Análisis de pirógenos
Los análisis de pirógenos constituyen una etapa fundamental para garantizar la inocuidad de los productos farmacéuticos de administración por vía parenteral y los productos médicos. Forma parte de las pruebas obligatorias para la liberación al mercado de un producto con la finalidad de evitar reacciones febriles potencialmente mortales inducidas por pirógenos. La prueba de activación de monocitos (MAT) puede detectar pirógenos endotoxinas y no endotoxinas en una sola prueba in vitro.
Visión general de la sección
Prueba de activación de monocitos (MAT)
Utilizada para detectar pirógenos endotoxinas y no endotoxinas en los productos de administración por vía parenteral, como los productos farmacéuticos y los productos médicos, la MAT constituye una alternativa in vitro a la experimentación convencional con animales de acuerdo con las normativas.
La prueba de pirógenos en conejos y la prueba de lisado de amebocitos de Limulus (LAL) se utilizan ampliamente para la detección de pirógenos. En ambos métodos se utilizan animales, y muestran algunas limitaciones. La prueba de pirógenos en conejos carece de solidez, ya que una reacción animal puede diferir mucho de una reacción humana. En la prueba de LAL, sólo se detectan endotoxinas, lo que provoca un riesgo para la seguridad al ignorar los pirógenos no endotoxinas que podrían estar presentes en la muestra analizada.
Para superar estas limitaciones, en 2010 se introdujo la prueba de activación de monocitos (MAT) en la Farmacopea europea como método de referencia para sustituir a la prueba de pirógenos en conejos (capítulo 2.6.30 de la EP), y se menciona en las guías de la FDA para el sector.
Nota: La Comisión de la Farmacopea Europea tomó la decisión de poner fin a la prueba de pirógenos en conejo de conformidad con el principio de las 3R, al considerar que la MAT es la mejor opción alternativa.
Lea el artículo y coméntelo más a fondo con nuestros expertos para comenzar el movimiento.
Prueba PyroMAT® in vitro para detectar pirógenos endotoxinas y no endotoxinas
El sistema PyroMAT® se basa en la línea celular Mono-Mac-6 y en la lectura de IL-6. Ofrece todas las ventajas de la prueba de activación de monocitos combinadas con los beneficios de utilizar una línea celular.
- Detección de una gran variedad de pirógenos: se garantiza la seguridad del paciente si se analiza la gama completa de pirógenos. Al igual que la prueba de pirógenos en conejos (RPT), la MAT es eficaz para la detección de pirógenos endotoxinas y no endotoxinas.
- Extensión de la gama de productos que puede analizarse: los métodos utilizados con más frecuencia, la RPT, la prueba de endotoxinas bacterianas (BET) o el LAL, están limitados por los tipos de productos que pueden analizar. La MAT ofrece más flexibilidad con respecto a sus aplicaciones.
- Ensayo in vitro que imita la reacción inmunitaria humana: para un robusto modelo predictivo que reduce la utilización de animales.
- Cumplimiento de las normativas y guías internacionales: en línea con la tendencia ética del sector y las autoridades normativas hacia la reducción del uso de experimentación con animales.
- Reactividad normalizada y elevada sensibilidad (LOD 0,05 UE/ml) Comodidad de una línea celular lista para usar que reduce el laborioso trabajo de laboratorio y evita la necesidad de un laboratorio de cultivo celular.
- Células cualificadas: además de ser citadas en la validación internacional del MAT, las células Mono-Mac-6 están cualificadas para la expresión de todos los receptores tipo Toll de superficie (TLRs) lo que asegura la detección de una amplia gama de pirógenos.
Más información sobre los controles positivos de pirógenos no endotoxinas.
Controles positivos de pirógenos no endotoxinas
El capítulo 2.6.30 de la Farmacopea Europea (prueba de activación de monocitos) exige que las pruebas preparatorias incluyan «al menos 2 ligandos no endotoxinas para los receptores de tipo Toll […]. La elección de los pirógenos no endotoxinas que se utilicen debe reflejar los contaminantes más probables para la preparación que se está examinando.»
