T1426
Tripsina
TPCK Treated, essentially salt-free, lyophilized powder, ≥10,000 BAEE units/mg protein
Sinônimo(s):
Serine Protease 1
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About This Item
Produtos recomendados
fonte biológica
bovine pancreas
grau
Proteomics Grade
forma
essentially salt-free, lyophilized powder
atividade específica
≥10,000 BAEE units/mg protein
peso molecular
23.8 kDa
solubilidade
hydrochloric acid: soluble 1 mM
aplicação(ões)
diagnostic assay manufacturing
atividade externa
Chymotrypsin ≤0.1 BTEE units/mg protein
temperatura de armazenamento
−20°C
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Aplicação
Para digestão de peptídeos por tripsina, use uma proporção de cerca de 1:100 a 1:20 de tripsina:peptídeo. O uso típico deste produto é na remoção de células aderentes de uma superfície de cultura. A concentração de tripsina necessária para desalojar as células do substrato depende principalmente do tipo de célula e da idade da cultura. As tripsinas também foram usadas para ressuspender células durante a cultura celular, para pesquisa em proteômica para digerir proteínas e em diversas digestões em gel. Outras aplicações incluem a avaliação da cristalização por técnicas baseadas em membranas e em um estudo para determinar que as taxas de dobramento de proteínas e a produção de proteínas podem ser limitadas pela presença de armadilhas cinéticas.
Ações bioquímicas/fisiológicas
A tripsina cliva peptídeos no lado C-terminal dos resíduos de lisina e arginina. A taxa de hidrólise dessa reação é diminuída se houver um resíduo ácido em qualquer lado do sítio de clivagem, e a hidrólise é interrompida se houver um resíduo de prolina no lado carboxila do sítio de clivagem. O pH ótimo para a atividade de tripsina é 7-9. A tripsina também pode clivar ligações de éster e amida de derivados sintéticos de aminoácidos. O EDTA é adicionado a soluções de tripsina como um quelante que neutraliza íons de cálcio e magnésio que obscurecem as ligações peptídicas nas quais a tripsina age. A remoção desses íons aumenta a atividade enzimática.
Os inibidores de protease de serina, inclusive o DFP, TLCK, APMSF, AEBSEF e a aprotinina, dentre outros, inibem a tripsina.
Os inibidores de protease de serina, inclusive o DFP, TLCK, APMSF, AEBSEF e a aprotinina, dentre outros, inibem a tripsina.
Componentes
A tripsina consiste em um polipeptídeo de cadeia única de 223 resíduos de aminoácidos produzidos pela remoção do hexapeptídeo N-terminal do tripsinogênio que é clivado na ligação petídica Lis - lle. A sequência de aminoácidos tem 6 ligações cruzadas de pontes dissulfeto. Essa é a forma nativa da tripsina, a beta-tripsina. A BETA-tripsina pode ser autolisada, pela clivagem no resíduo Lis - Ser, para produzir alfa-tripsina. A tripsina é membro da família das proteases de serina.
Atenção
As soluções em HCl 1 mM são estáveis por 1 ano em alíquotas e armazenadas a -20 °C. A presença de Ca2+ também diminui a autólise de tripsina e mantém sua estabilidade em solução. A tripsina também retém a maior parte de sua atividade em ureia 2,0 M, guanidina HCl 2,0 M ou SDS 0,1% (p/v).
Definição da unidade
Uma unidade de BAEE produz A253 de 0,001 por minuto em pH 7,6 a 25 °C usando BAEE como substrato.
Nota de preparo
Solúvel em HCl 1 mM a 1 mg/ml.
Também é tratado com TPCK e dialisado. O tratamento com L-1-tosilamida-2-feniletil clorometil cetona (TPCK) reduz a atividade de quimotripsina que costuma estar presente na tripsina.
Também é tratado com TPCK e dialisado. O tratamento com L-1-tosilamida-2-feniletil clorometil cetona (TPCK) reduz a atividade de quimotripsina que costuma estar presente na tripsina.
inibidor
Nº do produto
Descrição
Preços
substrato
Nº do produto
Descrição
Preços
Palavra indicadora
Danger
Frases de perigo
Declarações de precaução
Classificações de perigo
Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3
Órgãos-alvo
Respiratory system
Código de classe de armazenamento
11 - Combustible Solids
Classe de risco de água (WGK)
WGK 1
Equipamento de proteção individual
dust mask type N95 (US), Eyeshields, Faceshields, Gloves
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Continuous spectrophotometric rate determination method using BAEE substrate measures trypsin activity, essential for enzyme characterization.
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