Preparación de los medios de cultivo microbiológico
La preparación de los medios de cultivo microbiológico es el proceso de mezcla de nutrientes, agentes amortiguadores y agentes destinados al mantenimiento del equilibrio osmótico, además de inhibidores o indicadores selectivos para crear un agar o caldo que sustente el crecimiento y la diferenciación de los microorganismos. La preparación de los medios de cultivo microbiológico es una tarea habitual en el control regular de los microorganismos descomponedores y patógenos en las muestras microbiológicas.
Tipos de medios de cultivo
Los medios de cultivo microbiológico deben proporcionar condiciones de crecimiento óptimas para todos los microorganismos o para tipos específicos de microorganismos. La composición precisa de un medio depende de la especie que vaya a cultivarse y del objetivo de la aplicación. El pH del medio debe ajustarse en función de los microorganismos. Los medios de cultivo microbiológico se clasifican en función de diversos parámetros, como los componentes químicos, su característica física y su función. A continuación se describen los tipos de medios definidos por esos parámetros.
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Clasificación de medios de cultivo microbiológico por composición química
Medio sintético (definido), es un medio con un compuesto químico definido utilizado habitualmente para cultivar fotoautótrofos, como las cianobacterias y los protistas fotosintéticos. Se utiliza mucho en investigación para estudiar el metabolismo de los microorganismos.
Medios complejos, son medios que poseen componentes químicos no definidos, como peptonas, extracto de carne y extracto de levadura, que satisfacen los requerimientos nutricionales de diferentes microorganismos. Se utilizan para cultivar microorganismos exigentes con requerimientos nutricionales complejos.
Medios de cultivo microbiológico en función de su característica física
En los medios sólidos se utiliza agar-agar al 1-7 % o gelatina al 10-20 % para solidificar el caldo líquido. Los medios sólidos se utilizan para aislar diferentes microorganismos entre sí, aislar cultivos puros, realizar ágares inclinados y ágares para siembra por punción en profundidad.
Los medios líquidos no contienen productos solidificantes. Después de la inoculación y la incubación, las células se hacen visibles en forma de una pequeña masa o de un enturbiamiento del caldo.
Medios de cultivo microbiológico según el método de preparación
Los medios listos para usar son medios sólidos o líquidos suministrados en placas, frascos, tubos u otros recipientes listos para ser utilizados o para utilizarse después de fundir y enriquecer.
Los medios preparados a partir de formulaciones comerciales deshidratadas son medios en forma seca que requieren rehidratación y procesamiento antes de su uso, lo que produce un medio completo o bien un medio incompleto al que se añaden suplementos antes de su utilización.
Los medios preparados a partir de cada uno de sus componentes son medios producidos por un laboratorio de microbiología por completo a partir de cada no de sus ingredientes.
Los medios a voluntad se producen mediante un sistema que mantiene el medio de cultivo estéril muy concentrado disponible en un laboratorio durante varios días. Por dilución con agua estéril, puede producir una cantidad requerida de medio listo para usar a voluntad, sin que haya que esterilizarlo en autoclave.
Preparación de medios para cultivo microbiológico
La preparación de los medios a partir de formulaciones comerciales deshidratadas debe realizarse siguiendo las instrucciones del fabricante. La formulación de ingredientes básicos, como peptonas, extractos de levadura, agar, sustancias amortiguadores y antibióticos, se modifica hasta alcanzar la consistencia del medio. Se disuelve en agua destilada la cantidad requerida de medio deshidratado o de cada uno de los ingredientes mediante agitación continua seguida de calentamiento, si es preciso. Los medios que contienen agar deben empaparse adecuadamente con la agitación apropiada antes de calentar. El pH debe ajustarse, y el medio dispensarse en los recipientes apropiados para esterilización con calor húmedo en un autoclave. Las sustancias termosensibles (proteínas, enzimas) se esterilizan utilizando membranas de filtración.
Los medios de cultivo deben almacenarse a las temperaturas especificadas para evitar que se modifique su composición, y no más allá del periodo de validez del producto. La preparación y la conservación asépticas son esenciales para proteger los medios de cultivo de la contaminación microbiana. La pérdida de agua durante el almacenamiento puede reducirse al mínimo utilizando un envoltorio impermeable o almacenando a 5 °C ± 3 °C. La degradación química, por ejemplo la oxidación o la pérdida antimicrobiana, puede retrasarse mediante protección contra la luz, el calor y la deshidratación.
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