Enzimaktivitási vizsgálatok
1. ábra. Az enzimatikus aktivitásvizsgálat folyamatának ábrázolása, amely egy fluoreszcens donor és egy kioltó akceptor szubsztráton történő enzimatikus hasításával kezdődik, hogy eltávolítsák a kioltót, és amely a fluoreszcens aktivitás növekedését mutatja, ami azt jelzi, hogy enzimaktivitás van folyamatban.
Az enzimatikus aktivitásvizsgálatokat elsősorban a kutatók végzik egy adott enzim jelenlétének vagy mennyiségének azonosítására egy szervezetben, szövetben vagy mintában. Ilyen enzimek például az α-amiláz, kataláz, laccáz, peroxidáz, lizozim, valamint a riporter enzimek, az alkalikus foszfatáz és a luciferáz. Széles körben állnak rendelkezésre különféle reagensek és módszerek, amelyek lehetővé teszik a specifikus enzim-szubsztrát kölcsönhatások vizsgálatát. A megfelelő munkafolyamat megoldásának kiválasztása a kutató által igényelt érzékenységtől függ. A kolorimetrikus megoldások hasznosak a detektáláshoz, míg a fluoreszcencia alapú reagensek jobban alkalmasak az enzimaktivitás számszerűsítésére.
Kiemelt kategóriák
Szöveti disszociációs és sejtleválasztási források, protokollok, valamint megbízható és széleskörűen jellemzett enzimek átfogó kínálata, beleértve a tripszint, kollagenázt, papaint, nukleázokat (DNáz és RNáz), hialuronidázt, elasztázt és XIV. proteázt.
A szubsztrátok és enzimek alapvető fontosságúak az élettudományi kutatásokban, mind eszközként, mind a kimutatási rendszerek célpontjaiként. Fedezze fel az ELISA, immunhisztokémia, western blotting és sok más fehérje kimutatására szolgáló enzimalapú kimutatási rendszereket a kimutatási szubsztrátokat és enzimeket tartalmazó változatos portfóliónkkal.
Droganalitikai enzimek, beleértve a β-glükuronidázt (béta-glükuronidáz) és a szulfatázt a gyógyszer-metabolizmus és a gyógyszerek szűrővizsgálataihoz
Kiváló minőségű koenzimekből álló portfóliónk megbízhatóan elősegíti az enzimek működését és katalizálja a reakciókat az Ön kutatási alkalmazásai számára
.Az enzimaktivitás optimális körülményeinek meghatározása
Míg az irodalomban számos enzimvizsgálatot írtak le, ezeket az eljárásokat a vizsgált enzim egyedi követelményeihez kell igazítani. Az enzim specifikus aktivitása számos tényezőtől függ, beleértve a pH-t, a hőmérsékletet, az ionerősséget és a vizsgálatban lévő összes komponens koncentrációját. Olyan körülmények között, mint a pH, az enzimaktivitás gyakran haranggörbére hasonlít. A legmagasabb aktivitást egy adott pH-nál Vmax-ként jelentik, a görbe mindkét végén csökkenő aktivitás figyelhető meg. Egyes enzimeknél további megfontolásokat igényelhetnek a reakcióban közvetlenül részt nem vevő vegyületek, például fémionok, detergensek és hidrofób molekulák.
Az enzimaktivitás optimális körülményeinek meghatározása
Míg az irodalomban számos enzimvizsgálatot írtak le, ezeket az eljárásokat a vizsgált enzim egyedi követelményeihez kell igazítani. Az enzim specifikus aktivitása számos tényezőtől függ, beleértve a pH-t, a hőmérsékletet, az ionerősséget és a vizsgálatban lévő összes komponens koncentrációját. Olyan körülmények között, mint a pH, az enzimaktivitás gyakran haranggörbére hasonlít. A legmagasabb aktivitást egy adott pH-nál Vmax-ként jelentik, a görbe mindkét végén csökkenő aktivitás figyelhető meg. Néhány enzim esetében további megfontolásokat igényelhetnek a reakcióban közvetlenül nem résztvevő vegyületek, például fémionok, detergensek és hidrofób molekulák.
