Immunodetektáló reagensek és szubsztrátok

Blokkoló reagensek

A nem kötött membránhelyek blokkolása megakadályozza az antitestek nem specifikus kötődését, ami magas háttérhez vezethet. A hagyományos tej-, zselatin- és egyéb fehérjealapú blokkolók számos blotting-alkalmazásnál hatékonyak, de csökkenthetik az érzékenységet vagy a detektálást azáltal, hogy elfedik a jelet vagy zavarják a specifikus fehérjecélpontok detektálását. Immobilon^® Block Noise Cancelling Reagents fehérjementes, használatra kész puffereket tartalmaz, amelyeket a háttérszintek csökkentésére optimalizáltak kemilumineszcens, fluoreszcens vagy foszfoprotein detektálás esetén.

Streptavidin-és-szekunder-antitest-konjugátumok

A modern immundetektálási módszerek enzimhez kötött detektáláson alapulnak, amely során sztrepttavidint vagy másodlagos antitesteket használnak, amelyek kovalensen kötődnek olyan enzimekhez, mint a torma-peroxidáz (HRP) vagy az alkalikus foszfatáz (AP). A konjugált enzim katalizálja a specifikus szubsztrátok lebontását, ami jelgenerálást eredményez. Western blottinghoz számos sztreptavidin, Protein A, Protein G és másodlagos antitest konjugátum áll rendelkezésre. HRP és AP szubsztrátok széles választékát kínáljuk kemilumineszcens, kromogén és kemifluoreszcens detektáláshoz a Western blottingban.

CHEMILUMINESZENS SZUBSZTRÁTOK AZ WESTERN BLOTTING-hoz

Immobilon^® HRP szubsztrátok kemilumineszcens detektáláshoz megnövelt érzékenységet biztosítanak a kvantitatívabb blotokhoz, és csökkentik a költségeket azáltal, hogy lehetővé teszik a detektáláshoz használt antitest koncentrációjának csökkentését. Válasszon a különböző érzékenységű Immobilon® szubsztrátokat tartalmazó portfólióból a kényelmes, azonnal felhasználható vagy kétkomponensű formátumokból, hogy optimalizálja a detektálást az Ön Western blotting alkalmazásához.

• Immobilon^® Classico, Crescendo és Forte kemilumineszcens szubsztrátok.a peroxidáz-alapú kimutatásra szolgáló, előkevert, azonnal felhasználható reagensek családját alkotják, amelyeket különböző érzékenységek tartományában kínálnak, hogy optimális jel-háttér arányt biztosítsanak a célfehérje-koncentrációk spektrumában. Kimutatási határértékek:
  • Immobilon^® Classico: ~ 6 pg célfehérje
  • Immobilon^® Crescendo: ~ 1-3 pg célfehérje
  • Immobilon^® Forte: ~ 400 fg célfehérje
     
• Immobilon^® Western HRP, Immobilon.sup>® ECL Ultra és Immobilon^® UltraPlus Western szubsztrátok kivételes érzékenységet és hosszú jelélettartamot biztosítanak a standard 2 komponensű formátumokban. Ezek a formulák lehetővé teszik hígabb primer antitestoldatok használatát immunoblot detektáláshoz. Detektálási határértékek:
  • Immobilon^® Western HRP szubsztrát: ~ 400 fg célfehérje
  • Immobilon^® ECL Ultra szubsztrát: alacsony femtogram tartomány
  • Immobilon^® ECL UltraPlus Western Blot HRP szubsztrát:

    Az Immobilon^® kemilumineszcens HRP-szubsztrátumok relatív érzékenysége

  .

A Cytiva™ Amersham™ ECL-detektáló reagensek fokozott luminol alapú HRP detektálást alkalmaznak, különböző formulációkban állnak rendelkezésre a különböző Western blotting alkalmazási igények kielégítésére. 

• A Cytiva Amersham™ ECL Western blotting detektáló reagensek megerősítő Western blotting alkalmazásokhoz ajánlottak.
• A Cytiva Amersham™ ECL Prime Western blotting detektáló reagens lehetővé teszi mind a nagy, mind a kis mennyiségben előforduló fehérjék kimutatását ugyanazon a bloton.
• A Cytiva Amersham™ ECL Select Western blotting detektáló reagensek nagy érzékenységet biztosítanak még hígított primer és szekunder antitestek használata esetén is.
• A Cytiva Amersham™ ECL Start Western Blotting detektáló reagens a közepes és magas expressziós fehérjék kemilumineszcens detektálására lett kifejlesztve.

CHROMOGENIC SUBSTRATES FOR WESTERN BLOTTING

A kromogén detektálás peroxidázt használ (pl., HRP) vagy alkalikus foszfatázzal (AP) konjugált enzimet, hogy katalizáljon egy reakciót, amelynek eredményeként egy oldhatatlan színes csapadék rakódik le a kimutatáshoz. Western blottinghoz használt kromogén szubsztrátjaink oldat, por és tabletta formájában állnak rendelkezésre, hogy rugalmas lehetőségeket biztosítsanak a tároláshoz és a felhasználáshoz.

• SIGMAFAST™ DAB tabletta (kromogén HRP szubsztrát).olyan kolorimetrikus kicsapódó szubsztrátból állnak, amely a torma-peroxidázzal való reakció során barna színt hoz létre, és vízben feloldva felhasználásra kész pufferoldatot készíthet blotting-detektáláshoz.
• A BCIP/NBT (kék/lila) és a BCIP/TNBT (kék/barna) Single Reagent (kromogén AP szubsztrátok) az alkalikus foszfatáz nagy érzékenységű kolorimetrikus szubsztrátjai.
• TMB Enhanced One Component HRP Membrane Substrate (kromogén HRP szubsztrát) egykomponensű kolorimetrikus szubsztrát, amely sötétkék terméket eredményez.

Signal Enhancers

• Immobilon^®. Signal Enhancer -t Western blotting alkalmazásokban való használatra tervezték, amikor alacsony jelintenzitás figyelhető meg. Az antitest-antigén reakció fokozása a jelintenzitás 2-10-szeres növekedését eredményezheti. Az Immobilon^® Signal Enhancer kompatibilis a PVDF és nitrocellulóz membránokkal, és használható kromogén, kemilumineszcens és fluoreszcens detektálási módszerekkel.
• A SignalBoost™ Immunoreaction Enhancer Kit a kemilumineszcens vagy kolorimetrikus céljel nitrocellulóz vagy PVDF membránokon történő fokozására szolgál

Reagensek és készletek a strippeléshez és az újraproblettáláshoz

A strippelő és újraproblettáló reagenseket kifejezetten úgy állították össze, hogy gyorsan és hatékonyan távolítsák el az antitesteket a Western blotokról anélkül, hogy jelentősen befolyásolnák az immobilizált fehérjéket.

• AReBlot™ Plus reagensek hatékonyan eltávolítják a szondázott blotokat a megkötött antitestektől. A ReBlot™ Plus reagensek enyhe és erős formulákban kaphatók.