Fehérjetisztítás

A fehérjetisztítás kritikus tényezői

A fehérjék szerkezete és funkciója gyakran kritikus tényezők, amelyeket figyelembe kell venni a fehérjetisztítási stratégia kiválasztásakor. A rekombináns fehérjék biokémiai vagy biológiai aktivitását részben a fehérjén belüli diszkrét domének határozzák meg, amelyek közül gyakran a fehérje szekunder, tercier és kvaterner struktúrákba történő összehajtásától függ. 

A fehérje hajtogatását együttesen magasabb rendű struktúrának (HOS) nevezik, és elengedhetetlen a fehérje megfelelő háromdimenziós alakjához és működéséhez. Ezen túlmenően a fehérje oldhatósága a sikeres fehérjetisztítás egyik rendkívül kívánatos tulajdonsága, amelyet számos tényező befolyásol, többek között a méret és az N- és C-terminális elemek. A rekombináns fehérjék általában N- és C-terminális címkéket tartalmaznak, amelyek kis szekvenciák, amelyeket immunhisztokémiai kimutatásra és tisztításra vagy fehérje-affinitás kromatográfiára használnak, a specifikus N- és C-terminális címkétől és a tervezett downstream alkalmazástól függően.

Fehérjetisztítási módszerek és alkalmazások

Függetlenül attól, hogy a kutatók célja a fehérje funkciójának tanulmányozása vagy a fehérjetisztítás skálájának növelése a biológiai és gyógyszeripari termékek ipari méretű előállításához szükséges stratégiák segítségével, számos fehérjetisztítási módszer, reagens és eszköz áll rendelkezésre. A kiválasztott fehérjetisztítási módszer részben meghatározza a mintaelőkészítési munkafolyamatot. Az affinitáskromatográfia megfelelő kezdeti tisztítási lépés a releváns címkéket tartalmazó szolubilizált rekombináns fehérjék tisztítására; azonban a nem kívánt fehérjék valószínűleg szintén kötődnek az affinitásgyanta-oszlophoz, és a végső mosásban a kívánt fehérjével együtt eluálódnak. Ha további tisztításra van szükség, kiegészítő tisztítási stratégiákat alkalmaznak, beleértve a méret-kiválasztó kromatográfiát vagy az ioncserélő kromatográfiát. Fontos, hogy sok affinitási címke eltávolítható, mivel a kutatók a végső tisztított fehérjéből el akarják távolítani a nem natív szekvenciákat.