Sejtkultúra hibaelhárítás

A sejtkultúra a biológiai rendszerek modellezésének egyik legalapvetőbb technikájává vált, és egyre nagyobb jelentőséggel bír a biotechnológiai és a gyógyszeripari ágazatban, valamint az élettudományi kutatólaboratóriumokban is nélkülözhetetlen folyamat. Bár ez a technika rendkívül könnyen hozzáférhető, a sejtek sikeres szaporítását állománybővítés vagy modellezési kísérletek céljából a sejtek életképességét negatívan befolyásoló szennyeződés vagy egyéb körülmények akadályozhatják. A sejtek megosztásának általános gyakorlata olyan sejtállományok keresztszennyeződésének jól publikált bizonyítékaihoz vezetett, amelyek azonosságát korábban nem kérdőjelezték meg. A sejtek sikertelenségének gyakori és ritka okainak azonosítása növelheti a laboratóriumi hatékonyságot, javíthatja a sejttermékek hozamát, és biztosíthatja a in vitro modellekből származó értelmes, megbízható downstream adatokat.        

Cellavonalak téves azonosítása

Újabb tanulmányok becslései szerint a téves azonosítás a használt sejtvonalak akár egyharmadát is érintheti. Ezek a felfedezések megkérdőjelezhetik a biológiai rendszerekkel kapcsolatos, a sejtvonalmodellek eredményein alapuló publikált megállapításokat. A sejtvonalak téves azonosításához/keresztszennyeződéséhez vezető tényezők közé tartoznak:

• Agresszív sejtvonalakkal való szennyeződés: Az izoenzim-analízis kimutatta, hogy számos sejtvonal osztozik egy ritka enzim izoformán a HeLa sejtekkel. Azóta bebizonyosodott, hogy a HeLa a leggyakoribb invazív sejtvonal a tenyésztési állományokban.
• Dokumentációs és címkézési gyakorlat: A sejttenyésztési lombikokat, lemezeket, kriovialisokat és a fagyasztótartályokat egyértelműen fel kell címkézni, és a folyékony nitrogén tárolási térképeket szigorúan vezetni kell, hogy tükrözzék a sejtállományok hozzáadását, kivonását és áthelyezését.
• Cellavonal kölcsönzése: A sejtek megosztása a szomszédos laboratóriumok között gyakori gyakorlat, amely a sejtvonalak azonosításának hibáihoz vezet. A sejtvonalakat csak jó hírű sejttárolóktól szabad beszerezni, mint például az ECACC, a Public Health England European Collection of Authenticated Cell Cultures.

Tájékozódjon a sejtvonalak keresztszennyeződésének gyakori okairól és arról, hogyan védheti meg munkáját a következményektől.

A sejttenyészetek mikrobiális szennyeződése

A sejttenyésztési táptalajok és az inkubációs körülmények ideális környezetet biztosítanak a sejtek, valamint a bakteriális, gombás és vírusos szennyeződések számára. Az aszeptikus tenyésztési technika gondos betartása érdekében a tenyészeteket rendszeresen mikroszkóposan meg kell vizsgálni a bakteriális és gombás behatolók kimutatására. Néhány mindenütt jelenlévő mikrobiális szennyeződés elkerüli a vizuális észlelést, mivel a becslések szerint az összes tenyészet akár 30%-a mycoplazmával fertőzött lehet. A láthatatlan mikoplazma kimutatására tervezett reagensek és készletek gyakran PCR-amplifikáción alapulnak, amely a vírusos szennyeződések kimutatására is használható.

Tudja meg, hogyan tartsa kultúráit mentes a biológiai és kémiai szennyeződésektől.

Szegény sejtnövekedés

Frusztráló, amikor az egyébként egészségesnek tűnő sejtek nem érik el a konfluenciát. Ha a szennyeződéseket kizártuk, az egészséges sejtduplázódás néhány lehetséges akadálya a következő:

• A tenyésztési/fagyasztási közeg állapota és minősége
• A kiegészítők minősége és alkalmazáshoz való alkalmassága
• Pontosulatlan sejtszámlálás a fagyasztás vagy a passzázs során
• /ul>

  Ha a sejtek életképesnek tűnnek, de nem növekednek, Tanulja meg, mit tehet a tenyésztési körülmények javításáért az optimális növekedés érdekében, mielőtt visszamegy a folyékony nitrogénhez.

A tapadó sejtek fenotípusainak leválása

A tapadó sejtek spontán leválhatnak a kultúrában, egyesével vagy lapokban. Ha az adherens kultúrák nem maradnak így, tudja meg, mit kell ellenőrizni és hogyan lehet helyreállítani a kohéziót a kultúrában.

A sejtek összecsomósodása

A szuszpenzióban lévő sejtek egyesével utánozzák a in vivo körülményeket. Ha a sejtek csomósodni kezdenek, annak oka a ragadós nukleinsavak lehetnek, amelyek a táptalajban jelen vannak, amikor a tenyészeteket stressznek teszik ki. Mi rejtőzik a médiában, ami a sejtek csomósodását okozhatja? Itt olvashat többet arról, hogyan lehet száműzni a csomósodást a kultúrákból.

Cellhalál a kultúrában

Amikor a sejtek elhalnak a kultúrában, először ki kell zárni a mikroorganizmusokkal való szennyeződést. Egyéb tényezők, amelyek hozzájárulhatnak a sejtek rossz egészségi állapotához vagy a fenotípussal összeegyeztethetetlen viselkedéshez, a következők:

• Fagyasztott állomány körülményei
• Cellapasszázsszám/túltengés
• Környezeti stressz
• Túlemésztés disszociációs enzimekkel

A megfelelő berendezések, a minősített reagensek és a szakértői protokollok kulcsfontosságúak a váratlan sejttenyésztési eredmények megoldása.

Szemcsék a táptalajokban

Ha nem szennyeződésről van szó, a táptalajokban lévő szemcséknek gyakran szervetlen magyarázata van. Értse meg a kiegyensúlyozott puffer- és táptalaj-összetevőket, és Tudjon meg többet a táptalaj-összetevők szuszpenzióban tartásáról.