Másodlagos antitestek
1. ábra.Immunfluoreszcencia. Anti-von Wille-vel festett ló dús granulációs (büszke hús) szövet.
A másodlagos antitestek olyan poliklonális vagy monoklonális antitestek, amelyek elsődleges antitestekhez vagy antitestfragmentumokhoz, például az Fc vagy Fab régiókhoz kötődnek. Általában szondákkal vannak jelölve, amelyek hasznosakká teszik őket a kimutatási, tisztítási vagy szortírozási alkalmazásokban.
Szekunder antitesteket kínálunk számos gazdafajból. Poliklonális másodlagos antitestjeinket olyan gazdállatok szérumából állítják elő, mint az egerek, nyulak, kecskék és juhok. Míg monoklonális másodlagos antitestjeinket egér hibridoma klónokból állítják elő.
Segítségre van szüksége, hogy megtalálja a megfelelő antitestet az alkalmazásához?
Használja a Antibody Explorer keresőeszköz segítségével megtekintheti és összehasonlíthatja az antitesteket klonalitás, alkalmazás, fajreaktivitás, konjugátum, gazdafaj és forma szerint.
2. ábra.Fluoreszcens mikroszkópos felvételek mitotikus gőték tüdősejtjeiről. Monoklonális Anti-^-vel festett mikrotubulusok.
3. ábra.Immuncitokémia. Patkány látóideg fagyasztott szelvénye, amelyet egér Anti-neurofilament H és CF568 kecske Anti-egér (neuronális folyamatok, piros), nyúl Anti-GFAP és CF488A kecske Anti-nyúl, erősen keresztadszorbeált (gliasejtek, zöld). A sejtmagok RedDot2-vel vannak festve (ciánkék).
Konjugált antitestek és szondák
Konjugált antitestek széles portfólióját kínáljuk. A konjugált antitest egy monoklonális vagy poliklonális antitest, amely egy jelöléssel van összekapcsolva, és amelyet kimutatásra használnak a legkülönbözőbb vizsgálati technikákban. A másodlagos antitest specifikus hasznossága a konjugált próbatest(ek)től függ. A szondák olyan molekulák, amelyek különböző kimutatási technológiákat támogatnak. A konjugált másodlagos antitestek leggyakoribb kimutatási rendszerei kolorimetrikusak vagy fluoreszcensek.
A kolorimetrikus vizsgálatok jellemzően az alkalikus foszfatáz (ALP) vagy a torma-peroxidáz (HRP) vagy származékai használatán alapulnak. Az ALP vagy a HRP kolorimetriás jelének felerősítésére gyakran biotin-avidin (sztreptavidin) konjugát kötő rendszert használnak. A leggyakoribb fluoreszcens vizsgálatok a fluoreszcein-izotiocianátot (FITC), a rodamint vagy származékát, a tetrametilródamin-izotiocianátot (TRITC), a cianint (Cy3) vagy a phycoerythrint (R-PE) használják.
Konjugált antitesteket kínálunk különféle kolorimetrikus és fluoreszcens jelölésekhez kötve, amelyeket kimutatási, tisztítási, rendezési és mikroszkópiai alkalmazásokban használhatunk. A konjugált antitesteket különböző gazdatestekben állítják elő, így az immunkémiai reagensek széles skálájával kompatibilisek. Azon felhasználók számára, akiknek a kutatásaihoz saját reagensek jelölésére van szükség, antitestjelölő készleteket kínálunk különböző jelölések (biotin, FITC, CF™ jelölések) monoklonális és poliklonális antitestekhez történő konjugálásához.
A, G és L fehérje
A fehérje A a Staphylococcus aureusból származik. A G fehérje egy Streptococcus fajból származik. Mindkettőnek van kötőhelye az emlős IgG Fc részéhez. E fehérjék IgG-hez való affinitása állatfajonként változik. A G fehérje nagyobb affinitással rendelkezik a patkány, kecske, juh és szarvasmarha IgG, valamint az egér IgG1 és a humán IgG3 iránt. Az A fehérje nagyobb affinitással rendelkezik a macska- és tengerimalac IgG-hez (1. táblázat). Az IgG Fc kötőhelyein kívül a natív Protein G tartalmaz kötőhelyeket albuminhoz, az IgG-k Fab régiójához és membránkötő régiókhoz, ami nem specifikus festődést eredményezhet. Ezeket a problémákat a fehérje rekombináns formáinak létrehozásával kezelték. A rekombináns Protein G-t úgy alakították ki, hogy az albuminkötő régiót kiküszöböljék, és a rekombináns Protein G′ egy csonka fehérje, amelyből hiányoznak az albumin-, Fab- és membránkötő helyek, ugyanakkor megtartja az Fc kötőhelyet, így specifikusabb az IgG-re, mint a natív forma.
