PKH és CellVue^® Claret fluoreszcens sejtlinker festékek

A PKH és a CellVue® fluoreszcens sejtlinker-készletek az élő sejtek fluoreszcens jelölését biztosítják hosszabb időn keresztül, nyilvánvaló toxikus hatások nélkül. A fluoreszcens linker-készletek számos sejttípus esetében hatékonyak, és nem mutatnak jelentős szivárgást vagy sejtről sejtre történő átvitelt. Stabil, tiszta, intenzív, pontos és reprodukálható fluoreszcens sejtjelölést biztosítanak. A szabadalmaztatott sejtlinker technológia szelektív particionálással építi be az alifás riporter molekulákat a sejtmembrán lipid kettősrétegébe.

Négy fluoreszcens linker áll rendelkezésre. A PKH2 és PKH67 zöld fluorokrómok, gerjesztésük (490 nm) és emissziójuk (504 nm) a fluoreszceinhez hasonló, míg a PKH26 egy vörös fluorokróm, gerjesztési (551 nm) és emissziós (567 nm) jellemzői kompatibilisek a rodamin vagy a phycoerythrin detektáló rendszerekkel. A PKH26 argonion-lézer 488 nm-es emissziójával is gerjeszthető. A CellVue^® Claret egy fiziológiás tartományokban a pH-tól független, messze vörös fluorokróm, amelynek gerjesztési (655 nm) és emissziós (675 nm) jellemzői kompatibilisek a vörös diódalézerrel. A linkerek fiziológiailag stabilak, és a sejtrendszerekre gyakorolt toxikus mellékhatásaik alig vagy egyáltalán nem jelentkeznek. A megjelölt sejtek megtartják biológiai és proliferatív aktivitásukat, és ideálisak sejtkövetési és sejt-sejt kölcsönhatási vizsgálatokhoz.

A sejtlinkerek nem specifikus jelölési mechanizmusának köszönhetően a legkülönfélébb sejttípusokat sikerült megjelölni. A linkereket állati és növényi sejteken, valamint más membránt tartalmazó részecskéken is alkalmazták. A festés mintázata a megjelölt sejttípustól és a sejtek membránjától függ. Bár a legtöbb alkalmazás középpontjában az általános jelölési módszerek (GL) állnak, amelyek a szondák membránbeépítésével járnak, a linkerek szelektív fagocitikus sejtjelölésre (PCL) is használhatók. A megjelölt sejtek megjelenése a fényes "immunfluoreszcencia" jelöléstől a pontszerű vagy foltos megjelenésig változhat. Mivel a jelölés nem telítési reakció, hanem a festék és a sejtkoncentráció függvénye, lényeges, hogy a beépíthető festék mennyisége korlátozott legyen. A sejtek túlzott jelölése a membrán integritásának és a sejtek regenerálódásának elvesztéséhez vezet.

Tulajdonságok:

• Fluoreszcens jelölés élő sejtek
  
• Az élő sejteken akár 100 napig is stabil in vivo>
  
• Intenzív és könnyen használható
  
• Nem citotoxikus - nincs hatással a biológiai vagy proliferatív aktivitásra
  
• Változatos - különböző eukarióta sejteket és sejtvonalakat, baktériumokat és parazitákat jelöl
  
• br>
• egyenletes és reprodukálható
  
• Nincs jelentős festékszivárgás vagy átvitel sejtről sejtre
  
• A különböző festékek lehetővé teszik a többszínű elemzést
  
br>
• Kompatibilis más fluoreszcens címkékkel
  
• Technológia, amely működik, és több száz irodalmi hivatkozás bizonyítja ezt

Nézze meg a JoVE videót: Optimalizált festési és proliferációs modellezési módszerek a sejtosztódás monitorozásához sejtkövető festékeket használva

Példák a PKH nyomkövető festékekkel sikeresen megjelölt sejttípusokra (152 Kb PDF)

Példák a PKH nyomkövető festékekkel monitorozott sejtfunkciókra (196 Kb PDF)

A PKH és a CellVue^® festékek alkalmazása a sejtek mozgásának és működésének nyomon követésére: Bibliográfia

Comparison of CFSE and PKH26 with CellVue^® Claret, A New 675 nm-en kibocsátó proliferációs festék

A sejtkövető reagensek jellemzői

1. ábra. Standard protokoll a PKH és CellVue^® festékkel történő jelöléshez a készleteinkkel

2. ábra. PKH26-tal festett egér vérképző őssejtek

3. ábra. PKH26-tal jelölt fiatal vándorló neuronok

4. ábra. PKH26-tal festett plazmodium

5. ábra. Konfokális vizsgálat a fagocitózisra vonatkozóan

6. ábra. PKH26-tal jelölt Leishmania donovani

7. ábra. Kemoszenzitív és kemorezisztens, jelölt T24 sejtek kokultúrája

8. ábra. PKH67 L929 sejtekben