Fehérje expresszió
A genomika, a klónozás és számos molekuláris biológiai technika fejlődése lehetővé teszi a kutatók számára, hogy heterológ fehérjéket fejlesszenek ki számos biológiai rendszerben. A rekombináns fehérjék expressziójának képessége a kutatók számára a további kutatási vizsgálatokhoz nagy teljesítményű downstream alkalmazások széles körét biztosítja. Kis léptékben a fehérjék túlexpressziója megkönnyítheti a fehérje funkciójának megértését célzó vizsgálatokat; míg a nagyléptékű fehérje előállítása elengedhetetlen az enzimek, antitestek és vakcinák előállításához. Az optimális sejtnövekedési és fehérjeexpressziós feltételek meghatározása kritikus mind a kis-, mind a nagyléptékű fehérjeexpressziós rendszerek esetében. Akár prokarióta, akár eukarióta expressziós rendszerre van szükség a poszttranszlációs módosításokhoz, a sejttípus nagymértékben meghatározza, hogy milyen eszközökre és reagensekre van szükség az optimális fehérjeexpresszióhoz.
Kapcsolódó műszaki cikkek
- Review the 10 steps of glycolysis in the Embden-Meyerhof-Parnas glycolytic pathway. Easily compare reaction stages and buy the enzymes for your life science research.
- A géntechnológia lehetővé teszi a rekombináns fehérjék kutatási célú, nagymértékű expresszióját és izolálását.
- Antibiotics targeting bacterial ribosomes disrupt protein synthesis, a key process in bacterial growth inhibition.
- FLAG® és 3xFLAG® expressziós vektorok és termékek bakteriális és emlős expressziós vektorokhoz, fehérjék kimutatásához és tisztításához.
- Az IUBMB-Sigma-Nicholson Metabolic Pathways diagram a mitokondriumokban és a kloroplasztiszban zajló ATP-anyagcsere útvonalakat ábrázolja, amelyek az ATP-szintáz által végzett ATP-szintézist irányítják.
- Mindent látni (107)
Kapcsolódó protokollok
- Yeasts are considered model systems for eukaryotic studies as they exhibit fast growth and have dispersed cells.
- Achieve high protein yields with the ALiCE® Cell-Free Protein Synthesis System that allows you to obtain “difficult to produce” proteins in a matter of hours instead of weeks.
- This page details the Duolink® In Situ Short Protocol for fluorescence detection
- Next Generation Cell Free Protein Expression Kit (Wheat Germ) (CFPS700) PROTOCOL
- It is possible dissolve 1 tablet in as little as 2 ml double distilled Water, results in a 25x stock solution, without difficulty.
- Mindent látni (21)
További cikkek és protokollok keresése
A fehérjeexpressziós vektorok
Az expressziós vektorok vagy plazmidok olyan kör alakú DNS-szekvenciák, amelyeket a kutatók általában eszközként használnak az őket érdeklő fehérjét kódoló gén befogadására. Az érdeklődésre számot tartó gént tartalmazó plazmidokat ezt követően transzformálják vagy transzfektálják sejtekbe a fehérje túlterjesztése érdekében. A plazmidok különböző hasznos elemeket tartalmaznak, amelyek megkönnyítik a klónozást, a klónszelekciót, a fehérjeexpressziót és a tisztítást, többek között, de nem kizárólagosan, többszörös klónozási helyet (MCS), a klónszelekcióhoz használt antibiotikum-rezisztenciagéneket, egyedi címkéket a fehérje azonosításához és tisztításához, valamint erős promóterrégiókat a fehérjeexpresszió irányításához. A fehérjeexpressziós vektorok széles választéka létezik, mivel ezen elemek közül sok felcserélhető a konkrét alkalmazási igényektől és a fehérjeexpresszióhoz használt sejttípustól függően.
Bakteriális, emlős és további fehérjeexpressziós rendszerek
A gyors növekedési kinetikával és a E. coli-ban néhány perc alatt végbemenő plazmidtranszformációval a baktériumok a rekombináns fehérjék előállításának munkagépe. A bakteriális fehérjeexpresszió a 70S bakteriális riboszóma 30S és 50S riboszóma alegységeire támaszkodik. A plazmidmentes sejtek növekedésének megakadályozása érdekében antibiotikum-rezisztens géneket tartalmazó plazmidokat használnak szelekciós módszerként az olyan baktériumok azonosítására és izolálására, amelyek beépítették a kívánt fehérjekódoló szekvenciát tartalmazó plazmidokat. Bár a génszekvencia jelenlétének megerősítéséhez gyakran további genetikai szekvenálásra van szükség, a plazmidmentes baktériumok eltávolítására általában számos, a bakteriális fehérjeszintézist blokkoló antibiotikumot használnak. A baktériumok mellett rovar-, élesztő- és emlőssejtvonalakat is gyakran használnak fehérjeexpresszióra. A baktériumokkal ellentétben azonban az eukarióta sejtvonalak további molekuláris gépezetet tartalmaznak a poszttranszlációs módosítások (pl. glikoziláció) létrehozásához, és gyakran elengedhetetlenek a fehérjék funkcionalitásához és az értelmes downstream elemzésekhez.
Rekombináns fehérje-expressziós alkalmazások
A rekombináns fehérjék olyan fehérjék, amelyeket a fehérjeexpresszáló plazmidban kódolnak, és amelyeket a maximális fehérjeexpresszió/tisztítás érdekében módosítottak, vagy mutáltak a fehérje funkciójának felmérése érdekében. A fehérjét kódoló szekvencia akár egyetlen nukleotiddal történő hozzáadásának, eltávolításának vagy módosításának képessége rendkívül hatékony eszközt biztosít a kutatók számára az alapvető kutatási kérdések széles körének vizsgálatához, valamint a fehérje egészséges és beteg szövetekben betöltött funkciójának tisztázásához. A rekombináns fehérje-expressziós technológia következményei messze túlmutatnak az alapkutatási alkalmazásokon, és alapvető fontosságúak az életmentő terápiák és vakcinák kifejlesztéséhez.
Az olvasás folytatásához jelentkezzen be vagy hozzon létre egy felhasználói fiókot.
Még nem rendelkezik fiókkal?