Para responder a este requisito, ofrecemos una gama ampliada de controles positivos:
- Refleja los distintos tipos de contaminantes que suelen encontrarse en los procesos de producción farmacéutica (bacterias gramnegativas y grampositivas, virus y micoplasmas).
- Están dirigidos a varios receptores monocíticos de tipo Toll (TLR)
Obtenga más información sobre los controles positivos de pirógenos no endotoxinas.
- Detección de un amplio espectro de pirógenos: igual que la prueba de pirógenos en conejo (RPT), la MAT detecta tanto endotoxinas como no endotoxinas (NEP).
- Gama ampliada de productos que pueden analizarse: los métodos utilizados con más frecuencia, la RPT, la prueba de endotoxinas bacterianas (BET) o el LAL, están limitados por los tipos de productos con los que pueden utilizarse. La MAT ofrece más flexibilidad con respecta a sus aplicaciones.
- Un ensayo in vitro que imita la reacción inmunitaria humana: para un robusto modelo predictivo que reduce la utilización de animales.
- Cumplimiento de las normativas y guías internacionales: en línea con la tendencia ética del sector y las autoridades normativas hacia la reducción del uso de experimentación con animales.
- Sangre crioconservada combinada de 8 donantes: estar lo más cerca posible de la reacción inmune humana a los pirógenos.
Optimice o simplifique su método de análisis de pirógenos para una prueba de validación sencilla y rentable con nuestras ofertas de servicios:
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Comparación de los análisis de pirógenos en conejo, LAL y MAT |
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Recursos de productos relacionados
- Brochure: PyroMAT® and PyroDetect
Used to detect a broad range of pyrogens in parenteral products such as pharmaceuticals, biopharmaceuticals or medical devices, the MAT gives an in vitro alternative to conventional animal testing in accordance with regulatory guidelines.
- Article: Pyrogen Contamination Risk by Dr. Tim Sandle
Unlike the LAL test, the MAT is a powerful in vitro test for the detection of both endotoxin and non-endotoxin pyrogens (NEPs) acting via the toll-like receptors (TLRs) pathway.
- Data Sheet: Validation Method - PyroMAT® System
The Monocyte Activation Test (MAT) was introduced in the European Pharmacopeia (Chapter 2.6.30) in 2010, as a compendial method that can be used to replace the Rabbit Pyrogen Test (RPT).
- Infographic: MAT Implementation Workflow
Implementation of our Monocyte Activation Test (MAT), the PyroMAT® system.
- Poster: Pyrogen Detection in Pharma QC: Moving Away from the RPT
We have demonstrated that the MM6 cells are suitable for the detection of various NEPs targeting different monocytic toll-like receptors, making MM6 cell line-based MAT suitable for RPT replacement.
- Application Note: Detection of NEP by MAT Using the PyroMAT® System
The monocyte activation test (MAT) is the human in vitro alternative to the rabbit pyrogen test, and allows the detection of the full range of pyrogens, including endotoxins and non-endotoxin pyrogens (NEPs).
- Application Note: Detection of Pyrogens in Vaccines with PyroMAT® System
The PyroMAT® System uses cryo-preserved Mono-Mac-6 (MM6) human monocytic cells as a source of monocytes. The response to pyrogenic substances is determined by measurement of Interleukin-6 (IL-6) produced by the MonoMac 6 cells.
- Questions & Answers about MAT. Dr. Tim Sandle Reponds
Risk considerations for the presence of pyrogens and the need for the MAT test in pharmaceutical processing.
- White Paper: Monocyte Activation Test
In this context, the in vitro pyrogen test based on human cells offers a valuable alternative to the rabbit pyrogen test.
- Application Note: Detection of Pyrogens in Hormone-based Drugs
For the quantification of the pyrogenic load of a sample, method A in accordance with the European Pharmacopeia can be conducted.
- Application Note: Detection of Pyrogens in FBS with PyroMAT® System
The response to pyrogenic substances is determined by measurement of Interleukin-6 (IL-6) produced by the Mono-Mac-6 cells. For this purpose, the ELISA-microplate supplied in the kit is coated with an antibody specific to IL-6.
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