Nukleázok (DNázok és RNázok)

Restrikciós endonukleázok

Nukleázok DNS- és RNS-emésztéshez 

Nukleázaink a hasítási specifitás, valamint az olyan tulajdonságok, mint a pH-optimum szerint is különböznek, így a kutató kiválaszthatja a kísérleti igényeknek leginkább megfelelő emésztőenzimet. Az emlősökből származó dezoxiribonukleáz I például a Penicillium citrinumból származó 5' terminális P1 terméket eredményez - az egyszálú DNS-t és RNS-t lebontja, de a kettős szálú DNS-t nem. A ribonukleáz A hidrolizálja a fehérjemintákat vagy a plazmid DNS preparátumokat szennyező RNS-t. Ezen enzimek közül soknak további felhasználási lehetőségei vannak a molekuláris biológiában. A DNáz I például "megkettyinti" a DNS-t, hogy lehetővé tegye a jelölt bázisok beépítését. Az RNáz A eszköz az RNáz-védelmi vizsgálatban, amely a specifikus mRNS-ek mennyiségét méri.

Deoxiribonukleáz I és dezoxiribonukleáz II DNaz enzimek./h2>

A dezoxiribonukleáz I katalizálja a kettős és egyszálú DNS endonukleolitikus hasítását 5'-foszfodinukleotid és 5'-foszfooligonukleotid végtermékek előállítása céljából. A hidrolízis terméke 5'-foszfát mononukleotidok és oligonukleotidok komplex keveréke. Magnéziumionok jelenlétében a DNáz I a DNS minden egyes szálát függetlenül támadja meg, és a hasítási helyek véletlenszerűek. Mangán (II) jelenlétében a DNáz I a DNS mindkét szálát megközelítőleg ugyanazon a helyen hasítja. A legtöbb protokollban magnéziumiont használnak a DNáz I-gyel együtt, de bizonyos célokra mangánt használnak. Ezenkívül a dezoxiribonukleáz II katalizálja a kettős és egyszálú DNS endonukleolitikus hasítását nukleozid 3'-foszfátok és 3'-foszfooligonukleotid végtermékek előállítása céljából. Az aktivitás pH-tartománya 4,0 és 6,5 között van, a pH 6,5-nél csak kb. 15%, az optimum pH 5,0. Az enzim optimális stabilitása pH 5 - 5,5 között van, 30 °C-on pH 8,5-nél gyors inaktivációval. DNáz enzimek széles választékát kínáljuk a különböző mintatípusok és alkalmazások támogatására. Akár liofilizált, akár folyékony formában, egyes DNázaink jelentősen alacsony koncentrációjú RNázt vagy proteázt tartalmaznak, hogy megvédjék a mintát a nemkívánatos emésztéstől.

Ribonukleáz A, Ribonukleáz H és Ribonukleáz T₁ RN.ase enzimek

A ribonukleáz A katalizálja az RNS endonukleolitikus hasítását nukleozid 3'-foszfátok és Cp vagy Up végződésű 3'-foszfooligonukleotidok előállítása céljából. Az RNáz A aktivátorai közé tartoznak a kálium- és nátriumsók. Az aktivitás optimális hőmérséklete 60 °C, bár az enzim 15-70 °C között is aktív. A pH-optimum 7,6, az aktivitási tartomány 6-10 között van. A legnagyobb aktivitás egyszálú RNS esetén mutatkozik. Az RNáz A nagyon stabil enzim, és akár 100 °C-os hőmérsékletet is kibír. 100 °C-on az RNáz A pH 2,0 és 4,5 között a legstabilabb. A Ribonukleáz H specifikusan hidrolizálja az RNS foszfodiészter kötéseit az RNS:DNS duplexekben, hogy 3'-hidroxil és 5'-foszfát végű termékeket hozzon létre. Csak a DNS-RNS hibrid RNS komponensét bontja le (a komplementer DNS szálhoz hidrogénkötéssel kötött RNS-t).

A Ribonukleáz T₁ emellett katalizálja az RNS kétlépcsős endonukleolitikus hasítását, hogy nukleozid 3'-foszfátokat és 3'-foszfooligonukleotidokat kapjon, amelyek főként Gp-ben végződnek. A reakcióban a hasítás a guanidin ribonukleotid 3'-foszfátcsoportja és a szomszédos nukleotid 5'-hidroxilcsoportja között történik. A kiindulási termék egy 2':3' ciklikus foszfát nukleozid, amely hidrolizálódik a megfelelő 3'-nukleozid-foszfáttá. Oldatban hővel (100 °C-on 10 percig pH 6-on) és savval szemben ellenálló, lúgos oldatban (>pH 9) azonban instabil. Meg kell jegyezni, hogy az enzim által katalizált reakciót nem lehet leállítani a reakcióelegy 100 °C-ra történő felmelegítésével. Az RNáz enzimek széles választékát kínáljuk, hogy támogassuk a különböző mintatípusok és alkalmazások sokféleségét. Akár liofilizált, akár folyékony formában, egyes RNázaink jelentősen alacsony koncentrációjú proteázokat tartalmaznak, hogy megvédjék a mintát a nemkívánatos fehérjebontástól.