1. táblázat.A, G és L fehérje kötődési kapacitások különböző fajok esetében.
A Peptostreptococcus magnusból származó L fehérje affinitással rendelkezik a különböző fajokból származó kappa könnyű láncokhoz (2. táblázat). Kimutatja a monoklonális vagy poliklonális IgG, IgA és IgM, valamint a Fab, F(ab′)2 és rekombináns egyláncú Fv (scFv) fragmentumokat, amelyek kappa könnyű láncokat tartalmaznak. A csirke IgG-t is megköti. Figyelem: Az olyan fajok, mint a szarvasmarha, kecske, juh és ló, amelyek Ig-jei szinte kizárólag lambda láncokat tartalmaznak, nem kötődnek jól, vagy egyáltalán nem kötődnek a Protein L-hez.
Az L fehérje nem kötődik jól, ha egyáltalán kötődik.
2. táblázat.Protein L kötődés különböző immunglobulin könnyű láncokhoz.
Kimutatási reagensek
A fehérje A és G általános, nem fajspecifikus reagensként használható elsődleges antitestek vagy felületi IgG kötésére emlősök szöveteiben. A G fehérje a legtöbb fajhoz ajánlott, beleértve az egeret és a patkányt is. Az A fehérje macskához és tengerimalachoz ajánlott. Egyik sem ajánlott IgA vagy IgM kimutatására, Fab fragmentumok kimutatására vagy madár IgG kimutatására. Ha gyantához, például agarózhoz kötődik, a Protein A és a Protein G felhasználható immunglobulinok affinitástisztítására szérumból vagy ascites folyadékból.
A Protein L általános reagensként használható primer emlős vagy madár antitestek vagy minden osztályba tartozó felszíni Ig-ek megkötésére. Különösen hasznos Fab, F(ab′)2 fragmentumok és rekombináns scFv fragmentumok kimutatására, Fc receptorokhoz kötött Igs kimutatására, vagy monoklonális antitestek kimutatására szarvasmarha Igs jelenlétében. Használata a kappa könnyű láncot hordozó Igs kimutatására korlátozódik.
Hármas gyanták
A fehérje A és a fehérje G kötőhelyekkel rendelkezik az emlős IgG Fc-részéhez. Ezeknek a fehérjéknek az IgG-hez való kapacitása fajonként változik. Általában az IgG-k nagyobb affinitással rendelkeznek a Protein G-hez, mint a Protein A-hoz, és a Protein G képes a fajok szélesebb köréből származó IgG-t megkötni. A különböző IgG-alosztályok, különösen az egér és a humán IgG alosztályok affinitása a Protein A iránt nagyobb mértékben változik, mint a Protein G iránt. Az L fehérje alkalmas egér monoklonális antitestek izolálására sejtkultúra felülúszóból, szarvasmarha IgG általi szennyeződés nélkül.
4. ábra.CF™ festék. HeLa sejtek egér-antitubulin és CF488A kecske anti-egér másodlagos antitesttel festve (mikrotubulusok, zöld). Az aktin filamentumok CF640R falloidinnal (lila) vannak festve. A sejtmagok ellenfestése DAPI-val (kék).
CF™ festékkel jelölt antitestek
A CF™ festékek a látható és a közeli infravörös (near-IR) spektrumot lefedő, nagymértékben vízoldható fluoreszcens festékek sorozata antitestek jelölésére. A CF™ festékek fényereje, fotostabilitása és színválasztéka a tudósok által áttörést jelentő kémiai eljárások alkalmazásával kifejlesztett, racionális festéktervezés eredményeként más kereskedelmi forgalomban kapható festékek minőségével vetekszik.
A CF™ festékkel jelölt, magasan validált másodlagos antitesteket kínálunk számos fajspecifikus opcióban.
Az olvasás folytatásához jelentkezzen be vagy hozzon létre egy felhasználói fiókot.
Még nem rendelkezik fiókkal?