Enzim Assay Components
Néhány enzim esetében a víz a standard oldószer, mivel ez ugyanaz a vízalapú környezet, amely a sejtekben is megtalálható. Néhány esetben azonban szerves oldószereket használnak, ha az enzimek vagy enzimkomponensek vízben nem oldódnak. Ezenkívül a szubsztrátok és kofaktorok, az enzimatikus reakciók katalizátorai szintén kritikus összetevői az enzimaktivitás vizsgálatának. A szubsztrátokat és kofaktorokat gyakran fiziológiai körülmények között betöltött funkcióik alapján azonosítják. Mint ilyenek, a szubsztrátok és kofaktorok széleskörű kölcsönhatásban vannak egymással, és az enzimek sokféleségéhez szükségesek lehetnek. A pufferek és ionok további kritikus elemek, amelyeket figyelembe kell venni, mivel ezek elengedhetetlenek a pH stabilizálásához a vizsgálat során, és közvetlenül befolyásolják az enzimaktivitást. Például az egy- vagy kétértékű fémionok szükségesek lehetnek a reakcióban a kofaktorok katalitikus aktivitásához, és nélkülözhetetlenek az enzimaktivitáshoz.
Enzimteszt elvégzése
Az enzimteszt komponenseinek elkészítése az első gyakorlati lépés. Általában előnyös egy nagyméretű assay-keveréket készíteni, egy aktiváló komponens kivételével, hogy elkerüljük a kis térfogatok pipettázásakor előforduló pipettázási hibákat. Miután az analízis-keveréket elkészítették, a kutatók az aktiváló komponens utolsó komponensét adják hozzá a keverékhez, hogy elindítsák az aktivitásvizsgálatot. Az enzim előkezelése az enzim hűvös hőmérsékleten történő tárolásával és gyakran különböző kémiai vagy fehérjeadalékokkal kritikus tényezők az enzim stabilitásának és maximális aktivitásának biztosítása érdekében a vizsgálat megkezdése előtt. Miután a reakcióanyagokat egy megfigyelőedényben egyesítettük, a reakció megkezdésekor az összes komponenst gyorsan és alaposan össze kell keverni. Az adatrögzítést a keverés után azonnal meg kell kezdeni, és a reakció teljes időbeli lefolyása alatt fel kell rajzolni a vizsgálatból származó detektálható jelet.
Látogasson el dokumentumkeresőnkbe adatlapok, tanúsítványok és műszaki dokumentációk kereséséhez.
Kapcsolódó cikkek
- Explore compound library screening options with our Pharmacologically Active Compounds portfolio.
- Cholesterol esterification enhances transport efficiency in lipoproteins for increased blood stream transport.
- Complete List of Enzyme Commission Numbers for metabolics research.
- Az ammónium-szulfát szuszpenzióként szállított enzimekkel való munkavégzésre vonatkozó utasítások
- Enzimreagens A koenzim A (CoA, CoASH vagy HSCoA) a TCA-ciklus első lépésének kulcsfontosságú kofaktora, amely a piruvát oxidációjából származó acetilcsoport átviteléért felelős a citrátot adó oxalacetátra. A Sigma-Aldrich online oldalán keresztül kapható.
- Mindent látni (35)
Kapcsolódó protokollok
- Cathepsin B is a lysosomal cysteine proteinase with broad specificity. This protocol uses Nα–CBZ–Arg–Arg–7–amido–4–methylcoumarin as the substrate for fluorometric detection of Cathepsin B activity.
- Ez az oldal a multiprotein-komplexek további izolálására szolgáló különböző pull-down próbákról nyújt információt, amelyek célja a Cytiva termékeivel történő komponensek azonosítása.
- Follow our procedure for the determination of alpha-Amylase activity. This enzymatic assay of a-Amylase guides you through the entire process and necessary calculations.
- This procedure may be used for all Catalase products.
- To measure hyaluronidase activity, a turbidimetric determination assay is used at 600 nm. One unit of hyaluronidase activity will cause a change in absorbance of 0.330 per minute at pH 5.35 at 37 °C.
- Mindent látni (78)
További cikkek és protokollok keresése
Hogyan tudunk segíteni
Kérdés esetén kérjük, küldjön ügyféltámogatási kérelmet
vagy beszéljen ügyfélszolgálatunkkal:
Emailt küldjön custserv@sial.com
vagy hívja a +1 (800) 244-1173-as telefonszámot
További támogatás
- Chromatogram Search
Use the Chromatogram Search to identify unknown compounds in your sample.
- Számológépek és alkalmazások
Web Toolbox - tudományos kutatási eszközök és források az analitikai kémia, az élettudomány, a kémiai szintézis és az anyagtudomány számára.
- Customer Support Request
Ügyfélszolgálat, beleértve a megrendelésekkel, termékekkel, számlákkal és a weboldal technikai kérdéseivel kapcsolatos segítséget.
- FAQ
Explore our Frequently Asked Questions for answers to commonly asked questions about our products and services.
Az olvasás folytatásához jelentkezzen be vagy hozzon létre egy felhasználói fiókot.
Még nem rendelkezik fiókkal?