Mintatisztítás
A célanalitumok analízis előtti elválasztására vagy koncentrálására különböző kémiai és fizikai tisztítási módszerek alkalmazhatók. Ezek közé tartozik az abszorpció, az adszorpció, a kromatográfia, a desztilláció, extrakció, ioncsere, szűrés, komplexképzés, kristályosítás, szárítás és sok más. Az elemzés előtti mintaelőkészítés segít a mintát az analitikai technikával kompatibilis formátumba hozni, csökkenti a minta összetettségét, eltávolítja a zavaró szennyeződéseket, és koncentrálja az analitot az elemzés előtt. A megfelelő mintaelőkészítés megakadályozza az eltömődést, csökkentheti a szigorú mosási eljárások szükségességét, és meghosszabbíthatja a kromatográfiás közeg élettartamát.
Kapcsolódó műszaki cikkek
- Az anyagok akkor keverhetők egymással, ha egységes oldatot alkotva oldódnak. Tegye könyvjelzőbe vagy töltse le a gyakori laboratóriumi oldószerek keverhetőségi táblázatát.
- How to separate proteins and peptides with affinity for metal ions by immobilized metal chelate affinity chromatography.
- This page shows volatile and non-volatile buffer suggestions for anion and cation exchange chromatography.
- Ion exchange chromatography is employed by the Genopure Plasmid Midi Kit and the Genopure Plasmid Maxi Kit.
- Ez az oldal a G fehérje és az A fehérje különböző immunglobulinokhoz való relatív kötődési erősségének összehasonlítását mutatja be.
- Mindent látni (31)
Kapcsolódó protokollok
- This page shows how to convert between linear flow and volumetric flow rates in affinity chromatography.
- Separation using Sephadex LH-20 column for Size Exclusion Chromatography media in polysaccharide network from Cytiva.
- Ebben a szakaszban a fordított fázisú kromatográfia ( RPC) gyakorlati szempontjait tárgyaljuk, beleértve a közeg és az oszlop kiválasztását, valamint az eluens kiválasztását és előkészítését.
- Superose from Cytiva are Size Exclusion Chromatography media consisting of a composite base matrix of dextran and agarose. This page shows how to perform a separation with a superose column.
- The Amberlite™ XAD-4 resin used in Porozorb™ cartridges is a proven technology that is highly effective in removing various detergents from cell culture media for biopharmaceutical applications such as vaccine production.
- Mindent látni (49)
További cikkek és protokollok keresése
A laboratóriumban a következő leggyakoribb tisztítási technikák közül néhányat használnak a minták előkészítésére a későbbi elemzésekhez.
Dialízis
A dialízis egy tisztítási technika, amelyet a só vagy más alacsony molekulatömegű molekulák eltávolítására használnak a mintából. A minta pufferösszetételének kicserélésére is használják. A dialízis passzív technika, amely nagy mennyiségű puffert igényel.
Puffercsere és sótalanítás
A sótalanítás egy egyszerű módszer a sók és más alacsony molekulatömegű szennyeződések eltávolítására a mintából. Használható továbbá puffercserére különböző kromatográfiás lépések előtt vagy után, valamint a reagensek gyors eltávolítására a reakció befejezéséhez.
Frakcionált kicsapás
A frakcionált kicsapás a durva szennyeződések eltávolítására szolgál kis mintamennyiségekből. A kicsapási technikák a frakciókat a differenciális oldhatóság elve alapján választják el. Mivel a fehérjefajok hidrofóbságuk mértéke eltérő, a megnövelt sókoncentráció fokozhatja a fehérjék közötti hidrofób kölcsönhatásokat, és kiválást okozhat.
Extrakció
A mintaelőkészítés extrakcióval a célanalitok izolálását jelenti egy összetett mintából, vagy sokkal nagyobb mintatérfogatból. Az eljárás eltávolítja a zavaró mintakomponenseket, amelyek eltömíthetik a HPLC- és GC-oszlopokat. Emellett az analit koncentrációját 100-5000-szeresére növeli, ezáltal jelentősen javítja a kimutatási érzékenységet. A szelektív és specifikus mintaelőkészítés részeként az extrakció segít biztosítani a megbízhatóbb kromatográfiás elemzést. Az extrakció típusai a folyadék-folyadék extrakció, szilárd fázisú extrakció (SPE), és szilárd fázisú mikroextrakció (SPME).
Affinitás kromatográfia
Affinitás kromatográfia a fehérjéket a fehérje és egy kromatográfiás mátrixhoz kapcsolt specifikus ligandum közötti reverzibilis kölcsönhatások alapján választja el. Ez a technika rendkívül szelektív és nagy kapacitású fehérjetisztítást tesz lehetővé. Az affinitáskromatográfia minden olyan esetben alkalmazható, amikor az érdeklődésre számot tartó fehérje számára megfelelő ligandum áll rendelkezésre.
Az affinitáskromatográfiás purifikáció befogási és elúciós lépéseket tartalmaz. A befogási fázisban a célfehérje specifikusan és reverzibilisen kötődik egy kromatográfiás mátrixon immobilizált komplementer ligandumhoz. A cél a céltermék izolálása, koncentrálása és stabilizálása, megőrizve annak hatékonyságát és aktivitását. A mátrix mosása után a nem kötött anyag eltávolítása érdekében a kötött célfehérjét az elúciót elősegítő körülmények megváltoztatásával nyerik vissza. Az eluálás specifikusan, kompetitív ligandummal, vagy nem specifikusan, a pH, az ionerősség vagy a polaritás megváltoztatásával történik. Az elúció lehetővé teszi a célfehérje tisztított és koncentrált formában történő összegyűjtését.
Az olvasás folytatásához jelentkezzen be vagy hozzon létre egy felhasználói fiókot.
Még nem rendelkezik fiókkal?