Scepter™ 3.0 Sejtszámláló - Hogyan működik?

• Miért automatizálja a sejtszámlálást?
• A számlálás arany standardja: Coulter impedancia
• Mérje és számolja a sejtek átmérőjét pontosan. Bármilyen sejt, bármilyen puffer, mindig.
• Új funkciók
• Minta előkészítés

Miért automatizálja a sejtszámlálást?

A hemocitometria volt évtizedekig a sejtszámlálás arany standardja. A sejteket tartalmazó médium- vagy puffermintát festékkel lehet keverni vagy nem. Ebből a keverékből egy pontos mennyiséget (általában 10 µl) pipettázunk a hemocitométer egy hornyába, ahol az kitölti a kamrát, amelynek padlójára egy rácsot pontosan belevéstünk. A rács egy vagy több kis vagy nagy négyzetfrakcióját megszámolják, és attól függően, hogy melyik területet számolták meg, egy méretarányos számítást végeznek, hogy visszaadják a sejtek milliliterenkénti koncentrációját.

Szóval mi a probléma a hemocitométer használatával?

Az automatizált sejtszámlálók gyakorlatilag minden lépésnél kiküszöbölik az emberi hibára hajlamos lépéseket:

• Ha életképességi festéket használnak, a festék és a minta térfogatának pontosan meg kell egyeznie ahhoz, hogy a számlálás érvényes legyen, és a kezelőnek nem szabad megfeledkeznie arról, hogy ezt a hígítást a sejtsűrűség kiszámításába beleszámítsa
• A hemocitométer kamráját gondosan és teljesen meg kell tölteni ahhoz, hogy a mérés értelmes legyen
• A hemocitometria a sejtek emberi kezelő általi szubjektív vizuális felismerésére támaszkodik
• A technikusnak minden egyes rácsterületet vizuális számlálással pontosan meg kell számolnia
• A technikusnak a rács több területét kell mintavételeznie, és ezeket a számlálásokat pontosan átlagolnia kell a pontosság biztosítása érdekében
• A kezelőnek meg kell értenie és helyesen kell alkalmaznia a hemocitométer számítási módszerét a megszámlált terület nagysága alapján
• A technikusnak helyesen kell átírnia a kiszámított számlálást a laboratóriumi jegyzetfüzetbe vagy más laboratóriumi nyilvántartásba

Gyorsabb sejtszámlálás

Acepter™ számlálás 7-10-szer gyorsabb, mint a hemocitometria - és gyorsabb, mint más automatizált számlálók.

1. ábra. A különböző módszerekkel végzett sejtszámláláshoz szükséges időt 500 000 sejt/ml mintakoncentrációval hasonlítottuk össze. A Scepter™ számlálás (átlagosan 14 másodperc a 60 μm-es érzékelő használatával) jelentősen gyorsabb, mint a többi számlálási módszer. A 40 μm-es érzékelőt használva a Scepter™-számlálás átlagosan 25 másodperc alatt befejeződik (az adatok nem láthatóak).

A sejtszámlálás arany standardja: A Scepter™ 3.0 sejtszámláló a Coulter impedancia-alapú részecskeérzékelés Coulter-elvét használja a minta minden egyes sejtjének megbízható és pontos megszámlálásához. A Coulter impedancia pontosabb, mint a hemocitometria és az automatizált látásalapú számlálás, és kisebb átlagos variációs együtthatót mutat, mint ezek a módszerek. Így működik:

• A Scepter'"' érzékelőbe pontos térfogatokat szívunk.
• Amint a sejtek átáramlanak az érzékelő nyílásán, az ellenállás megnő, és Ohm törvénye alapján (V=IR, ahol V=feszültség, I=áram és R=ellenállás) ez az ellenállásnövekedés a feszültség későbbi növekedését okozza.
• A feszültségváltozások minden egyes elhaladó cellánál tüskék formájában kerülnek rögzítésre.
• Az azonos méretű tüskéket egy hisztogramba soroljuk és megszámoljuk.
• Ez a hisztogram mennyiségi adatokat szolgáltat a sejtmorfológiáról, amelyek felhasználhatók a sejtkultúra minőségének és egészségének értékelésére.

Pontos számlálások a nagyobb mintaméretből származnak

Mint más, áramlási citometrián alapuló technológiák esetében (ahol a sejtek egyenként haladnak át egy folyadékcsatornán egy detektor mellett), a pontos adatokat a nagy mintaméretek teszik lehetővé, amelyeket a vizuális számlálók nem tudnak elérni, mivel az egyetlen mikroszkopikus mezőre szétszórt sejtekre támaszkodnak. A Scepter™ 3.0 számláló mintánként több ezer sejtből származó hisztogramadatokat ad vissza, ami pontosabb számlálást eredményez

2. ábra. A 60 μm-es érzékelővel felszerelt Scepter™ 3.0 számlálóval CHO-sejtkoncentrációkat mértünk, és összehasonlítottuk a 100 μm-es apertúrájú Coulter Z2-vel mért azonos mintákkal. A koncentráció mérése mindkét módszerrel 100 000 és 500 000 sejt/ml közötti koncentrációk között nagymértékben lineáris volt.

