Kis molekulák HPLC
Kismolekulák elemzése
A kismolekula kis molekulatömegű (jellemzően 900 daltonnál kisebb molekulatömegű) vegyületet jelent. A kismolekulák néhány gyakori példája az aminosavak, lipidek, cukrok, zsírsavak, alkaloidok és mások.
A kismolekulák elválasztására különböző módszerek állnak rendelkezésre, többek között Nagy teljesítményű folyadékkromatográfia (HPLC), folyadékkromatográfia (LC), gázkromatográfia (GC), thin-layer-chromatography (TLC) és a kapilláris elektroforézis (CE). Továbbá az azonosításuk lehetőségei közé tartozik a nukleáris mágneses rezonancia spektroszkópia (NMR) vagy tömegspektrometria (MS). A tömegspektrometriával kapcsolt folyadékkromatográfia (LC-MS) az utóbbi években a kismolekulák azonosításának kulcsfontosságú technikájává vált.
A lehető legjobb eredmények elérése a nagy teljesítményű folyadékkromatográfia (HPLC), UHPLC vagy LC-MS kis molekulák elemzése során a legmegfelelőbb állófázis és mobilfázis körülmények kiválasztásától függ. Az analit kémiai összetétele kulcsfontosságú a legmegfelelőbb oszlopkémia kiválasztásához. Más szempontok, mint például a sebesség, a mintamátrix és a vegyületek száma határozzák meg a legmegfelelőbb alapanyagot az állófázishoz.
Kromatogramok keresése
Kapcsolódó műszaki cikkek
- Chromolith® HPLC and UHPLC columns are made from monolithic silica with a bimodal pore structure using sol-gel technology.
- Review the effects of efficiency (plate number), retention, and selectivity factors on HPLC resolution. See how factors relate to particle and column characteristics via the HPLC resolution equation.
- Supel™ Carbon LC U/HPLC columns facilitate high-temperature and high-pressure separation of polar or charged compounds.
- LC-MS sensitivity optimization tips minimize contaminations, enhancing detection limits and spectrum clarity for accurate analysis.
- This study demonstrates the impact of various mobile phase modifiers on the separation; formate modifiers outperform acetate in terms of MS signals (or sensitivity) and chromatographic resolution.
- Mindent látni (160)
Kapcsolódó protokollok
- HPLC separation of 17 important cannabinoids including CBD, delta 9 THC and THCA. Read the application note.
- Complete workflow for the comprehensive analysis of terpenes in cannabis
- Amino Acid Analysis is the suitable tool for precise determination of protein quantities but also provides detailed information regarding the relative amino.
- GB method with Ascentis® Express C30 column achieves baseline resolution for Vitamin A and E critical pair.
- Hat boszwelinsavat kínálunk analitikai standardként és két tiszta α+β keverék standardot a kutatásban és a minőségellenőrzésben való felhasználásra.
- Mindent látni (88)
További cikkek és protokollok keresése
Kismolekulák HPLC-je
A kismolekulák HPLC-analízise leggyakrabban fordított fázisú elválasztási módban történik. A poláros vegyületek elválasztására a hidrofil kölcsönhatású kromatográfia (HILIC) és a normálfázisú kromatográfia is alkalmas, a HILIC a preferált módszer. Az ionos vegyületek elválasztására ioncserélő elválasztási módok, szervetlen anionok vagy kationok esetében pedig ionkromatográfia is alkalmazható.
A HPLC oszlop vagy teljesen porózus szilika részecskékkel, felületesen porózus szilika részecskékkel, polimer részecskékkel van megtöltve, vagy monolitikus szilícium-dioxid pálcát használunk állófázisként. Ezenkívül alumínium-oxid, cirkónium-dioxid részecskéket és szénrészecskéket is használnak. A kis molekulák elválasztásához használt állófázis anyagának tipikus pórusmérete 60 Å - 160 Å tartományban van. HPLC esetén az állófázis tipikus részecskemérete 3 µm és 5 µm között mozog, UHPLC esetén kisebb, jellemzően 2 µm vagy annál kisebb részecskeméretet használnak. Az állófázishoz különböző oszlopszelektivitások (módosítások) kapcsolhatók. A fordított fázisú (RP) kromatográfiában leggyakrabban használt oszlopkémia a C18-as alkilánc. Mindazonáltal más módosítások, mint a C30, C8, fenil, pentaflourofenil és a polárisabb módosítások széles skálája, valamint az ioncserélő vagy királis tulajdonságokkal rendelkező módosítások szinte minden folyadékban oldódó vegyület elválasztását lehetővé teszik. Az RP-HPLC mobilfázisa jellemzően vizes pufferből vagy vízből és vízzel keverhető szerves oldószerekből, például acetonitrilből vagy metanolból áll.
HPLC mintaelőkészítés
A komplex és mátrixban gazdag minták, mint például az élelmiszerek, italok, kozmetikumok, biológiai minták és mátrixban gazdag gyógyszerformulák (pl. krém, szirup) hatékony mintaelőkészítési protokollokat igényelnek a nem kívánt összetevők eltávolításához és a kívánt analit szelektív kivonásához. Ez kritikus, ha nagyon kis részecskeméretű állófázist használnak, mint az UHPLC-ben, ahol 2 µm-es vagy annál kisebb részecskéket használnak. Gyakori mintaelőkészítési módszerek a folyadék-folyadék extrakció, a szilárd fázisú extrakció (SPE) és biológiai minták esetében a szűrés mellett a fehérje kicsapása is. A célvegyület szelektív elúciója és az előkoncentrálás mellett a mintaelőkészítés fő célja a HPLC állófázis védelme a minta mátrixa által okozott eltömődéstől. A monolitikus szilícium-dioxid nagymértékben tolerálja a mátrixot, és sokkal kevesebb mintaelőkészítést igényel, mint a részecskés oszlopok.
Derivatizáció
Egyes molekulák esetében derivatizációra van szükség, akár a HPLC elválasztás előtt (oszlop előtt), akár utána (oszlop után). A derivatizálás a molekulákat származékukká alakítja át a jobb érzékenység vagy kromatográfiás visszatartás érdekében a HPLC-ben. A kívánt derivatizáláshoz kívánatos fizikai és kémiai tulajdonságokkal rendelkező kémiai reagenseket használnak.
Kiemelt események
Kalkulálja ki a futási idő és az oldószerfogyasztás megtakarítását a módszer HPLC-ről UHPLC-re történő átvitelekor.
Az olvasás folytatásához jelentkezzen be vagy hozzon létre egy felhasználói fiókot.
Még nem rendelkezik fiókkal?