Fehérjék jelölése és módosítása
A fehérjék polipeptidláncokból állnak, és biológiai funkcióikat részben a megfelelő hajtogatás, méret és a polipeptidláncban jelen lévő reaktív funkciós csoportok száma határozza meg. A helyspecifikus fehérjemódosítások biztosítása lehetővé teszi a kutatók számára, hogy a tulajdonságok széles körét és általános biológiai funkciójukat vizsgálhassák. A fehérjék jelölési és módosítási technológiái közé tartozik a fluorofórok, biotin és más kismolekulák hozzáadása a fehérje-fehérje kölcsönhatások, a fehérjék hajtogatása, az általános fehérjeszerkezet és biológiai funkciójuk vizsgálata érdekében.
Fluoreszcens fehérjék jelölése
A zöld fluoreszcens fehérje (GFP) felfedezése és széles körben elterjedt beépítése e technológia erőteljes példája. A GFP és társainak molekulái óriási hatást gyakoroltak számos tudományterületre és a biológiai folyamatok megértésére. Például a fluoreszcens címkék antitestekbe történő beépítése lehetővé teszi a szövetekben lévő, igen specifikus fehérjekomplexek kimutatását és mennyiségi meghatározását, vagy az antitest-fehérje komplexek irányított immobilizálását ELISA és Western Blot alkalmazásokhoz. A GFP használatának jelentős hátránya azonban az, hogy a fehérje funkcióját megzavarhatja az ilyen méretű további fehérjecímkék beépítése. E kihívás megkerülése érdekében a kutatók a GFP-hez képest kisebb fluoreszcens címkéket, biotint használhatnak, vagy biortogonális funkcionalitást tartalmazó, nem természetes aminosavakat építhetnek be.
Enzim-fehérje konjugáció
A kutatók által a fehérjék jelölésére használt másik módszer az egyedi enzimek vagy szondák beépítése. A leggyakrabban használt enzim-fehérje konjugációk közé tartozik az alkalikus foszfatáz (AP) és a torma-peroxidáz (HRP). Az enzim-fehérje jelölési technológiák használatának számos előnye van, mivel lehetővé teszik a jelerősítést, a különböző jelkimeneteket, és minden egyes enzimhez számos szubsztrát áll rendelkezésre. Az általános jelkimenetek közé tartozik a fluoreszcens, kemilumineszcens vagy kolorimetrikus detektálás. E jelkimenetek sokfélesége alkalmassá teszi őket immunhisztokémiai (IHC) vagy immunfluoreszcens (IF) alapú kimutatási alkalmazásokhoz sejtekben és szövetekben.
Kialakulóban lévő fehérjemegjelölő technológiák
A betegségkutatás és a gyógyszerkutatás területén a célzott fehérjebontási technológiát a kutatók intenzíven tanulmányozzák új gyógyszercélpontok és potenciális terápiák azonosítása érdekében. A proteolízis-célzott kiméra technológia olyan bifunkcionális molekulákat használ, amelyek egyik végét úgy tervezték, hogy a betegség célfehérjéhez kötődjenek, míg a másik végük egy E3 ligázhoz kötődik, hogy a fehérjét eltávolítsa a sejtből. E molekulák kombinált specifitása a betegség célpontjainak széles körére, valamint az a képességük, hogy a fehérjéket a sejtek belső fehérjebontó rendszereinek segítségével célzottan lebontják, a betegségkutatás hatékony fehérjemegjelölő technológiájává teszi őket.
Kapcsolódó műszaki cikkek
- Ismerje meg a foszforiláció különböző típusait, egy létfontosságú sejtfolyamatot, amely az ADP ATP-vé történő átalakításával lehetővé teszi az energiatárolást. Hasonlítsa össze az oxidatív foszforilációt és a szubsztrátszintű foszforilációt hasznos ábrák segítségével.
- Peptidoglikán szerkezet: peptidekkel keresztkötésben lévő GlcNAc és N-acetil-muraminsav váltakozva alkotja az alapgerincet.
- Peptide Modifications: N-Terminal, Internal, and C-Terminal
- Chromogenic and fluorogenic derivatives are invaluable tools for biochemistry, having numerous applications in enzymology, protein chemistry, immunology and histochemistry.
- Learn more about Mass Spectrometry or MS including what it is, what it is used for and how it works.
- Mindent látni (54)
Kapcsolódó protokollok
- This page how to remove GST tags by enzymatic cleavage using Cytiva products.
- This page shows coupling through the primary amine of a ligand with a NHS-activated Sepharose High Performance, NHS-activated Sepharose 4 Fast Flow and CNBr-activated Sepharose from Cytiva.
- This protocol shows how to remove histidine tags by enzymatic cleavage using Cytiva products.
- This page shows how to purify or remove biotin and biotinylated substances with Streptavidin Sepharose High Performance from Cytiva.
- Bevezetés a PAGE-ba. Ismerje meg az SDS-PAGE hátterét és a fehérjék méret szerinti elválasztásának protokollját poliakrilamid gélben.
- Mindent látni (16)
További cikkek és protokollok keresése
Az olvasás folytatásához jelentkezzen be vagy hozzon létre egy felhasználói fiókot.
Még nem rendelkezik fiókkal?