Fehérje mennyiségi meghatározása
A fehérje-kvantitáció és a fehérjemérések kritikus fontosságúak a mintában lévő fehérjekoncentráció pontos meghatározásához. Számos fehérje-kvantitációs módszer létezik, beleértve az UV-abszorbancia-méréseket, a reagens-alapú méréseket és az immunoassay-technológiákat. Mindegyik fehérje-kvantitációs technológia egyedi előnyökkel rendelkezik, és a vizsgálat alkalmassága az elemzéshez rendelkezésre álló mintatípustól és/vagy mennyiségtől függ. Például a festékalapú próbák némelyike interferálhat a pufferkészítményekben található vegyi anyagokkal, és egy alternatív próba megfelelőbb lehet. A tudósoknak figyelembe kell venniük az egyes vizsgálatok korlátait, hogy eldönthessék, melyik a legjobb megoldás a mintájukhoz.
UV abszorbancia vizsgálatok
A fehérjekoncentráció mérésére az ultraibolya (UV) abszorbancia használata egy viszonylag egyszerű fehérje-kvantitatív vizsgálat. Az aromás oldalláncú aminosavak (triptofán, tirozin stb.) biztosítják a fehérjék jellegzetes UV-abszorbanciáját 280 nm-en. Mivel ezek az aminosavak 280 nm-en elnyelik az UV-fényt, az ezen a bizonyos hullámhosszon mért abszorbancia spektrofotométerrel meghatározható, és felhasználható a mintákban lévő fehérjekoncentráció becslésére. Ezt a viszonylag gyors vizsgálatot gyakran használják laboratóriumokban, és a fehérjekoncentráció becslésére általában a Warburg-Christian-módszert alkalmazzák. Az UV-abszorbancia használata a fehérjekoncentráció meghatározására azonban nagy változékonysággal járhat, mivel a mintában lévő nem fehérje komponensek zavarhatják az abszorbancia méréseket. Ezenkívül a mintában lévő különböző fehérjéket tartalmazó keverékek eltérő abszorbancia-méréseket okozhatnak az aminosav-összetétel különbsége miatt.
Reagens-alapú vizsgálatok
A reagens-alapú vizsgálatok megoldják az UV-abszorbancia módszereknél megfigyelhető kompatibilitási problémákat. A fehérje mennyiségi meghatározására szolgáló reagens-alapú próbák közé tartoznak például azok, amelyek kolorimetriás módszereket használnak, mint például a bicinchoninic acid (BCA), Lowry és Bradford próbák. A BCA-módszer és a Lowry-módszer egyaránt réz-fehérje komplex kialakításával jár. Ezek érzékeny vizsgálatok, és kevésbé változékonyak, mint a Bradford-mérés. A Bradford-mérés azonban gyors, könnyen elvégezhető, és a BCA- és Lowry-méréssel ellentétben kompatibilis bizonyos redukálószerekkel.
Immunoassays
Egyes vizsgálatok nem feltétlenül képesek pontos fehérje-kvantitást támogatni, ha a mintában több fehérje van, vagy a mennyiségek a kimutatási küszöbérték alatt vannak. A különböző detektálási módszereket alkalmazó, hatékony immunoassay-technológiák alternatív módszert kínálnak a fehérjék pontos mennyiségi meghatározására a legkülönbözőbb mintatípusokból. A multiplex próbák például lehetővé teszik a kutatók számára, hogy egy mintában egyszerre több fehérje mennyiségét is meghatározzák. Ezenkívül az egy molekula számláló technológia femtogrammnyi fehérje szintjét is képes mérni, hogy segítsen azonosítani és számszerűsíteni az alacsony szintű fehérjéket kis mintákban. Az ezeket a technológiákat alkalmazó kutatási alkalmazások közé tartozik a biomarkerek mérése egészséges szövetekben vagy a betegség előrehaladásával összefüggő biomarkerek mérése bizonyos betegségállapotok jobb megértése érdekében.
Látogasson el dokumentumkeresőnkbe adatlapok, tanúsítványok és műszaki dokumentációk kereséséhez.
Kapcsolódó cikkek
- Learn more about Mass Spectrometry or MS including what it is, what it is used for and how it works.
- A módosított Lowry-féle fehérjemeghatározási eljárás szabványosítása.
- Products for traditional and alternative protein quantitation techniques available, including BCA, Bradford, Lowry, and more.
- Learn how total protein quantitation with an infrared spectrometer may be a more accurate and universal alternative to Bradford, BCA, or UV-based methods.
- Troubleshooting table for 2D DIGE results lists problems, causes, and prevention methods for future experiments.
- Mindent látni (20)
Kapcsolódó protokollok
- Standard eljárás az oldat teljes fehérjekoncentrációjának mennyiségi meghatározására a BCA-módszerrel.
- To determine protein content, the Warburg-Christian method refers to measuring protein samples at 280 nm using a spectrophotometer.
- 2-D Quant Kit from Cytiva is designed to accurately determine protein concentrations in samples for electrophoresis.
- Mindent látni (16)
További cikkek és protokollok keresése
Hogyan tudunk segíteni
Kérdés esetén kérjük, küldjön ügyféltámogatási kérelmet
vagy beszéljen ügyfélszolgálatunkkal:
Emailt küldjön custserv@sial.com
vagy hívja a +1 (800) 244-1173-as telefonszámot
További támogatás
- Chromatogram Search
Use the Chromatogram Search to identify unknown compounds in your sample.
- Számológépek és alkalmazások
Web Toolbox - tudományos kutatási eszközök és források az analitikai kémia, az élettudomány, a kémiai szintézis és az anyagtudomány számára.
- Customer Support Request
Ügyfélszolgálat, beleértve a megrendelésekkel, termékekkel, számlákkal és a weboldal technikai kérdéseivel kapcsolatos segítséget.
- FAQ
Explore our Frequently Asked Questions for answers to commonly asked questions about our products and services.
Az olvasás folytatásához jelentkezzen be vagy hozzon létre egy felhasználói fiókot.
Még nem rendelkezik fiókkal?