Antitest alapok

• Az antitestek alapszerkezete
• Antitest osztályok és alosztályok
• Antitest formák

Az antitestek alapvető szerkezete

Az immunglobulinokat (Igs) a B-limfociták termelik és a plazmába választják ki. Az Ig-molekula monomer formában egy kb. 150 kDa molekulatömegű glikoprotein, amely többé-kevésbé Y alakú. Az Ig-monomer alapszerkezete (1. ábra) két azonos félből áll, amelyeket két diszulfidkötés köt össze. Mindkét fél egy körülbelül 50 kDa nagyságú nehézláncból és egy körülbelül 25 kDa nagyságú könnyű láncból áll, amelyeket a könnyű lánc karboxilvégződésének közelében egy diszulfidkötés köt össze. A nehézlánc egy Fc részre oszlik, amely a karboxilvégződésnél (az Y alapjánál), és egy Fab részre, amely az aminóvégződésnél (az Y karjánál) található. A molekula Fc részéhez szénhidrátláncok kapcsolódnak. Az Ig-molekula Fc-része csak nehéz láncokból áll. Az IgG és IgM Fc-régiói az immunmoduláló sejtek, például a makrofágok felszínén lévő receptorokhoz kötődhetnek, és az immunválaszt szabályozó citokinek felszabadulását serkentik. Az Fc-régió az összes Ig-re közös fehérjeszekvenciákat, valamint az egyes osztályokra jellemző egyedi determinánsokat tartalmaz. Ezeket a régiókat konstans régióknak nevezik, mivel nem különböznek jelentősen az ugyanazon osztályon belüli különböző Ig-molekulák között. Az Ig-molekula Fab-része nehéz és könnyű láncokat tartalmaz, amelyeket egyetlen diszulfidkötés köt össze. Egy nehéz és egy könnyű láncpár együttesen alkotja az antitest antigénkötő helyét. Minden egyes Ig-monomer két antigénmolekulát képes megkötni. 

1. ábra. Alapvető immunoblobulin szerkezet.

Antitest osztályok és alosztályok

A fő immunglobulin (Ig) osztályok (2. ábra) az IgA, IgD, IgE, IgG és IgM. A madarak a tojássárgájában IgY-t is termelnek.

2. ábra. Főbb immunglobulin osztályok.

Az osztályazonosságot a nehézlánc Fc régiójában található osztályspecifikus szekvenciák határozzák meg, amelyeket az Ig betűjelének megfelelő görög betűkkel jelölnek: alfa-IgA, delta-IgD, epsilon-IgE, gamma-IgG, mu-IgM. A könnyű láncok univerzálisak az immunglobulinok között, és két típusban fordulnak elő - kappa vagy lambda. Ezeket általában a görög kappa és lambda betűkkel jelölik. Lásd az A és B táblázatot az emberi és egér immunglobulinok tulajdonságairól.

Az A Táblázat az emberi és az egér immunglobulinok tulajdonságait.

A táblázat

Humán immunglobulin tulajdonságai
tulajdonság	IgG				IgA			IgM	IgD	IgE	IgE
H láncosztály (nehézlánc)	γ				α		µ	δ	ε
H lánc alosztályai	γ1	γ2	γ3	γ4	α1	α2	Nincs			td>Nincs	Nincs
H lánc MW	50 kDa	50 kDa	60 kDa	50 kDa	55 kDa	55 kDa	55 kDa	70 kDa	62 kDa	70 kDa
L lánc MW* (könnyű lánc k & λ )		23 kDa	23 kDa	23 kDa	23 kDa	23 kDa	23 kDa		23 kDa	23 kDa	23 kDa	23 kDa	23 kDa	23 kDa	23 kDa
Total MW	150 kDa	150 kDa		170 kDa	150 kDa	160 kDa (szérum) 600 kDa (szekréciós)	160 kDa (szérum) 600 kDa (szekréciós)		160 kDa (szérum) 600 kDa (szekréciós)	970 kDa	180 kDa	190 kDa
Ext. Együttható 0,1% @280 nm	1,4	1,4	1,4	1,4	1.4	1.32	1.32	1.18	1.7	1.53
Kiegészítő rögzítés	gyenge	gyenge	erős	nem	nem	nem	erős	nem	nem	nem
Fc receptor kötődés	erős	gyenge	erős	gyenge	igen	igen	igen	nem	igen
Mastsejt/basofil degranuláció	nem	nem	nem	nem	nem	nem<	nem	nem	nem	nem	nem	igen
Placentáris transzfer	erős	gyenge	erős	erős	erős		nem	nem	nem	nem	nem

* A könnyű láncok minden immunglobulin osztályban jelen vannak. Emberben a k. láncok 67%-ban, a λ láncok pedig 33%-ban fordulnak elő. Az arányokat más fajoknál lásd az Immunglobulin könnyűlánc-arányok táblázatban.

