Mikropláza vizsgálat a gyógyszeriparban

Slide 1 of 2

Felhasználásra kész folyékony táptalajok Mikropláza vizsgálathoz

Felhasználásra kész szilárd táptalajok Mikropláza vizsgálathoz

A mikoplazma-szennyeződés széles körben elterjedt és visszatérő probléma számos sejttenyésztési rendszerben az élettudományi kutatásban és a gyógyszeriparban. A mikoplazmák magas titerre képesek növekedni a táptalajokban anélkül, hogy a tipikus bakteriális szennyeződésre utaló jeleket, például zavarosságot mutatnának. A tenyésztett sejtekre gyakorolt hatásaik közé tartozik a megváltozott anyagcsere, a lelassult proliferáció és a kromoszóma-rendellenességek. Röviden, a Mycoplasma szennyeződés veszélyezteti az érintett sejtvonalak és az élettudományi kutatások eredményeinek érvényességét. Ez teszi a Mikroplázma tesztelést és így a fertőzésmentes sejttenyészetek fenntartását alapvető fontosságúvá a sejtalapú kutatásban és az olyan áruk gyártásában, ahol a fogyasztók egészsége fontos szempont.

• Biosafety vizsgálati szolgáltatások
  
• Biosafety vizsgálati szolgáltatások
  
• Az Mikropláza baktériumokról
  
• A Mi>Micoplasma szennyeződés forrásai
• Miért Micoplasma vizsgálat a gyógyszeriparban?
• Mikroplázma vizsgálati módszerek
• Munkafolyamat a mikoplazmák kimutatásához ill. az EP 2.6.7 és az USP 63 szerint
• Kész médiumok a komplementer Mikrokozmoplazma kimutatásához

Kapcsolódó műszaki cikkek

• 10. sejttenyésztési protokoll: A sejtek vizsgálata mikoplazma-szennyezettségre Hoechst DNS-festéssel
  Sejttenyésztési protokoll a sejtvonalak mikoplazma-szennyezettségének vizsgálatára Hoechst 33342 indirekt DNS-festéssel.
• Mindent látni (2)

További cikkek keresése

Kulcsszavak megadása

BIOSAFETY TESTING SERVICES

>Biológiai biztonsági vizsgálati szolgáltatások a mAb-k, sejt- és génterápiás és vakcinák anyagainak vizsgálatára annak biztosítása érdekében, hogy azok mentesek legyenek a véletlen kórokozóktól vagy olyan váratlan eredményektől, amelyek katasztrofális hibákat okozhatnak a továbbfeldolgozás során, többek között: Mykoplazma-vizsgálat.

A Mycoplasma baktériumokról

A mikoplazmák a legkisebb ismert baktériumok közé tartoznak, mivel képesek átjutni a 0,2 µm pórusméretű szűrőkön. Ezek a mikroorganizmusok aerob vagy fakultatív anaerob körülmények között szaporodnak.

A mikoplazmák vagy parazita, vagy szaprofita. Számos faj, például M. pneumoniae, patogén, tüdőgyulladást és más légzőszervi megbetegedéseket okoz az emberben. M. pneumoniae. genitalium feltehetően részt vesz a kismedencei gyulladásos betegségekben. Mint sejtfal nélküli baktériumok, a mycoplasmák nem érzékenyek a penicillinekre vagy más, erre a szerkezetre ható antibiotikumokra. Citoplazmamembránjuk stabilizálásához a legtöbb mikoplazmának szterolokra van szüksége, amelyeket a környezetükből vesznek fel, általában koleszterin formájában állati gazdáiktól. Sok Mycoplasma törzs számos más antibiotikummal szemben is toleráns.

A Mikropláza-szennyeződés forrásai

A Mikropláza szennyeződés forrásait a laboratóriumban és a gyártásban nagy kihívás ellenőrizni. Néhány faj megtalálható az emberi bőrön, és a nem megfelelő aszeptikus gyakorlatok révén bejuthatnak a kultúrákba. Emellett a mikoplazmák szennyezett kiegészítőkkel, például magzati szarvasmarha-szérummal, vagy leggyakrabban más szennyezett sejtkultúrákból történő átvitellel kerülhetnek be. Ha egy sejtkultúra egyszer már tartalmaz mikoplazmákat, ezek a mikrobák gyorsan elterjedhetnek, és a kultúrák kezelése során keletkező aeroszolok és részecskék révén a laboratórium más területeit is megfertőzhetik. A helyes aszeptikus laboratóriumi gyakorlatok szigorú betartása kulcsfontosságú, és a tenyészetek rutinszerű vizsgálata erősen ajánlott a gyártási területeken a mikoplazma-szennyezés sikeres ellenőrzéséhez.

