Tris

A trisz, más néven THAM (trisz(hidroximetil)aminometán) fehér kristályos por. A trispuffer pKa értéke 25°C-on körülbelül 8,1, így a legtöbb biológiai folyamathoz a 7-9-es pH-tartományban jó választás. Más speciális pufferekkel, például HEPES, összehasonlítva a triszpor költséghatékonyabb és robusztusabb választás.

A tris pufferoldatokat a tris bázis vízben való feloldásával és a pH savval, jellemzően sósavval vagy kénsavval történő beállításával állítják elő. Az így kapott oldat megbízható pH-szabályozóként és stabilizátorként szolgál számos kísérleti környezetben, beleértve a fehérje biokémiát, a molekuláris biológiát és az enzimológiát, valamint olyan technikákat, mint az elektroforézis, Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) és kromatográfiás eljárások. A sejtkultúrában a trispuffer segít továbbá a sejtek növekedéséhez, szaporodásához és az élettani feltételek fenntartásához elengedhetetlen optimális pH-környezet fenntartásában sejtkultúra-közegekben.

A trispuffer különböző formákban, többek között előre elkészített oldatokban vagy por alakban is kapható, így kényelmesen használható laboratóriumi felhasználásra.

Tris HCl

A tris HCl vagy tris-hidroklorid (más néven Trizma HCl) egy pufferanyag (savas puffer), amelyet a molekuláris biológiában és biokémiai környezetben általában az oldat pH-értékének beállítására vagy a pH stabilizálására használnak. A trisz-bázishoz hasonlóan a tris HCl is fehér kristályos por, molekuláris képlete C₄H₁₂ClNO₃, molekulasúlya pedig valamivel nagyobb, 157,60. A tris HCl egy fehér kristályos por. A legfontosabb különbség abban rejlik, hogy a sósav hozzáadása a trisz-bázishoz Tris HCl képződését eredményezi. Míg a trisz-bázis pKa értéke 8,1 körül van, ami lehetővé teszi, hogy pufferként működjön a 7-9-es pH-tartományban, addig a Tris HCl már sósavat tartalmaz. Ez a hozzáadás csökkenti a pH-t, így a Tris HCl a 7,0-8,6 közötti pH-tartományban alkalmas pufferelésre.

A Tris bázis sokoldalú pufferként szolgál széles pH-tartományban, míg a Tris HCl sósavtartalma miatt specifikusabb pH-tartományt kínál. A Tris és a Tris HCl közötti választás a kívánt pH-tartománytól és a konkrét kísérleti vagy alkalmazási igényektől függ.

Tris pufferelt sóoldat (TBS)

A Tris pufferelt sóoldat (TBS) egy olyan puffer, amelyet általában biológiai és biokémiai alkalmazásokban használnak. Általában Tris(hidroxi-metil)aminometánt, vagy röviden Tris-t tartalmaz, egy pufferanyagot, amely állandó pH-t tart fenn, és nátrium-kloridot, amely biztosítja a szükséges ionerősséget. A TBS viszonylag semleges pH-értékkel rendelkezik (7,4 körül), és széles körben használják olyan alkalmazásokhoz, mint a Western blotting, az immunhisztokémia és az ELISA-vizsgálatok. A TBS-t mosópufferként is használják a nem kötött antitestek vagy más reagensek eltávolítására a mintából. A Tris és a nátrium-klorid koncentrációja az adott alkalmazástól függően változhat, de egy általánosan használt készítmény 50 mM Tris és 150 mM nátrium-klorid.

Tris-acetát EDTA (TAE)

A TAE puffer egy másik gyakran használt puffer a molekuláris biológiában, az elektroforézisben, valamint az északi és déli blottingban. A TAE pufferben a trisz pufferanyagként működik, az ecetsav hozzájárul a pufferkapacitáshoz, az EDTA (etiléndiamintetraecetsav) pedig kelátképzőként működik. A TAE-t széles körben használják futópufferként az agaróz gélelektroforézisben, a DNS-fragmentumok elemzésében, az impulzusmezővel végzett gélelektroforézisben (a DNS-fragmentumok méretének meghatározására), az RNS-elektroforézisben és a nukleinsavátvitelben.

Tris Borate EDTA (TBE)

A TBE puffert széles körben használják a DNS-fragmentumok elválasztására és elemzésére, különösen a kisebb DNS-fragmentumok elválasztása során a nagyobb felbontás eléréséhez. A TBE pufferben a bórsav jelentős szerepet játszik az oldat pufferkapacitásának fenntartásában. A TBE puffer számos technikában talál alkalmazást, többek között az agaróz gélelektroforézisben, a DNS-szekvenálásban, polimeráz láncreakciók (PCR) termékelemzés, oligonukleotid elemzés, denaturáló gélelektroforézis és natív gélelektroforézis.

Tris-glicin puffer

A trisz-glicin puffer a molekuláris biológiában, különösen a fehérjeelektroforézisben gyakran használt pufferrendszer. A trisz-glicin pufferben a glicin jelentősen hozzájárul az oldat pufferkapacitásához és segít a kívánt pH-szint elérésében. A puffer pH-ja HCl hozzáadásával állítható be. A trisz-glicin puffert fehérjeminták reszuszpendálására, fehérjeextraktumok hígítására használják későbbi elemzéshez vagy tároláshoz, és különösen hasznos a nem denaturáló fehérjeelektroforézis technikáknál, ahol a fehérjék natív konformációjának megőrzése kulcsfontosságú. Izoelektromos fókuszáláshoz is szolgál, és pufferanyagként szolgál különböző fehérjekísérletekhez.

Trisz-glicin-nátrium-dodecil-szulfát (SDS)

A trisz-glicin-SDS puffer standard pufferként szolgál a SDS-PAGE, amely a fehérjék molekulatömegük alapján történő szétválasztására és elemzésére használt technika. Ezt a puffert fehérje mennyiségi meghatározáshoz, fehérje denaturáláshoz, Western blottinghoz és a későbbi downstream analízishez szükséges mintaelőkészítési folyamat részeként alkalmazzák.