B. táblázat

Egerek immunglobulin tulajdonságai
Tulajdonságok	IgG					IgA	IgM	IgD	IgE
H Láncosztály	γ					α		µ	δ	ε
H lánc alosztályok	δ	ε
H lánc alosztályok	γ1	γ2a	γ2b	γ3	Nincs	Nincs	Nincs	Nincs	Nincs
A teljes LPG%-a	46	24	27	2
Fénylánc	Körülbelül 95% kappa (K LC) - 5% lambda (λ LC)
Molekulatömeg (kDa)	160				160 (monomer) 350-400	900		180	190
Normális szérumkoncentráció (mg/ml)	0.3-5,0	0,1-4,0	0,1-5	0,1-0,2	0.01-0.03	0.1-1.6	0.003-0.01	0.0001-0.001
Szérum felezési idő (nap)	8-11	3-12	2.6-3,5	4-8	0,5-1	0.5-1	<1	<1
<1
Elektroforetikus mozgékonyság	gyors	lassú			lassú		lassú
Szénhidrát (%)	2-3				7-11	9-12	12-15	12
Komplementkötés	-	+++		+++	+/-	-	+++	n.k	n.k
Ext. koefficiens 0.1% @280 nm	1.4				1.35	1.18
Sedimentációs együttható.	6.6				6.7	19	6.8	8

A kappa és lambda aránya az Ig-populációban fajonként változik. Lásd C. táblázat.

C. táblázat

Immunoglobulin könnyűlánc-arány
Fajok	% k / λ	% k / λ
Humán	67/33
Eger		99/1
Patkány	99/1
nyúl	99/1
nyúl br />	90/10
Kecske	1/99
	Birka	1/99
Sertés	50/50
Szarvasmarha	1/99
Ló	1/99
Csirke	N/A

Antitest formák

Az antitesteket egész (intakt) molekulák és F(ab)₂ antitest fragmentumok formájában kínáljuk.A D táblázat kiemel néhány gyakori antitestformát.