Miért Mikropláza vizsgálat a gyógyszeriparban?

A vakcinák előállításához eukarióta sejteket használó biofarmáciai létesítményeknek tesztelniük kell sejtbankjaikat és vírusmagtételeiket, valamint ömlesztett vakcináikat a Mikroplázával való szennyezettség szempontjából. E baktériumfajok eukarióta sejteket fertőznek, megzavarva azok növekedését és anyagcseréjét. Ha mycoplasmák zavarják a vakcinagyártást, az befolyásolhatja a fehérjék minőségét és hozamát, és ami még fontosabb, mellékhatásokat okozhat azoknál a betegeknél, akiknek beadják a kész vakcinaterméket.

A bioreaktorok mycoplasmákkal való szennyeződése jelentős idő-, anyag- és bevételkieséshez vezethet, hacsak nem azonosítják a gyártási folyamat korai szakaszában. Szigorú vizsgálati rutinok nélkül, Mykoplazma a biofarmáciai gyártási tételek szennyeződését rendkívül nehéz felfedezni, mivel a mikoplazmák jelenléte általában nem vezet pH-változáshoz vagy vizuális zavarossághoz a táptalajban. A kompendial Mykoplazma vizsgálati módszer a kimutatáshoz tenyésztési és indikátorsejtes vizsgálatokat egyaránt tartalmaz. Ha csak két táptalajt használnak az elemzéshez, akkor a FREY és a FRIIS táptalajok együttes használata ajánlott.

Mikropláza Vizsgálati módszerek

A minőségellenőrzés különböző pontjain fontos a biofarmakonok, vakcinák, sejtkultúrák és víruskultúrák mikoplazmák szempontjából történő vizsgálata. A három leggyakoribb vizsgálati módszer a következő:

• Mykoplazma kultúra, ahol a mikoplazmákra optimalizált bakteriális táptalajt beoltják a vizsgálati mintákkal
• DNS-festési módszerek, ahol a mikoplazma sejtmagokat Hoechst vagy DAPI ellenfestéssel ellenfestik és fluoreszcens mikroszkópiával leképezik
• PCR (polimeráz láncreakció) a bakteriális DNS felerősítésére, ha a mintában mikoplazmák vannak jelen

Munkafolyamat a mikoplazmák kimutatására az EP 2.6.7 & USP 63 szerint

* A beoltást követő napokon minden egyes folyékony táptalaj szubkultúrázása 0,2 ml beoltásával minden egyes szilárd táptalaj legalább 1 lemezére. Ismételjük meg az eljárást a 6^- és a 8^- nap között, majd a 13^- nap között. és 15^. nap között, majd ismételje meg a vizsgálat 19^.. és 21^.. napja között. Figyelje meg a folyékony táptalajt 2-3 naponta, és ha színváltozás következik be, szubkultúrázza.
Megjegyzés: Ezenkívül szilárd és folyékony táptalajonként egy pozitív és egy negatív kontroll szükséges, 14 napos inkubációs idővel.

Kész médiumok a komplementer Mykoplazma kimutatáshoz

Az Európai Gyógyszerkönyv 6. számú előírása szerint a mikoplazmák kimutatásához szükséges, használatra kész folyékony és szilárd táptalajok teljes portfólióját kínáljuk.1. (2.6.7.) és az USP 35. (63.) szabvány szerint. Minden további előkészítési lépés nélkül, a felhasználásra kész Mycoplasma táptalajok állandó termékminőséget és teljes nyomon követhetőséget biztosítanak a tétel-specifikus analitikai tanúsítványokkal.

Az összetevők miatt a Mycoplasma táptalajok általában sokkal rövidebb eltarthatósági idővel rendelkeznek, mint a mikrobiológiai minőségellenőrzéshez használt legtöbb más táptalaj. A felhasználásra kész Friis, Frey és Hayflick folyékony és szilárd táptalajok eltarthatósági idejét az agarlemezek esetében 4 hónapra, a levesek esetében pedig 6 hónapra hosszabbítottuk meg. Tapasztalja meg a hosszabb eltarthatósági idővel rendelkező, használatra kész táptalajok teljes választékát, hogy megkönnyítse a Mikroplázma vizsgálatokat.

Kiemelt események

Poszter: Az onkolitikus vírusok biológiai biztonságossági vizsgálata; a véletlenszerű ágensek vizsgálatával és a vírustisztítással kapcsolatos kihívások leküzdése