Sejtszámlálás és egészségügyi elemzés
A tenyészetben lévő sejteket meg kell számolni a megduplázódási idő nyomon követéséhez és a kísérletek vagy gyártási folyamatok előtti mennyiségi meghatározáshoz. A tenyésztett sejtek nemcsak a proliferáció, hanem az életképesség, a citotoxicitás és a sejtek egészségének egyéb mérőszámai tekintetében is rutinszerű megfigyelést igényelnek. A vizsgálat kiválasztása a tenyészetben lévő sejtek típusától, a vizsgálati alkalmazástól és a kívánt áteresztőképességtől függ. Kritikus fontosságú a tenyésztett sejtek számszerűsítése vagy megszámlálása a továbbtenyésztés vagy a transzfekciókban, genomikai vizsgálatokban, krioprezerválásban vagy más manipulációkban történő későbbi felhasználás előtt.
Kapcsolódó műszaki cikkek
- A Scepter™ sejtszámláló egy hordozható eszköz, amely a sejtek következetes számlálását közvetlenül a tenyésztőháztetőbe hozza, kevesebb mint 30 másodperc alatt.
- Celluláris apoptózis vizsgálatok a programozott sejthalál kimutatására Annexin V, kaszpáz és TUNEL DNS-fragmentációs vizsgálatok segítségével.
- A Scepter™ számlálás 7-10-szer gyorsabb, mint a hemocitometria - és gyorsabb, mint más automatizált számlálók. Tudjon meg többet arról, hogyan működik ez a csodálatos technológia
- Detect mycoplasma contamination in cell culture through the PCR, DNA stain, or culture tests. Discover mycoplasma prevention, elimination, and detection kits.
- Mindent látni (17)
Kapcsolódó protokollok
- MTT vizsgálati protokoll a sejtek életképességének, proliferációjának és citotoxicitásának mérésére. Útmutató az MTT-reagens elkészítéséhez és alkalmazási példák.
- A metabolikus stabilitási vizsgálatok a vegyület eltűnési sebességét mérik mikroszomális vagy hepatocita inkubációkban az intrinsic clearance kiszámításához.
- XTT assay protocol for measuring cell viability, proliferation, activation and cytotoxicity. Instructions for XTT reagent preparation and examples of applications.
- WST-1 assay protocol for cell viability and cytotoxicity measurements with preparation instructions, applications, FAQs, and troubleshooting.
- The Scepter™ cell counter uses the Coulter principle of impedance-based particle detection to reliably and accurately count every cell in your sample.
- Mindent látni (12)
További cikkek és protokollok keresése
Kézi sejtszámlálás
A Neubauer-rácsokkal ellátott hemocitométerhez hasonló sejtszámláló kamrák a kézi/visuális sejtszámlálás gyakori eszközei. Egy kis aliquot sejt-szuszpenziót töltünk a ráccsal ellátott, precíziósan csiszolt üveg eszköz kamrájába , ahol az kapilláris hatás révén szétoszlik a maratott rácson. A sejteket mikroszkóp alatt vizualizálják és kézi számlálóval megszámolják. A sejtkoncentráció kiszámításához a kamra előre meghatározott térfogatát és a rácsrendszert használják. Léteznek képalkotás-alapú rendszerek, amelyek automatizálják a számlálási folyamatot.
Automatizált sejtszámlálás
Néhány automatizált sejtszámláló eszköz ugyanazokat a vizuális számláló festékeket és elveket használja, mint a hemocitometriában. A tárgyfelismerésre támaszkodó automatizált sejtszámláló készülékekkel ellentétben a Coulter-elvre épülő eszközök a használhatóság és a pontosság miatt váltak népszerűvé. A Coulter-számlálók a sejtszuszpenziókat egy érzékelőn keresztül pumpálják, amely az elektromos ellenállás változása alapján érzékeli a sejteket. Ez lehetővé teszi a sejtek, még a kis sejtek megbízhatóbb felismerését és a nagy pontosságú sejtszámlálást. A hordozható, kézben tartott (pipettához hasonló) modellek lehetővé teszik a közvetlen sejtszámlálást a tenyészkamrából.
Cellaviabilitási vizsgálatok
DNS-szintézis: A sejtekben zajló aktív DNS-szintézis nyomon követése az alapja egyes sejtproliferációs vizsgálatoknak. A DNS-replikáció mérhető módosított nukleozidok, például radioaktív 3H-Thymidin vagy nem radioaktív bromodeoxiuridin (BrdU) beépítésével, amelyet antitesttel detektálunk.
Metabolikus aktivitás: A metabolikus aktivitást mérő kalorimetriás vizsgálatok alkalmasak a sejtproliferáció, a sejtek életképességének és a citotoxicitás elemzésére. A tetrazoliumsók, például az MTT, XTT és WST-1 redukciója színes formazánvegyületekké csak metabolikusan aktív sejtekben történik. Az ATP jelenléte szintén a metabolikus aktivitás indikátora. A szentjánosbogár luciferáz riporter tesztben az osztódó sejtek által termelt ATP-t a D-Luciferin oxidálására használják, amely biolumineszcens fényt ad ki leolvasásként.
Festékkizárás: A Trypan-kék festést általában az életképes sejtek számbavételére használják. Ez a módszer azon az elven alapul, hogy az élő sejtek nem veszik fel a festéket, míg az elhalt sejtek felveszik a festéket, és mikroszkóp alatt kéknek tűnnek.
Fluoreszcens sejtéletképességi vizsgálatok: Az 5(6)-Karboxifluoreszcein-diacetát N-szuccinimidil-észter (CFSE) jelölés népszerű választás a sejtpopulációban befejezett sejtosztódási ciklusok számának mérésére. Egy másik membránáteresztő festék, a Calcein-AM önmagában nem fluoreszkál, de erős zöld fluoreszcenciát bocsát ki, amint egy életképes sejtben hidrolizálódik. Ezzel szemben a nukleáris festék, a propídium-jodid (PI) csak az elhalt sejtek sérült membránján keresztül juthat el a sejtmagba. Mivel mind a Calcein, mind a PI-DNS 490 nm-es fénnyel gerjeszthető, az élő/holt sejtek egyidejű megfigyelése egy egyszeri gerjesztésű fluoreszcencia-mikroszkóppal lehetséges.
Az olvasás folytatásához jelentkezzen be vagy hozzon létre egy felhasználói fiókot.
Még nem rendelkezik fiókkal?