Gélelektroforézis
A fehérje gélelektroforézis a fehérjék tisztítás, jellemzés és expressziós elemzés céljából történő elválasztására használt gyakori technika. Ebben a megközelítésben a töltött fehérjemolekulákat elektromos tér segítségével gélen keresztül szállítják. Az elektromos mezőn keresztüli mobilitásuk a fehérje méretétől, alakjától és töltésétől függ.
A fehérjeelektroforézishez mind a poliakrilamid-, mind az agarózgél mátrixok használhatók. Ezek a mátrixok szitaként szolgálnak, így a kisebb fehérjék gyorsabban haladnak, mint a nagyobb fehérjék. Az agaróz nagy pórusmérettel rendelkezik, és 5-10 nm-nél nagyobb sugarú fehérjék, például nagy fehérjekomplexek elválasztására használható. A poliakrilamid kisebb pórusmérettel rendelkezik, 5 kDa és 2000 kDa közötti méretű fehérjéket képes elválasztani, és leggyakrabban a fehérjeelektroforézisben használják.
Kiemelt kategóriák
Előre festett és festetlen molekulatömeg markerek fehérje gélelektroforézishez, SDS-PAGE és Western blotting alkalmazásokhoz.
Előkészített poliakrilamid fehérje gélek, futópufferek és kézi öntő reagensek a PAGE és SDS-PAGE fehérje gélelektroforézishez használt poliakrilamid gélek kézi öntéséhez.
Nagy érzékenységű kolorimetrikus és fluoreszcens fehérje gélfestékek, fixáló oldatok és festéktelenítő reagensek poliakrilamid gélekhez, agaróz gélekhez, valamint PVDF és nitrocellulóz membránokhoz.
Elektroforézis tartályok, blotting rendszerek és tápegységek fehérje gélelektroforézishez, valamint nedves és félszáraz transzferhez.
A fehérjék gélelektroforézisének több módszere létezik, és mindegyik módszer más-más információt nyújt az érdeklődésre számot tartó fehérjékről:
SDS-PAGE
A nátrium-dodecil-szulfát (SDS)-poliakrilamid gélelektroforézis (PAGE) lehetővé teszi a fehérjék molekulatömeg alapján történő elválasztását. Ennél a módszernél az SDS detergens a futtató pufferbe van beépítve. Az SDS nettó negatív töltést kölcsönöz a fehérjéknek, elfedve azok belső töltését. Ahogy a fehérjéket SDS és denaturáló reagensek jelenlétében elválasztják, azok kevésbé gömbölydedek és lineárisabbak lesznek. Ennek eredményeképpen az SDS-hez kötött fehérjék gélen való vándorlási sebessége elsősorban a méretüktől függ, ami lehetővé teszi a molekulatömeg becslését fehérje standardokkal való összehasonlítással.
Natív PAGE
A natív poliakrilamid gélelektroforézis során a fehérjéket úgy választjuk szét, hogy megőrizzük a natív konformációjukat (tercier szerkezet), az alegységek kölcsönhatásait (kvaterner szerkezet és fehérje-fehérje kölcsönhatások) és biológiai aktivitásukat. Ennél a módszernél a fehérjéket nem redukáló, nem denaturáló körülmények között állítják elő és futtatják. A fehérjék mozgékonyságát tényezők összetett kombinációja határozza meg, mivel minden fehérje a töltésétől függően bármelyik elektród felé vándorolhat, mégpedig az alakjától és kötődési viselkedésétől függő sebességgel. Emiatt a natív PAGE nem ajánlott molekulatömeg-meghatározásra. A natív PAGE-t jellemzően olyan alkalmazásokban használják, amelyek az aktív fehérje tisztítását vagy olyan antitesttel történő kimutatását igénylik, amely csak a fehérje natív formáját ismeri fel.
