Cell Clumping hibaelhárítás

A sejtek csomósodása: áttekintés

A szuszpenzióban lévő sejtek különböző okokból kapcsolódhatnak egymáshoz és alkothatnak csomókat. A sejtek csomósodásának leggyakoribb oka a szabad DNS és sejttörmelék jelenléte a táptalajban, ami a sejtek lízisét követően következik be. A DNS ragacsos jellege miatt a sejtek és más törmelékek nagy csomókba tömörülnek. Az alábbiakban a sejtlízis és a DNS táptalajba történő felszabadulásának néhány oka szerepel.

• Túlemésztés: A túlzott kezelés proteolitikus enzimekkel - például a sejtek leválasztására általánosan használt tripszinnel - a sejtek csomósodását okozhatja
• Környezeti stressz: mechanikus erőhatás, ismételt fagyasztási/olvasztási ciklusok és egyéb környezeti stresszek felgyorsíthatják a sejtpusztulást, amelynek korai tünete lehet a sejt-sejt-összenövés.
• Szöveti dezaggregáció: Az egysejtes szuszpenzió készítése primer szövetekből kémiai, mechanikai vagy enzimatikus protokollok segítségével bizonyos mértékű sejtszakadáshoz vezethet. Kollagenáz általában az extracelluláris mátrix emésztéséhez van szükség, amikor szövetből egysejtes szuszpenziót állítunk elő. A disszociációs szerek megtekintése itt.
• Túlnövekedés: Amikor a sejtek elérik a konfluenciát, a sejtek líziséből származó sejttörmelék és szabad DNS túlzottan felhalmozódik.

Hibaelhárítás

A sejtek csomósodása csökkenti a kritikus tápanyagokhoz való hozzáférést, és ennek következtében akadályozza a sejtek általános növekedését. Emellett a sejtcsomósodás veszélyezteti az egyes sejtek tiszta előkészítését igénylő downstream vizsgálatokat (pl. áramlási citometria). Az alábbi táblázatban a csomósodás kiváltó okától függően megoldásokat javasolunk a megelőzésre.

A csomósodás oka	megoldás
Cellulízis és DNS-felszabadítás		DNase I használható a szövetek szétválasztása és a rendszeres sejttenyésztés során a különböző sejttípusok csomósodásának megelőzésére. Megjegyzés: A DNáz I maximálisan aktív kétértékű ionok (Mg2+, Ca2+)
Bivalens kationok jelenlétében	Chelátorok, mint például citrát és EDTA használhatóak a kalcium eltávolítására a sejttenyésztési közegből. Szérummentes, Ca2+/Mg2+mentes kiegyensúlyozott sóoldat is használható.
Cellsűrűség		A passzázs előtti ajánlott sejtsűrűségre vonatkozóan hivatkozzon a sejtvonal irodalmára vagy a közzétett jellemzőkre.
Kezelés		Kezelje óvatosan a sejteket, és pelletáláskor használja a megfelelő centrifuga beállításokat. A kisebb csomósodás feloldható triturálással vagy a sejtek óvatos fel-le pipettázásával.
Mikroplazma-szennyeződés	Vesszen el szennyezett sejteket, és fertőtlenítse a tenyésztőháztetőt és a sejtkultúra inkubátort. Kövesse a helyes laboratóriumi gyakorlatot a szennyeződés elkerülése érdekében.

Kapcsolódó termékek

Accutase	Tripszin<	DNSz I
Kollagenáz	Diszszociációs médiumok	Ca2+, Mg2+mentes médiumok
Trypsin-EDTA oldat	Benzonáz nukleáz	Look-out Mycoplasma Detection Kit