AB3200

Anticuerpo anti-LIM-1

Chemicon^®, from rabbit

• Sinónimos: Anti-Anti-LIM-1, Anti-Anti-LIM1
• UNSPSC Code: 12352203
• NACRES: NA.41
• eCl@ss: 32160702
• Conjugate: unconjugated
• Clone: polyclonal
• Application: ICC, IF, IHC, IP, WB
• Citations: 6

Propiedades

• biological source: rabbit
• Quality Segment: 100
• conjugate: unconjugated
• antibody form: purified immunoglobulin
• antibody product type: primary antibodies
• clone: polyclonal
• species reactivity: human, frog, fish, mouse
• manufacturer/tradename: Chemicon^®
• technique(s): immunocytochemistry: suitable, immunofluorescence: suitable, immunohistochemistry: suitable (paraffin), immunoprecipitation (IP): suitable, western blot: suitable
• NCBI accession no.: NM_005568.2
• UniProt accession no.: P48742
• shipped in: wet ice
• target post-translational modification: unmodified
• Gene Information: human ... LHX1(3975)

Descripción

Immunogen

Porción C-terminal de la proteína LIM-1 de rana.

Application

Categoría de investigación
Neurociencia

El anticuerpo anti-LIM-1 detecta el nivel de LIM-1 y se ha publicado y validado para utilizar en IF, IP, WB, IC e IH(P)

Inmunohistoquímica: 1:200-1:1 000 (pescado y monturas enteras 1:500) Fijador recomendado MEMFA.

Nuestra foto se produjo a partir de fijación por inmersión de embriones de pollo en PFA al 4 % en frío durante 15-30 minutos, luego se realizó el corte en un criostato.

Actúa en cortes incluidos en parafina cuando los cortes están fijados ligeramente con PFA o fijados con acetona, etanol o el fijador que se sugiere a continuación.

PROTOCOLO DE INMUNOHISTOQUÍMICA SUGERIDO PARA AB3200

El mejor fijador es MEMFA. Disolución madre x10 para MEMFA: MOPS 1 M, EGTA 20 MM. MgSO4 10 mM, formaldehído al 38 %. Fijación 1 hora, 2 x 15 min metanol. Siguiendo este protocolo los embriones pueden conservarse en metanol a -20°C indefinidamente o incluirse inmediatamente en paraplast. Los mejores resultados, en cortes de parafina de 6-10 micras de grosor. 2) Tinción tras la desparafinización en xileno y una serie de alcoholes, lavar dos veces en agua.. Bloquee el reactivo Boehringer Mannheim al 2 % en ácido maleico 0,1 M, pH 7,5, NaCl 150 mM durante una hora a temperatura ambiente. 3) Diluya el AB3200 en el mismo reactivo bloqueante e incube durante toda la noche a 4°C o durante al menos 5 horas. Lave tres veces en PBS, 10 min cada una. 4) Incube con anticuerpo secundario conjugado con fosfatasa alcalina (por ejemplo, Chemicon número de referencia AP132A. Revele con BCIP/TNBT (Número de referencia Chemicon ES007-100 ml).5) Para los cortes, utilice siempre los portaobjetos silanizados Digene o Superfrost plus de Fisher, ya que es posible que a veces tenga que hervir los cortes en urea 6 M durante 5-6 min. en el microondas a una potencia del 80 % después de la desparafinización para aumentar la señal. Esto es especialmente útil si los tejidos fueron fijados en PFA. 6) A veces es necesario preagotar el anticuerpo en embriones hiperfijados para reducir el ruido de fondo (en especial para especies de tinción distintas de la rana y para montajes enteros). Procedimiento: hiperfije embriones de rana o de pez en MEMFA durante 36-48 horas en embriones RT 30-50. Lave dos veces en metanol (véase antes). Aplique el anticuerpo en la dilución final en el reactivo bloqueante durante una hora sobre la mesa basculante. Recoja el sobrenadante y aplique a sus embriones o cortes. Para montajes completos, utilice el siguiente procedimiento: después de fijación, metanol y PBS; bloqueo en PBST + suero (PBS + 2 mg/ml BSA + Triton X100 al 0,1 % + 10% de suero animal) una hora a temperatura ambiente. Añada el primer anticuerpo en PBST + suero e incube durante la noche a 4°C. Lave en PBST (sin suero) 4 veces durante 2 horas. Añada el anticuerpo secundario diluido en PBST + suero durante la noche a 4°C. Lave en PBST cuatro veces durante 2 horas. Revele la tinción.

No utilice tejidos fijados durante la noche en PFA. El anticuerpo no actuará.

Inmunocitoquímica: 1:500 en línea de células P19, ligeramente fijada (PFA al 2 %) durante 5-15 minutos, permeabilizada con triton X-100 al 0,1 % o metanol (5 ′ g secado al aire).

Inmunotransferencia Western: 1:3 000-1:6 000

Inmunoprecipitación. 1:200

Inmunofluorescencia 1:100

El usuario final debe determinar las diluciones de trabajo óptimas.

Subcategoría investigación
Neurociencia del desarrollo

Marcadores neuronales y de la glía

Biochem/physiol Actions

Reconoce la LIM-1. Este anticuerpo no parece experimentar reacción cruzada con la LIM-5 (el homólogo más cercano de la LIM-1 en rana) en cortes de tejido, pero sí muestra reacción cruzada con LIM-5 en Western blot e inmunoprecipitación.

Physical form

Inmunoglobulina purificada

Presentación: Purificada

Preparation Note

Mantener a 2-8°C en alícuotas no diluidas durante un máximo de 6 meses.

Legal Information

CHEMICON is a registered trademark of Merck KGaA, Darmstadt, Germany

Disclaimer

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Información de seguridad

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• Clase de almacenamiento: 12 - Non Combustible Liquids