Nukleinsav jelölés és kimutatás
A nukleinsavak, PCR-termékek és oligonukleotidok jelölési és kimutatási módszerei széles skálán mozognak. A nukleinsavak jelölésére és kimutatására gyakran használt reagenseket és módszereket számos tényező határozza meg, beleértve a jelölendő molekula típusát és a későbbi alkalmazást. Ezt követően mind enzimatikus, mind kémiai módszereket alkalmaznak a nukleinsavak jelölésére, és különböző molekulákat, például fluorofórákat, enzimeket és radioaktív elemeket építenek be.
Kapcsolódó műszaki cikkek
- Digoxigenin (DIG) labeling methods and kits for DNA and RNA DIG probes, random primed DNA labeling, nick translation labeling, 5’ and 3’ oligonucleotide end-labeling.
- Ethidium bromide is a well-known and widely used fluorescent dye in biotechnology research.
- Elérhető fluoreszcens in situ hibridizációs (FISH) eljárások, reagensek és berendezések.
- Background and protocols describing the various methods used by molecular biologists to detect samples of protein or nucleic acids bound to membranes.
- Explore Locked Nucleic Acid and MGB. These oligo modifications offer stability and specificity in molecular analysis, making them ideal for research and diagnostic applications.
- Mindent látni (9)
Kapcsolódó protokollok
- There are several counterstains possible in combination with BM Purple (or NBT/BCIP in general), including FastGreen FCF and Nuclear Fast Red.
- NBT/BCIP
- NBT/BCIP Ready-to-Use Tablets Protocol Troubleshooting
- There are several counterstains possible in combination with BM Purple (or NBT/BCIP in general), for instance, FastGreen FCF or Nuclear Fast Red.
- Ismerje meg a Northern és Southern blotting alapjait, a makromolekulák membrántartókra történő átvitelének protokolljaival és alkalmazásaival.
- Mindent látni (13)
További cikkek és protokollok keresése
Nukleinsav-jelölés és szondák
A nukleinsavak jelölhetők a molekula egészében vagy az 5' és 3' végén. A nukleinsav-szondák különösen hasznosak a hibridizációs vizsgálatokhoz, például az RNS északi blotban vagy a DNS Southern blotban történő kimutatásához. Különböző jelölési módszereket használnak a jelölés eloszlatására a szonda egészén, beleértve a PCR-t jelölt dezoxinukleotidokkal (dNTP-kkel) vagy nukleotid-trifoszfátokkal (NTP-kkel), a véletlenszerű priminget és a nick-transzlációt. A végcímkézés különösen hasznos a nukleinsav-fehérje kölcsönhatásokat vizsgáló vizsgálatoknál a sztérikus akadályok elkerülése érdekében.
Nukleinsav-jelölési és detektálási próbák
A jelölési módszertől függően a kolorimetrikus detektálást gyakran alkalmazzák enzimekkel jelölt szondák esetében, míg az autoradiográfiás detektálás radioaktív szondák esetében alkalmas. A gyakori szondák közé tartoznak a digoxigenin (DIG) és a fluoreszceinnel jelölt szondák, és kombinációban is használhatók a többszínű szondák kimutatásának megkönnyítésére, ha kolorimetrikus reakciókhoz (pl. alkalikus foszfatáz) kapcsolják őket. Hasonlóképpen, a legtöbb DNS-polimerázzal lehetséges a Biotin-16-dUTP beépítése PCR segítségével, mint további jelölési és kimutatási módszer. A fluoreszcens in situ hibridizáció (FISH) fluoreszcens szondákat használ a DNS-szekvenciák kimutatására, és a sikeres kimutatás és a későbbi elemzés részben a kutató rendelkezésére álló fluoreszcens mikroszkóp érzékenységétől és felbontásától függ.
Megjelölt DNS és RNS alkalmazások
A makromolekulák szilárd fázisú membránokra történő átvitelét blottingnak nevezzük. A jelölt szondák specificitása miatt a nukleinsav és a szonda hibridizációja lehetővé teszi a kutatók számára, hogy a nukleinsavak összetett keverékeiben mind a DNS-, mind az RNS-szekvenciákat kimutassák. Továbbá, ezek a módszerek lehetővé teszik további értékes információk gyűjtését, beleértve a génexpresszió, az mRNS mérete és a kópiaszám elemzése a vizsgálattól függően. In situ hibridizációt is gyakran használják a kutatók egy vagy több különbözőképpen jelölt szonda (pl. DIG és fluoreszcein jelölt szondák) kimutatására.
Az olvasás folytatásához jelentkezzen be vagy hozzon létre egy felhasználói fiókot.
Még nem rendelkezik fiókkal?