Sejt izolációs készletek
Bár a in vivo szövetekből származó sejtek vizsgálata a sejtbiológia és a sejtműködés előrejelzésére a legalkalmasabb, a biológiai komplexitás megzavarhatja az eredményeket, hacsak a célsejtpopulációkat nem izolálják. A sejtfenotípusok tanulmányozása érdekében különböző módszerek alakultak ki a sejtpopulációk meghatározó jellemzők alapján történő izolálására. A sejtpopulációk izolálása nemcsak a biológiai kutatást segíti, hanem a klinikai diagnosztikai vizsgálatokat is megkönnyíti. A leghatékonyabb izolációs módszerek fokozott hozamot, tisztaságot és életképességet mutatnak. A célpopulációk dúsítása vagy tisztítása történhet pozitív szelekcióval - gyakran sejtspecifikus markerekhez kötődő antitestek alkalmazásával - vagy negatív szelekcióval, amely biofizikai tulajdonságokat használhat a nem kívánt sejtek eltávolítására a célpopuláció dúsítása érdekében.
A sejtek szubcelluláris összetevőikre történő frakcionálása régóta alapvető fontosságú a sejtbiológiai vizsgálatokban. A szubcelluláris frakcionálási technikákat széles körben használják az organellumok és szubcelluláris kompartmentek szerkezetének és működésének tanulmányozására, valamint a biomolekulák elhelyezkedésének, feldolgozásának és kereskedelmének megértésére. A legtöbb frakcionálási technika célja, hogy a szerveztek és a sejtek makromolekulái funkcionális állapotban legyenek, ahol megőrzik saját biokémiai tulajdonságaikat. Ezt gyakran kíméletes mechanikai eszközökkel vagy enyhe detergensekkel végzett sejtlízissel érik el, amelyet gyakran követ a sejtkomponensek frakcionálása differenciális centrifugálással.
A sejtek fenotípus szerinti izolálása
A preadipociták felhasználhatók az adipogenezis folyamatának tanulmányozására, valamint a differenciálódás után a lipolízis, a sejtek jelátvitelének, az endokrin működésnek és a metabolikus aktivitásnak a felmérésére.
A Preadipocyta izoláló készletünk egyesíti a zsírszövetből a stromális érsejtfrakció izolálásához szükséges eszközöket és reagenseket. Az így kapott stromális érfrakciót szövetkultúra-lemezen tenyésztik, ahol a preadipociták megtapadnak. A preadipociták megőrzik a proliferációs és adipocitává differenciálódási képességüket, ha differenciálódást indukáló komponensekkel kezelik őket.
Látható lipidcseppek igazolják a preadipociták izolálását 7 nappal a differenciálást követően a 3T3-L1 differenciálási készlet használatával.
A szerveztek és szubcelluláris komplexek izolálása
A szubcelluláris komponensek elkülönítése elősegíti a szerveztek működésének megértését, és új biotechnológiákhoz vezethet. Például az emlőssejtekből izolált sejtmagok később felhasználhatók endogén RNS primer transzkriptumok szintézisére. A nagy hozamú Nuclei EZ Prep Kit (NUC101, NUC201) a legtöbb emlőssejtből származó sejtmagok gyors izolálására lett kifejlesztve.
A mitokondriumok integritásának és membránpotenciáljának kimutatására mitokondriális festő készletünk (CS0390, CS0760) a JC-1 festéket (420200, T4069), amely a mitokondriális mátrixban koncentrálódva vörös fluoreszcens aggregátumokat képez. Az olyan események, mint az apoptózis, amelyek a mitokondriális membránpotenciált szétzilálják, megakadályozzák a JC-1 festék felhalmozódását a mitokondriumokban, és fluoreszcens mikroszkóp segítségével ezután megkülönböztethetők az életképes és a károsodott mitokondriumok.
A nem szervetlen szubcelluláris komplexek, például a proteaszómák is izolálhatók proteolitikus vizsgálatokhoz. Módszerünk olyan affinitási mátrixgyöngyöket használ, amelyek GST-agarózhoz kötött ubikvitinszerű doménnel rendelkező GST-fúziós fehérjét tartalmaznak.
Citoszkeleton dúsítás
Az aktin citoszkeletonhoz társuló fehérjékkel való munka hagyományosan kihívást jelentett a citoszkeletális elemek oldhatatlansága miatt az olyan detergensekben, mint a Triton X-100. A Millipore ProteoExtract® Cytoskeleton Enrichment and Isolation Kit olyan citoszkeleton tisztító puffereket biztosít, amelyek megtartják a fókuszos adhézióhoz és az aktinhoz kapcsolódó fehérjéket, miközben eltávolítják a sejtből az oldható citoplazmatikus és nukleáris fehérjéket. Ez a megközelítés javítja az alacsony abundanciájú aktinasszociált fehérjék kimutatásának és vizsgálatának képességét, amelyeket a teljes sejtlízisek elemzésére szolgáló Western blotting módszerek gyakran elfednek.
Az olvasás folytatásához jelentkezzen be vagy hozzon létre egy felhasználói fiókot.
Még nem rendelkezik fiókkal?