin est constituée de quatre éléments, A, B, C et D, qui peuvent être distingués par chromatographie. Le rapport molaire des éléments A, B et C est de respectivement 4:1:1. L'élément D est présent en très faible quantité.[4] Le 2-mercaptoéthanol, les chélateurs, le dodécylsulfate de sodium (SDS)[5] et l'actine[6] sont connus pour inhiber l'activité de cette enzyme.

Caractéristiques et avantages

Élimination efficace de l'ADN : La désoxyribonucléase I issue de pancréas de bovin est une endonucléase qui clive les deux brins de l'ADN de manière aléatoire, ce qui en fait un un moyen fiable pour éliminer l'ADN présent dans les échantillons de protéines.

Produit polyvalent : Cette enzyme peut être utilisée pour couper l'ADN, incorporer des bases marquées dans l'ADN, ou isoler et caractériser sur le plan moléculaire les cellules souches cancéreuses dans les tumeurs mammaires murines. Elle est également utile dans les études comparatives sur la désoxyribonucléase isolée à partir de pancréas de bovin, d'ovin et de porc.

Stable : Cette enzyme reste active jusqu'à cinq heures à 60 °C entre pH 5 et 7 et peut être conservée jusqu'à une semaine à −20 °C sans perte notable d'activité. La stabilité de ce produit en fait une option pratique et rentable.

Définition de l'unité

Une unité Kunitz produit une ΔA₂₆₀ de 0,001 par minute et par millilitre, à pH 5,0 et à 25 °C, avec de l'ADN de type I ou III comme substrat.

Notes préparatoires

La poudre d'enzyme peut être reconstituée dans de l'eau ou tout tampon de pH 4,0 à 9,0, à l'exception des tampons phosphates. Les chélateurs de calcium doivent être évités. Une solution de DNase I à 10 mg/ml dans du NaCl 0,15 M peut perdre au maximum 10 % de son activité lorsqu'elle est conservée en aliquotes pendant une semaine à −20 °C. La perte d'activité peut atteindre près de 20 % si la même solution est conservée en aliquotes entre 2 °C et 8 °C. Elle reste active pendant 5 heures maximum à 60 °C entre pH 5 et pH 7 et devient inactive après moins de 10 minutes à 68 °C. Sa perte d'activité est de 6 % par heure dans un tampon acétate (pH 5,0) ou un tampon Tris (pH 7,2) à une concentration de 1 mg/ml.

Remarque sur l'analyse

Protéine déterminée par la réaction du biuret.

Informations sur la sécurité

• Pictogrammes: GHS08
• Mention d'avertissement: Danger
• Mentions de danger: H334
• Conseils de prudence: P261 - P284 - P501
• Classification des risques: Resp. Sens. 1
• Code de la classe de stockage: 11 - Combustible Solids
• Classe de danger pour l'eau (WGK): WGK 3
• Point d'éclair (°F): Not applicable
• Point d'éclair (°C): Not applicable
• Équipement de protection individuelle: Eyeshields, Gloves, type N95 (US)