Képalkotó elemzés és élő sejtek képalkotása
A sejtek élő képalkotása és elemzése lehetővé teszi a tudósok számára, hogy valós időben tanulmányozzák a dinamikus sejtes eseményeket, és így egyedülálló betekintést nyerjenek a biológiába. Ezek a technikák ellentétben állnak a PCR-rel, az áramlási citometriával, az immuncitokémiával és az antitestekkel történő szövetfestéssel, amelyek a sejtes eseményeket pillanatfelvételként elemzik. Napjainkban a kamerák, az élő sejtek fluoreszcens festékanyagai, a fluoreszcens fehérjék, a videó tömörítés és az time-lapse mikroszkópia fejlődése lehetővé tette, hogy az élő sejteket, a sejtek közötti kölcsönhatásokat és a szubcelluláris folyamatokat figyelemre méltó részletességgel és hűséggel vizualizáljuk és elemezzük.
Kapcsolódó műszaki cikkek
- Sejtalapú vizsgálatok sejtproliferációs (BrdU, MTT, WST1), sejtéletképességi és citotoxicitási kísérletekhez a rák, az idegtudomány és az őssejtkutatás területén történő alkalmazásokhoz.
- Firefly luciferase is a sensitive reporter for gene studies due to its absence in mammalian cells or tissues.
- A PKH és a CellVue® fluoreszcens sejtlinker készletek az élő sejtek fluoreszcens jelölését biztosítják hosszabb időn keresztül, nyilvánvaló toxikus hatások nélkül.
- Fluorescent calcium indicators and dyes to measure Ca+ flux used in calcium imaging experiments. Calcium ions (Ca2+) play vital cellular physiology roles in signal transduction pathways, in neurotransmitter release, in contraction of all muscle cell types, as enzyme cofactors, and in fertilization.
- Lipophilic cell tracking dyes enable cancer biologists to track tumor and immune cell functions both in vitro and in vivo. Read the article to choose a right membrane dye kit for cell tracking and proliferation monitoring.
- Mindent látni (34)
Kapcsolódó protokollok
- PKH dyes label exosomes for tracking experiments in vitro and in vivo, detailed protocol provided.
- A sejtfestés négy lépésre osztható: sejtelőkészítés, fixálás, antitest felvitele és kiértékelés.
- ICC Cell Capture Imaging Reagent simplifies imaging, ideal for rare cell and low cell count samples.
- Toluidine blue selectively stains nuclear material and acidic tissue components, aiding in histological staining for tissues rich in DNA/RNA.
- This protocol covers 3 modes for the microscopic examination of cell samples.
- Mindent látni (7)
További cikkek és protokollok keresése
Élő sejtek képalkotó rendszerei
A sejtek összetett szerkezetének és viselkedésének vizualizálására számos technikát alkalmaznak. A statikus elemzések során a sejteket rögzítik és megfestik, ami a sejtek megölését igényli, és így a sejtidő egyetlen pillanatát rögzíti. Bár a statikus technikák alkalmasak bizonyos alkalmazásokhoz, nem nyújtanak betekintést a sejtek tevékenységébe. A dinamikus, élő sejtes megközelítések megkönnyítik a szerkezet, a viselkedés vagy az összetétel vizualizálását élő sejtekben, hagyományos festés nélkül. Ezek a technikák ideálisak olyan alkalmazásokhoz, amelyeknek in vivo körülményeket kell utánozniuk, valamint a gyógyszerek szűrésére szolgáló prediktív vizsgálatok kifejlesztéséhez.
Az élő sejtes képalkotó rendszerek fejlett optikát, környezeti szabályozást és reagenseket használnak, amelyek lehetővé teszik emlős-, baktérium- és élesztősejtek hosszú távú vizsgálatát. A mikrofluidikát is alkalmazó tenyésztési és képalkotó rendszerek lehetővé teszik a tenyésztési mikrokörnyezet, például az áramlás, a gázkeverék és a hőmérséklet pontos szabályozását, miközben korlátozzák a sejtek fizikai stresszét. Az élő sejtek képalkotása és elemzése számos alkalmazáshoz alkalmas, beleértve a hipoxiát, a sejtmigrációt, a 3D-s sejtkultúrát, a citoszkeletális dinamikát és a fehérjeforgalmat. A fejlett rendszerek automatizálják a tenyésztési körülményeket, a kezelések beadását és visszavonását, valamint a képalkotási időközöket, hogy állóképként vagy videóadatként megjeleníthető képeket készítsenek.
Live-cell képalkotó reagensek
Az élősejtes képalkotó médiumokat és kiegészítőket úgy tervezték, hogy az time-lapse kísérletek során megvédjék a sejteket a fény okozta sejtkárosodástól. Ezeket a reagenseket úgy állították össze, hogy alacsony legyen az autofluoreszcencia és a fotobleaching, ami jelentősen javítja a fluoreszcens élősejtes képek minőségét.
Az élősejtek dinamikus folyamatainak vizsgálatához számos élősejtes festékanyag áll rendelkezésre. Az élősejtes fluoreszcens organellfestékek lehetővé teszik specifikus organellumok, például a sejtmembrán, a sejtmag, a citoplazma, a mitokondriumok, a lizoszómák, az endoplazmatikus retikulum (ER), a Golgi-apparátus és a citoszkeleton fehérjéinek szelektív festését, mindezt fokozott citotoxicitás nélkül. Az organellafestékek ellenfestékként való használata az élősejtes képalkotásban a funkcionális vizsgálatokban is hasznos.
A GFP és RFP bioszenzorok segítségével egy adott fehérje, valamint az adott fehérje élő sejteken belüli szubcelluláris helyének kimutatására lehet használni akár fluoreszcens mikroszkópiával, akár time-lapse videofelvétellel. A lentivirális vektorrendszerek népszerű eszközei a gének és géntermékek sejtekbe történő bevitelének, és számos előnyük van a kémiai alapú transzfekcióval szemben. Az organellák kimutatásán túlmenően a sejtáteresztő élő sejtfestékeket olyan alkalmazásokban használják, mint az apoptózis kimutatása, a sejtek életképessége, a sejtek egészsége, a hipoxia, a reaktív oxigénfajok vizsgálata, a kalciumindikátorok képalkotása, valamint az idegi vagy őssejtes kísérletek.
Az olvasás folytatásához jelentkezzen be vagy hozzon létre egy felhasználói fiókot.
Még nem rendelkezik fiókkal?