D. táblázat

Antibody Form	Description	Uses	Use
Teljes antiszérum	A teljes antiszérum tartalmazza a specifikus antitestet, valamint az összes többi gazdaszérum fehérjét.
Frakcionált antiszérum (Ig-frakció)		A teljes antiszérumot frakcionálják, hogy elsősorban az antiszérum immunglobulin frakcióját kapják. Ez a frakció kis mennyiségben tartalmazhat más gazdaszérumfehérjéket.		Az IgG frakciók és a frakcionált antiszérum hasznosnak tekinthető olyan helyzetekben, amikor nagyon nagy affinitásra van szükség, leggyakrabban akkor, amikor a kívánt antigén ritka vagy kis mennyiségben van jelen. Az IgG frakciók előnye lehet, hogy nagyon nagy affinitású antitesteket tartalmaznak. Az affinitásizolálás eltávolíthat néhány nagyon nagy affinitású antitestet, mivel azok olyan szorosan kötődnek az affinitásmátrixhoz, hogy nem eluálódnak ki.
Az antiszérum IgG frakciója	A teljes antiszérumot frakcionálják, majd ioncserélő kromatográfiával tovább tisztítják, hogy az antiszérum IgG frakcióját kapják. Ez a frakció lényegében mentes más gazdaszérumfehérjéktől.		Az IgG frakciók és a frakcionált antiszérum hasznosnak tekinthető olyan helyzetekben, amikor nagyon nagy affinitásra van szükség, leggyakrabban akkor, amikor a kívánt antigén ritka vagy kis mennyiségben van jelen. Az IgG frakciók előnye lehet, hogy nagyon nagy affinitású antitesteket tartalmaznak. Az affinitásizolálás eltávolíthat néhány nagyon nagy affinitású antitestet, mivel azok olyan szorosan kötődnek az affinitásmátrixhoz, hogy nem eluálódnak ki.
Affinitással izolált antitest (AIA)	Ezek a termékek a legtisztábbak, ezért a legkevesebb nem specifikus kötődést adják. Az affinitással izolált antigénspecifikus antitestet antiszérumból nyerik immunspecifikus tisztítással, antigénhez kötött agarózzal, amely lényegében eltávolítja a gazdaszérum összes olyan fehérjét, beleértve az immunglobulinokat is, amelyek nem kötődnek specifikusan az antigénhez.	Univerzális
Ascites Fluid	Ascites Fluid	Az ascites folyadék olyan egerekből nyert intraperitoneális folyadék, amelyek hashártyaüregébe specifikus monoklonális antitesteket expresszáló hibridomasejteket injektáltak, amelyek a sejtek növekedési kamrájaként szolgálnak. A hibridóma sejtek nagy sűrűségűre nőnek, és magas titerű antitesteket választanak ki. Az ascites folyadékot centrifugálással tisztítják, hogy eltávolítsák a lipidréteget és a sejtpelletet. Ez specifikus ellenanyagot, valamint más gazdaszérumfehérjéket, köztük immunglobulinokat tartalmaz. A specifikus antitest koncentrációtartománya 1-10 mg/ml. Az összes fehérje koncentrációja körülbelül 20 mg/ml	Univerzális
Szövettenyésztési felülúszó		A szupernátrium a specifikus monoklonális antitesteket kiválasztó, szövettenyészetben lévő hibridómák centrifugálásából származó folyadék. A szupernatantok ezért általában tenyésztőközeget és 5-10% magzati borjúszérumot tartalmaznak. A specifikus antitest-koncentráció 50-5 g/ml tartományban van.	Univerzális
Tisztított immunglobulin	A tisztított immunglobulin jellemzően olyan monoklonális antitestekre utal, amelyeket protein A vagy protein G affinitáskromatográfiával tisztítottak.	Univerzális
F(ab)2 Fragmentum		F(ab)2./sub> fragmentumok az IgG pepszinnel történő emésztése során keletkeznek, és egy kétértékű (két antitest-kötőhelyet tartalmazó) molekulát eredményeznek, amelyből azonban hiányzik az Fc-rész.	Az F(ab)2 antitest fragmentumokat olyan vizsgálati rendszerekben használják, ahol az Fc régió jelenléte problémákat okozhat. Az olyan minták, mint a nyirokcsomók, a lép és a perifériás vérkészítmények Fc-receptorokkal rendelkező sejteket tartalmaznak (makrofágok, B-limfociták és természetes ölősejtek), amelyek megköthetik az intakt antitestek Fc-régióját, ami magas háttérfestődést okozhat. Az F(ab)2 fragmentumok használata biztosítja, hogy a megfigyelt antitestkötés nem az Fc-receptorok miatt következik be.1 Ezek a fragmentumok kívánatosak lehetnek a sejtkészítmények festéséhez plazma jelenlétében, mivel nem képesek komplementet kötni, amely lízisre késztetné a sejteket. Az F(ab)2 fragmentumok, kisebb méretük miatt, pontosabban képesek lokalizálni az antigént, mint az intakt IgG, különösen az elektronmikroszkópiához szükséges szövetfestésnél. Az F(ab)2 fragmentumok kétértékűsége lehetővé teszi az antigének keresztkötését, ami lehetővé teszi e reagensek használatát a kicsapódási vizsgálatokban, a rozettázási vizsgálatokban2, vagy a sejtek aggregációjára a felületi antigéneken keresztül.3

Hivatkozások

1. K S, T A, T T. 1998. Decreased Fcgamma receptor III (CD16) expression on peripheral blood mononuclear cells in patients with Sjögren's syndrome. 25 4 689-96. J Rheumatol.

2. DESAINTMARTIN J, SCHWARTZ J, MANNESSIER L, EYQUEM A. 1983. Idiotypic and anti-idiotypic determinants on lymphocytes during anti-Rh immunization. Revue Francaise de Transfusion et Immuno-hématologie. 26(6):573-583. https://doi.org/10.1016/s0338-4535(83)80072-5

3. De Reys S, Hoylaerts M, De Ley M, Vermylen J, Deckmyn H. 1994. Fc-independent cross-linking of a novel platelet membrane protein by a monoclonal antibody causes platelet activation. 84(2):547-555. https://doi.org/10.1182/blood.v84.2.547.547