Isoelektromos fókuszálás (IEF)
Az izoelektromos fókuszálás elektromos mezőt és pH-gradienst egyaránt használ a fehérjék natív izoelektromos pontjuk (pI) szerinti elválasztására. Ahogy a fehérjék a pH-gradiensben mozognak, nettó töltésük megváltozik. Elektromos térben minden fehérje elvándorol abba a pH-értékbe, ahol a nettó töltése nulla (a fehérje izoelektromos pontja). Az elválasztási folyamat során a mintában lévő fehérjék felhalmozódnak, vagy "fókuszálódnak", a gél meghatározott és kiszámítható helyein. Az izoelektromos fókuszálást összetett mintákból történő fehérjeazonosításra használják (pl, sejt- és szövetlizátumok, plazma), a poszttranszlációs módosítások elemzése, valamint a minták elválasztása tömegspektrometriás elemzéshez.
2D PAGE
A kétdimenziós poliakrilamid gélelektroforézis lehetővé teszi a fehérjék felbontását mind a saját izolelektromos pontjuk (pI), mind a tömegük alapján. A pI szerinti elválasztás izoelektromos fókuszálással (IEF) történik. A tömeg szerinti elválasztás SDS-PAGE segítségével történik. A 2-D PAGE biztosítja a legnagyobb felbontást a fehérjeelemzéshez, és a proteomikai kutatásokban általában több száz vagy több ezer fehérje felbontására használják egyetlen gélen.
Látogasson el dokumentumkeresőnkbe adatlapok, tanúsítványok és műszaki dokumentációk kereséséhez.
Kapcsolódó cikkek
- Bis-Tris gels and buffers for superior protein resolution compared to traditional tris-glycine gels.
- DNA / Protein Electrophoresis and Troubleshooting Tables
- Az SDS-PAGE mintaelőkészítési kihívások okainak és megoldásainak azonosítása és az elektroforézis körülményeinek optimalizálása.
- The Auto2D® 2-D Electrophoresis Device fully automates difficult 2D electrophoresis methods in a quick, easy, and reproducible way. Locate difficult-to-find proteins using the Auto2D® system in less than two hours with high reproducibility.
- A biológiai pufferek olyan szerves anyagok, amelyek a hidrogénionok hatásának semlegesítésével egy adott tartományban állandó pH-t tartanak fenn.
- Mindent látni (21)
Kapcsolódó protokollok
- Bevezetés a PAGE-ba. Ismerje meg az SDS-PAGE hátterét és a fehérjék méret szerinti elválasztásának protokollját poliakrilamid gélben.
- A TAE-t és a TBE-t egyaránt használják nukleinsav-elektroforézishez használt pufferként, de van néhány fontos különbség. Tekintse át receptjeinket és videónkat, hogy alkalmazása a lehető legjobb esélyt kapja a sikerre.
- Ismerje meg a Northern és Southern blotting alapjait, a makromolekulák membrántartókra történő átvitelének protokolljaival és alkalmazásaival.
- Brilliant Blue G-Colloidal Concentrate stains proteins in IEF, PAGE, and SDS-PAGE gels after electrophoresis, enhancing sensitivity with protein fixation.
- This protocol shows how to insert gels into Ettan™ DALT electrophoresis units.
- Mindent látni (27)
További cikkek és protokollok keresése
Miben segíthetünk
Kérdés esetén kérjük, küldjön ügyféltámogatási kérelmet
vagy beszéljen ügyfélszolgálatunkkal:
Emailt küldjön custserv@sial.com
vagy hívja a +1 (800) 244-1173-as telefonszámot
További támogatás
- Számológépek és alkalmazások
Web Toolbox - tudományos kutatási eszközök és források az analitikai kémia, az élettudomány, a kémiai szintézis és az anyagtudomány számára.
- Customer Support Request
Ügyfélszolgálat, beleértve a megrendelésekkel, termékekkel, számlákkal és a weboldal technikai kérdéseivel kapcsolatos segítséget.
- FAQ
Explore our Frequently Asked Questions for answers to commonly asked questions about our products and services.
Az olvasás folytatásához jelentkezzen be vagy hozzon létre egy felhasználói fiókot.
Még nem rendelkezik fiókkal?