Sejtnövekedés és fenntartás
A sejtkultúra alapvető technika az élettudományi kutatásban, amelyet releváns biológiai modellek létrehozására, illetve rekombináns fehérjék, vírusrészecskék vagy biológiai terápiák előállítására használnak. A tenyésztett sejtek, például baktériumok, élesztőgombák és emlőssejtek növekedését és fenntartását biológiai biztonsági szekrényben (gyakran sejt- vagy szövettenyésztő csuklyának nevezik) végzik, megfelelő steril technikával a mikrobiális és kémiai szennyeződés megelőzése érdekében.
A sejttenyésztés típusai
Az emlőssejtek tenyésztésének két legjelentősebb megközelítése az elsődleges tenyésztés és a folyamatos tenyésztés. Az elsődleges kultúrák közvetlenül emberi vagy állati szövetekből származnak, és élettartamuk a kultúrában a sejtek öregedése miatt korlátozott. A folyamatos kultúrák a kultúrában "halhatatlan"-nak tekinthetők, mivel gyakran a betegek rákos szövetéből származnak. A sejtvonalakat a sejtek immortalizálásával is létre lehet hozni, és sorozatosan szaporíthatók vagy meghaladhatók számos sejtosztódási cikluson keresztül, vagy a végtelenségig.
Kapcsolódó műszaki cikkek
- Know when to use antibiotics to prevent bacterial or fungal, mycoplasma, or viral contamination in cell culture and find suitable antibiotics or other biological agents.
- Antibiotic kill curve is a dose response experiment in which mammalian cells are subjected to increasing amounts of selection antibiotic
- Poly-Lysine enhances cell binding with positively-charged surface ions, optimizing electrostatic interaction on culture surfaces for increased cell attachment.
- Cell Culture Freezing Tips - Are you following best practices for cryostorage? We have cool tips for protecting your cells.
- Experimental studies measuring cell proliferation have had implications in cancer biology, immunology, cell biology, and developmental biology.
- Mindent látni (16)
Kapcsolódó protokollok
- Cryopreservation affects post-thaw recovery, viability, and functionality. Stress during freezing and suboptimal media lead to cell death.
- Dilute fibronectin for cell attachment, varying per cell type. Coating protocol, products, and FAQs provided.
- Discover our collection of primary human hepatic Kupffer cells and protocol for thawing, plating, and growing Kupffer cells. Find the formulation for Kupffer culture maintenance media.
- Discover our collection of primary human hepatic sinusoidal endothelial cells, a protocol for thawing, plating, and growing HHSECs, and a recipe for our HHSEC maintenance media formulation.
- Discover our primary human hepatocytes and plating and maintenance media formulations. Explore our protocol for plateable primary hepatocyte cell culture.
- Mindent látni (6)
További cikkek és protokollok keresése
A sejtek szuszpenzióban vagy 2D monorétegként tenyészthetők, amely a szövettenyésztő lombikhoz vagy a multiwell lemezhez rögzül. A tenyésztési módszert a sejtek származási szövete határozza meg; a vérből származó sejtek általában szuszpenzióban, míg a szilárd szövetekből származó sejtek jellemzően monolayerben növekednek.
A 3D-s sejttenyésztési modellek (organoidok és szferoidok) általában úgy tekinthetők, hogy jobban utánozzák a sejtek in vivo környezetét, mint a 2D-s felületeken tenyésztett sejtek. A szferoidokat gyakran rákos sejtvonalakból vagy tumorbiopsziákból (betegből származó xenotranszplantátumok, vagy PDX) képezik szabadon lebegő sejtaggregátumokként ultra-alacsony kötődésű lemezeken, míg az organoidokat általában ECM-hidrogél mátrixba ágyazott, majd differenciált szöveti őssejtekből nyerik.
A sejtnövekedés fázisai
A megfelelő sejtnövekedés biztosítása kritikus fontosságú a sejttenyésztési vizsgálatokból származó pontos adatok gyűjtéséhez. A sejtszám meghatározható hemocitométerrel vagy automatizált sejtszámlálóval, amely pontosabb sejtszámot biztosít.
A sejtnövekedés a tenyészetben általában négy fázisban zajlik:
- Lag fázis - A sejtek alkalmazkodnak a tenyésztési körülményekhez, és nem osztódnak.
- Log (logaritmikus) növekedési fázis - A sejtek aktívan osztódnak, így ez a legjobb szakasz, amely során a populáció növekedését értékelni lehet, illetve adatokat lehet gyűjteni. A késői log-fázis a legjobb időpont a sejtek passziválására (szubkultúrázására).
