A G és A fehérje különböző IgG-hez kötődik
A G és A fehérje nagy affinitása a poliklonális és monoklonális IgG-típusú antitestek Fc régiójához képezi az IgG, az Fc régiót tartalmazó IgG fragmentumok és az IgG alosztályok tisztításának alapját.
A G fehérje és az A fehérje a G Streptococcusok és Staphylococcus aureus csoportból származó bakteriális fehérjék. A protein G és protein A a Sepharose-hoz kapcsolva rendkívül hasznos, könnyen használható kromatográfiás közeget alkotnak az antitestek rutinszerű tisztításához. Példaként említhetjük a monoklonális IgG típusú antitestek tisztítását, a poliklonális IgG és alosztályainak tisztítását, az IgG-t tartalmazó immunkomplexek és fúziós fehérjék adszorpcióját és tisztítását. Az IgG alosztályok izolálhatók sejtkultúra felülúszóból, szérumból és aszcitából.
Az 1. táblázat a G fehérje és az A fehérje különböző immunglobulinokhoz való relatív kötődési erősségének összehasonlítását mutatja. Az információkat különböző publikációkból állítottuk össze. A kötőerősségeket szabad G fehérjével vagy A fehérjével vizsgálták, és iránymutatásként használhatók a G fehérje vagy A fehérje tisztítóközeghez való kötődési viselkedés előrejelzésére. Affinitási mátrixhoz kapcsolva azonban a kölcsönhatás megváltozhat. Például a patkány IgG1 kötődik a Protein G szefarózhoz, de nem kötődik a Protein A szefarózhoz.
A natív forrásból származó minták vagy borjúszérummal kiegészített közegből történő egylépéses tisztítása az Fc régióspecificitás alapján együtt tisztítja a gazdaszervezet IgG-t, és még a szérumfehérjék nyomnyi mennyiségét is képes megkötni. A szennyező IgG nyomnyi mennyiségének elkerülése érdekében fontolja meg alternatív technikák alkalmazását, mint például az immunspecifikus affinitás, például NHS-aktivált szefarózzal összekapcsolt gazdaszervezet IgG-ellenes antitestek használatával, ioncserélő kromatográfia (IEX) például Capto™ adhere segítségével vagy hidrofób kölcsönhatás kromatográfia.
* HiTrap IgM Purification HP oszlopok használatával készült.
† HiTrap IgY Purification HP oszlopok használatával készült.
++++ = erős kötődés.
++ = közepes kötődés.
- = gyenge vagy nincs kötődés.
Az olvasás folytatásához jelentkezzen be vagy hozzon létre egy felhasználói fiókot.
Még nem rendelkezik fiókkal?