Western Blotting
A Western blotting jól bevált analitikai technika a fehérjék kimutatására, elemzésére és mennyiségi meghatározására. Ezt a módszert széles körben használják specifikus fehérjemolekulák kimutatására olyan összetett mintákban, mint a szöveti homogenátumok és sejtlizátumok. A Western blotting jellemzően a fehérjék gélelektroforézissel történő elválasztását jelenti, amelyet polivinilidén-difluorid (PVDF) vagy nitrocellulóz membránra történő átvitel követ. A fehérjéket a transzferálás után meg lehet festeni a vizualizáláshoz, és közvetlenül azonosítani lehet őket N-terminális szekvenálással, tömegspektrometriával vagy immunodetektálással.
Kiemelt kategóriák
Válasszon az Immobilon® PVDF membránok közül a célfehérje mérete, az alkalmazás, a kimutatási módszer és a kényelem alapján a Western blotting és a fehérje immunoblotting optimális teljesítménye érdekében.
A célfehérje mérete, az alkalmazás, a kimutatási módszer és a kényelem alapján.
Növelje az élettudományi kutatásokat enzimalapú fehérje kimutatási eszközökkel. Merüljön el a szubsztrátok és enzimek széles skáláján, amelyek az ELISA, IHC, WB és azon túlmenően is irányítják a fehérjéket.
Előkészített poliakrilamid fehérje gélek, futópufferek és kézi öntő reagensek a PAGE és SDS-PAGE fehérje gélelektroforézishez használt poliakrilamid gélek kézi öntéséhez.
A Western blotting immunodetektálás során a fehérjéket specifikus antitestekhez való kötődésük révén azonosítják. Általában egy elsődleges antitestet HRP- vagy AP-konjugált másodlagos antitesttel kombinálva használnak kemilumineszcens vagy kolorimetrikus kimutatáshoz megfelelő szubsztrát használatával. Alternatív megoldásként fluoreszcensen jelölt elsődleges vagy másodlagos antitest is használható a közvetlen vizualizációhoz.
A Western blottingot széles körben használják a biokémiában specifikus fehérjék jelenlétének kimutatására, a poszttranszlációs módosítások mértékének meghatározására, a fehérjeexpresszió ellenőrzésére klónozási alkalmazásokban, a fehérjék és biomarkerek expressziós szintjének elemzésére, antitest epitóp-térképezésre, valamint betegségmarkerek vizsgálatára klinikai környezetben.
A korlátozott számú mintában több fehérje egyidejű elemzésének szükségessége ösztönözte a blotting technikák érzékenységének és sebességének javítására irányuló folyamatos kutatást. A kettős blotting kiküszöböli a nem specifikus kölcsönhatások okozta hamis pozitív eredményeket. A Far-Western blotting lehetővé teszi a specifikus fehérje-fehérje kölcsönhatások kimutatását. A délnyugati blotting a specifikus DNS-szekvenciákkal kölcsönhatásba lépő fehérjék azonosítására szolgál. A multistrip blotting növeli az áteresztőképességet, miközben minimalizálja a blotok közötti variabilitást. Új technológiákat fejlesztenek ki a jel előállításához szükséges fehérjemennyiségek csökkentésére és a Western blotting mennyiségi képességeinek javítására.
Munkafolyamat
Gélelektroforézis
A fehérje gélelektroforézist a fehérjék elválasztására és felbontására használják a blotting előtt. Az elkészített fehérjekeveréket poliakrilamid gélen futtatják, hogy a fehérjéket molekulatömeg és töltés szerint szétválogassák.
Átvitel egy membránra
A gélen elektroforézissel elválasztott fehérjéket PVDF- vagy nitrocellulózmembránra történő átvitelsel immobilizálják. A transzfer során elektromos áram segítségével a fehérjéket a gélből a membránra húzzák (elektroblotting).
Érzékelés
A célfehérje kimutatása elsődleges ellenanyaggal történik HRP- vagy AP-konjugált másodlagos ellenanyaggal és megfelelő kemilumineszcens vagy kolorimetrikus szubsztráttal kombinálva, vagy fluoreszcensen jelölt elsődleges vagy másodlagos ellenanyaggal.
A célfehérje kimutatása elsődleges ellenanyaggal történik.
Látogasson el dokumentumkeresőnkbe adatlapok, tanúsítványok és műszaki dokumentációk kereséséhez.
Kapcsolódó cikkek
- Fedezze fel az antitestekkel való munka alapjait, beleértve a szerkezetre, az osztályokra és a normál immunglobulin-tartományokra vonatkozó technikai információkat.
- Az alkalikus foszfatáz enzimek és szubsztrátok széles választékát kínáljuk, amelyeket az Ön speciális alkalmazási igényeihez optimalizáltunk antitestekhez és más fehérjékhez való konjugációra.
- Betöltési kontrollok western blotting alkalmazásban.
- Gelatin is a heterogeneous mixture of water-soluble proteins extracted by boiling skin, tendons, ligaments, bones, etc. in the water.
- A Western blotting fehérjetranszferrel kapcsolatos problémák elhárítása az okok megértésével és a transzferfeltételek optimalizálásával.
- Mindent látni (40)
Kapcsolódó protokollok
- Protokoll a minta előkészítéséhez a sejtlízishez és a tenyésztett szövetekből és sejtekből történő hatékony fehérjeextrakcióhoz a későbbi Western blottinghoz.
- A Western blot protokoll részletezi a fehérjék gélekről nitrocellulózra történő átvitelét, ami elengedhetetlen a kutatásban alkalmazott immunoblot-eljárásokhoz.
- A BCIP/NBT szubsztrát stabil, intenzív színt ad az alkalikus foszfatáz vizsgálatokhoz, ideális vizuális megfigyeléshez.
- This page describes chemiluminescence detection of GST-tagged proteins with Amersham ECL, Amersham ECL Prime, and Amersham ECL Select from Cytiva.
- The SNAP i.d. 2.0 Protein Detection System is the second generation of the SNAP i.d. method for detecting immunoreactive proteins on Western blots.
- Mindent látni (20)
További cikkek és protokollok keresése
Hogyan tudunk segíteni
Kérdés esetén kérjük, küldjön ügyféltámogatási kérelmet
vagy beszéljen ügyfélszolgálatunkkal:
Emailt küldjön custserv@sial.com
vagy hívja a +1 (800) 244-1173-as telefonszámot
További támogatás
- Chromatogram Search
Use the Chromatogram Search to identify unknown compounds in your sample.
- Számológépek és alkalmazások
Web Toolbox - tudományos kutatási eszközök és források az analitikai kémia, az élettudomány, a kémiai szintézis és az anyagtudomány számára.
- Customer Support Request
Ügyfélszolgálat, beleértve a megrendelésekkel, termékekkel, számlákkal és a weboldal technikai kérdéseivel kapcsolatos segítséget.
- FAQ
Explore our Frequently Asked Questions for answers to commonly asked questions about our products and services.
Az olvasás folytatásához jelentkezzen be vagy hozzon létre egy felhasználói fiókot.
Még nem rendelkezik fiókkal?