Számolja meg a sejteket és mérje meg a sejtek átmérőjét pontossággal. Bármilyen sejt, bármilyen puffer, minden alkalommal.

A sejttenyésztést végző laboratóriumoknak olyan sejtszámlálási és mérési módszerekre van szükségük, amelyek pontosak és konzisztensek a különböző méretű és fenotípusú sejtek esetében.

3. ábra. A sejtméretek pontosságának és reprodukálhatóságának tesztelése érdekében a Jurkat sejteket a 40 μm-es és 60 μm-es érzékelőkkel ellátott Scepter™ 3.0 sejtszámlálóval mértük. Az eredményeket összehasonlítottuk a 100 μm-es apertúrával felszerelt Coulter^® Counter Z2™ műszerrel végzett azonos méréssel. Az adatok mintánként öt mérésből származnak.

Egyes automatizált számlálók megkövetelik, hogy a sejtek PBS-ben legyenek, ami a puffercsere szükségessége miatt hátrányosan befolyásolhatja a termelékenységet. Ahhoz, hogy a sejtkultúra fenntartásának és a kísérlet előkészítésének hatékony része legyen, a sejtszámlálási módszernek ott is el kell tudnia helyezni a sejteket, ahol élnek: médiumban, FBS-kiegészítéssel vagy anélkül.

4. ábra. A különböző sejttenyésztési pufferekben és reagensekben szuszpendált, ismert átmérőjű (8 μm) polisztirol gyöngyöket a Scepter™ 3.0 Cell Counter 40 μm-es és 60 μm-es szenzorral ellátott készülékkel mértük. Az eredményeket összehasonlítottuk a 100 μm-es apertúrával felszerelt Coulter^® Counter Z2™ műszerrel kapott azonos számlálásokkal. Az adatok mintánként három mérésből származnak.

Új funkciók

• A műszer még áramvonalasabb, ergonomikusan elhelyezett kezelőszervekkel, de a nagyobb kijelző megkönnyíti az utasítások követését és az eredmények megtekintését
• A töltőállomás, amely készenlétben tartja a Scepter™-t, amikor a sejtjei most a szövettenyésztő csőre szerelhetőek, vagy bárhová, ahol kéznél van, ahol szükség van rá.
• Talán meglepő, de a Scepter™ 3.0 pontosságát biztosító mikrofluidikai Coulter-alapú technológia valójában az érzékelőcsúcsban található. Annak ellenére, hogy e technológia kifinomultsága már így is kis helyre van zsúfolva, újraterveztük az érzékelőt, hogy két dimenzióban áramvonalasabb formát érjünk el, amely nemcsak kevesebb anyagot használ, de megkönnyíti a sejtek mintavételét közvetlenül a mikrocentrifugacsövekből és a lemezkútból.

Minta előkészítése és a számlálás folyamata

Minta előkészítése

Minta előkészítése

Kezdje egy egysejtes szuszpenzióval, amelyet egy mikrocentrifugacsőben vagy egy tányér mélyedésben 100 μl össztérfogatra hígítva (ajánlott) 10 000-500 000 sejt/ml koncentrációra hígítunk.

A számlálás folyamata

• A készülék hátoldalán található vezérlőgomb megnyomásával kapcsolja be a Scepter™ citométert, és várja meg a képernyőn megjelenő utasításokat.
• Az erre vonatkozó kérés hatására csatlakoztasson egy szenzort a Scepter™ egység végére úgy, hogy az elektróda érzékelőpanel a műszer eleje felé nézzen, és részletes utasításokat láthat a számlálási folyamat minden egyes lépésére vonatkozóan.
• Pipettázzon egyszer, hogy mintát szívjon a szenzorba. 50 μL sejtszuszpenziót szív be az érzékelőbe ágyazott mikrogyártott, precíziósan kialakított csatornába. A sejtérzékelő zóna minden egyes, az érzékelőbe húzott sejtet érzékel, és így a sejtkoncentráció kiszámításra kerül. Az érzékelő zóna szubmikron és szubpikoliter felbontással méri a sejtméretet és a sejttérfogatot is, lehetővé téve a Scepter™ citométer számára a sejtméret vagy sejttérfogat hisztogramszerű eloszlásának megjelenítését.
• Pontos térfogatokat húzunk a Scepter™ érzékelőbe.
• Amint a sejtek átáramlanak az érzékelő nyílásán, az ellenállás megnő; és Ohm törvénye alapján (V=IR, ahol V=feszültség, 1=áram és R=ellenállás) ez az ellenállásnövekedés a feszültség későbbi növekedését okozza.
• A feszültségváltozások minden egyes elhaladó cellánál tüskék formájában kerülnek rögzítésre.
• Az azonos méretű tüskéket egy hisztogramba soroljuk és megszámoljuk.
• Ez a hisztogram mennyiségi adatokat szolgáltat a sejtmorfológiáról, amelyek segítségével értékelheti a sejtkultúra minőségét és egészségét.

A számlálási folyamat részletesebb magyarázatáért nézze meg a Scepter™ 3.0 bemutató videónkat.