T4049

Solução de tripsina-EDTA

0.25%, sterile-filtered, BioReagent, suitable for cell culture, 2.5 g porcine trypsin and 0.2 g EDTA, 4Na per liter of Hanks′ Balanced Salt Solution with phenol red

• Sinônimo(s): Cocoonase, Tryptar, Tryptase
• Número da licença da enzima: 3.4.21.4 (BRENDA, IUBMB)
• Número MDL: MFCD00130286
• Código UNSPSC: 12352204
• NACRES: NA.75

Propriedades

• fonte biológica: Porcine
• Nível de qualidade: 400
• esterilidade: sterile-filtered
• linha de produto: BioReagent
• forma: solution
• peso molecular: 23.4 kDa
• concentração: 0.25%
• técnica(s): cell culture | mammalian: suitable; single cell analysis: suitable
• Impurezas: Porcine parvovirus, none detected (9 CFR)
• pH: 7.0-7.6
• Condições de expedição: dry ice
• temperatura de armazenamento: −20°C

Descrição

Descrição geral

A tripsina consiste em um polipeptídeo de cadeia única de 223 resíduos de aminoácidos, produzido pela remoção do hexapeptídeo N-terminal do tripsinogênio que é clivado na ligação peptídica Lis - lle. A sequência de aminoácidos tem 6 ligações cruzadas de pontes dissulfeto. Essa é a forma nativa da tripsina, a beta-tripsina. A BETA-tripsina pode ser autolisada, pela clivagem no resíduo Lis - Ser, para produzir alfa-tripsina. A tripsina é membro da família das proteases de serina.

Aplicação

A solução de tripsina-EDTA foi usada para:

• separar células de câncer colorretal humano HT29 cultivadas em RPMI 1640, complementadas com 10% de soro fetal de bezerro, durante a determinação da frequência relativa de células de amostras de alta concentração.
• tripsinizar a linhagem de células tcA-201 de rim embrionário humano transientemente transfectadas.
• liberar enzimaticamente células de fibroblastos de camundongo (linhagem celular L929) aderidas ao arcabouço durante a cultura de células para avaliar a influência de vários tratamentos modificados com arcabouços e fibras não tecidos de poli (L/D) lactídeo na proporção 96/4.
• dissociar as células da placa de cultura para análise de citometria de fluxo.

Adequado para uso na preparação de suspensão de célula única para sequenciamento.

O uso típico deste produto é na remoção de células aderentes da superfície de uma cultura. A concentração de tripsina necessária para deslocar as células do seu substrato depende principalmente do tipo de célula e da idade da cultura.

Ações bioquímicas/fisiológicas

A tripsina cliva peptídeos no lado C-terminal dos resíduos de lisina e arginina. A velocidade da hidrólise dessa reação é retardada se houver um resíduo ácido em qualquer um dos lados do sítio de clivagem e a hidrólise é interrompida se houver um resíduo de prolina no lado carboxílico do sítio de clivagem. O pH ideal para atividade da tripsina é 7-9. A tripsina pode agir também para clivar ligações de ésteres e amidas em derivados sintéticos de aminoácidos. O EDTA é adicionado às soluções de tripsina como agente quelante que neutraliza os íons de cálcio e magnésio que obstruem as ligações peptídicas nas quais a tripsina age. A remoção desses íons aumenta a atividade enzimática.

Os inibidores de protease de serina, inclusive o DFP, TLCK, APMSF, AEBSEF e a aprotinina, dentre outros, inibem a tripsina.

Componentes

Solução de tripsina (2,5 g/l de tripsina porcina e 0,2 g/l de EDTA•4Na em solução salina balanceada de Hanks com vermelho de fenol, 1X, cultura de células testada)

Atenção

Este produto é armazenado congelado, entre -10 e -40 °C. Ciclos repetidos de congelamento e descongelamento devem ser evitados.

Nota de preparo

Este produto contém vermelho de fenol. Devido ao envio em gelo seco, pode haver acúmulo significativo de gás carbônico na embalagem. Este CO₂ pode entrar na solução e diminuir ligeiramente o pH, conferindo ao produto uma coloração laranja, em vez de rosada. A solução laranja será adequada ao uso ou, alternativamente, o pH pode ser ajustado com hidróxido de sódio. A incubação das células em concentração muito alta de tripsina por um período prolongado pode danificar as membranas celulares e matar as células. A solubilização ou diluição da tripsina a partir de uma solução concentrada deve ser realizada em uma solução salina tamponada livre de Ca²⁺ ou Mg²⁺.

Informações de segurança

• Código de classe de armazenamento: 12 - Non Combustible Liquids
• Classe de risco de água (WGK): WGK 1
• Ponto de fulgor (°F): Not applicable
• Ponto de fulgor (°C): Not applicable