- Plató (stacionárius) fázis - A növekedés lelassul, amikor a sejtek megközelítik a 100%-os összefolyást, és a sejtek a legérzékenyebbek a stresszre vagy sérülésre, mivel a sejtszemét felhalmozódik és az erőforrások kimerülnek.
- Hanyatlási fázis - Az élő sejtek populációja csökken, mivel a sejthalál kerül túlsúlyba.
Cellkultúra médiumok, kiegészítők és reagensek
A tenyésztett sejteknek a növekedéshez tápanyagellátásra van szükségük. Az emlős sejttenyésztő közegeknek fiziológiás pH-t kell fenntartaniuk, emellett kiegyensúlyozott sókat, szénhidrátokat, aminosavakat, vitaminokat, zsírsavakat és lipideket, fehérjéket és peptideket, nyomelemeket és növekedési faktorokat kell biztosítaniuk. A magzati szarvasmarha szérum (FBS) a legszélesebb körben használt növekedési kiegészítő az emlős sejttenyészetben, mivel számos ilyen alapvető sejtszintű tápanyagot tartalmaz, és bizonyítottan támogatja a sejtek és szövetek növekedését a tenyészetben. A meghatározott táptalajt vagy csökkentett állati összetételű komponenseket igénylő alkalmazásokhoz a xeno-mentes táptalajkészítmények ismert összetételű, állatmentes készítményeket biztosítanak.
Mivel a táptalajok és kiegészítők gyakran gazdag tápanyagokat biztosítanak az opportunista mikrobák növekedéséhez, a sikeres sejttenyésztés aszeptikus technikát és rendszeres megfigyelést igényel, hogy biztosítsák a sejtpusztulást okozó vagy az in vivo-szerű növekedést zavaró szennyező anyagok hiányát. A mikroszkóposan nem megfigyelhető, gyakori mikrobiális szennyeződések esetében a mikoplazma kimutató reagensekkel végzett rutinszerű szűrés védi a kultúrákat és a szövetszaporító környezeteket.
A tenyészetek, mint például S. cerevisiae és P. pastoris (Pichia), gyakran használják a kutatásban rekombináns fehérjék expressziójának és a génfunkciók vizsgálatára. Az élesztőkultúra táptalajok összetételében jellemzően szereplő kritikus tápanyagok a pepton, az élesztőkivonat és a dextróz vagy glükóz.
Cellapasszázs tippek és trükkök
A sejtek passziválása alapvető lépés az általános sejtkultúrában a sejtek egészségének és optimális sejtnövekedésének fenntartása érdekében. Ez a bemutató elmagyarázza a sejtek passzázsának folyamatát, beleértve a konfluencia és a sejtsűrűség fontosságát. A sejtek passzázsának protokollja olyan folyamatokat foglal magában, mint a sejtek megfigyelése és megszámlálása, a sejtek tripszinizálása vagy disszociációja, valamint a sejtek új tenyésztőedénybe való visszatelepítése.
Cellakultúrás környezet és tenyésztőeszközök
A tenyésztett sejtek tenyésztése és kezelése egyszer használatos, steril műanyag eszközökkel történik, beleértve a szövettenyésztő lombikokat és multiwell lemezeket, szerológiai pipettákat, steril üvegfedeles szűrőket és steril fecskendőszűrőket. A műanyag szövettenyésztő lombikokat és lemezeket általában úgy kezelik, hogy hidrofil felületet biztosítsanak a megtapadó sejtek rögzülésének megkönnyítése érdekében. A 2D felületek alternatívájaként a mikroporózus membrán alapú lemezek fiziológiásabb növekedési környezetet biztosítanak az olyan összetett sejtvizsgálatokhoz, mint a sejtvándorlás, a sejt-sejt kommunikáció és a sejtpolarizáció.
A tenyésztett sejteket olyan hőmérsékleten és gázos környezetben kell tartani, amely ezeket a paramétereket abban a szervezetben rekonstruálja, amelyből származnak. A sejteket és tápfolyadékot tartalmazó tenyésztőedényeket általában olyan inkubációs készülékekben tartják, amelyek a hőmérséklet és a gázkeverékek pontos szabályozását biztosítják. A mikrofluidikát alkalmazó és a sejtek folyamatos tenyésztésben történő leképezését megkönnyítő kisméretű, asztali inkubációs rendszerek azonban a leghitelesebb környezetet biztosíthatják a prediktív in vitro modellekhez.
Az olvasás folytatásához jelentkezzen be vagy hozzon létre egy felhasználói fiókot.
Még nem rendelkezik fiókkal?