FLAG® tag baktérium és emlős expressziós vektorok
- FLAG® Tag expressziós vektortérképek és 3xFLAG® peptidek
- FLAG® és 3xFLAG® Epitop Tag DNS szekvencia és aminosav peptid szekvencia<<<./a>
- FLAG® és 3x FLAG® Bakteriális és emlős expressziós vektor termékek
- FLAG® és 3xFLAG®: FLAG® és 3xFLAG® és 3xFLAG® ellen kifejlesztett rendkívül specifikus antitestek
- Egy bevált rendszer a fehérjék kimutatására és tisztítására
- . epitópok ellen
- SnapFast™ FLAG® és 3xFLAG® Vector Legacy termékek összehasonlító táblázata
- SnapFast™ FLAG® és 3xFLAG® Vector Legacy termékek összehasonlítása
FLAG® Tag Expression Vektortérképek és 3xFLAG® Peptidek
A bakteriális és emlős expressziós vektorok vagy expressziós konstrukciók olyan cirkularizált DNS transzfekciós plazmidok, amelyeket általában az érdeklődésre számot tartó rekombináns fehérjék túlterjesztésére használnak. A vektorkonstrukcióban kódolt egyedi szekvenciák olyan promóter elemeket tartalmaznak, amelyeket a transzfektált sejtek saját fehérjeszintézis gépezete felismer, hogy a beépített fehérjeszekvencia kifejeződését irányítsa.
A FLAG® Expression System bevált módja a rekombináns fúziós fehérjék expressziójának, tisztításának és kimutatásának. A FLAG® és 3xFLAG® reagensek számos alkalmazásban bizonyították hasznosságukat, például Western blotting, immuncitokémia, immunprecipitáció, áramlási citometria, fehérjetisztítás, fehérje-fehérje kölcsönhatások, sejtek ultrastruktúrájának és fehérje lokalizációjának vizsgálata során. Ezek a kis hidrofil címkék megkönnyítik a rekombináns fúziós fehérjék kiváló kimutatását és tisztítását, amikor a rendkívül specifikus és érzékeny ANTI-FLAG® antitesteket használjuk.
FLAG® és 3xFLAG® Epitop tag DNS szekvencia és aminosav peptid szekvencia<
A FLAG® expressziós rendszer egy rövid, hidrofil, 8 aminosavból álló peptidet használ, amelyet a kívánt rekombináns fehérjéhez fuzionálunk. Hidrofil jellege miatt a FLAG® peptid valószínűleg a fúziós fehérje felszínén helyezkedik el. Ennek eredményeként a FLAG® peptid könnyen hozzáférhető az enterokinázzal (Ek) történő hasításhoz és az antitestekkel történő kimutatáshoz. Ezenkívül a FLAG® peptidcímke kis mérete miatt nem valószínű, hogy eltakarja a fúziós fehérje más epitópjait, doménjeit, vagy megváltoztatja a fúziós fehérje működését, szekrécióját vagy transzportját.
A 3xFLAG® rendszer az eredeti rendszer továbbfejlesztése 3 tandem FLAG® epitóp (22 aminosav) fúziójával. A 3xFLAG® -t tartalmazó fúziós fehérjék kimutatása akár 200-szorosára javul, mint bármely más rendszernél. Az eredeti FLAG® taghez hasonlóan a 3xFLAG® hidrofil, tartalmaz egy Ek hasítási helyet és viszonylag kicsi. Ezért minimálisra csökken a fehérje funkciójának megváltoztatásának, más epitópok blokkolásának vagy az oldhatóság csökkenésének kockázata.
FLAG® és 3xFLAG® aminosav szekvenciák
Az N-terminális FLAG® eltávolítása.(8 aminosav) és 3xFLAG® (22 aminosav) címkék eltávolítása enterokinázzal lehetséges, amely a címkék c-terminális végén lévő Asp-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys aminosav szekvenciát követve hasít.
FLAG®és 3x FLAG® baktérium és emlős expressziós vektor termékek
A klasszikus FLAG® és 3xFLAG® expressziós vektorokat SnapFast™ expressziós vektorokká alakítottuk át - két magasan funkcionális rendszert egyesítve egyetlen termékben. A SnapFast™ rendszerrel kapcsolatos további információk a Háttér & Bélyeg; Népszerű vektorok, kiválasztási táblázatok és a SnapFast™ GYIK.
A FLAG® és a 3xFLAG® vektorok baktériumos és emlősök általi expresszióhoz állnak rendelkezésre, T7, Tac vagy CMV promóterek használatával. A vektorok enterokináz hasítóhellyel rendelkeznek a tag eltávolításához a tisztított fehérjéből. A c-myc-vel együtt egyes vektorok kettős jelölést biztosítanak. A vektorok gyorsreferencia specifikációit lásd az alábbi táblázatokban, és a termékoldalakra mutató linkekre kattintva további információkat találsz, beleértve a vektor térképeket is.
FLAG® és 3xFLAG®:
A rekombináns fehérjék alacsony szintű expressziója emlőssejtekben gyakori probléma, amely gyakran megnehezíti vagy lehetetlenné teszi az epitópcímkék kimutatását. A 3x FLAG® ANTI-FLAG® M2 Ab és anti-mouse-HRP használatával történő kimutatása 20-200-szor érzékenyebb, mint bármelyik általánosan használt tag. A p3xFLAG® vektorok széles választéka az erős CMV promótert használja az expresszió vezérlésére.
Western blot tisztított 3xFLAG® bakteriális alkalikus foszfatáz és FLAG® bakteriális alkalikus foszfatáz nitrocellulózmembránra átvitt eredménye. A detektálást ANTI-FLAG® M2 monoklonális antitesttel mint elsődleges, anti egér-HRP másodlagos antitesttel és ECL™ kemilumineszcens szubsztráttal végeztük.
A GST és a fent felsorolt címkék C-terminális fúzióját elkészítettük és Western Blotokon elemeztük. Minden fehérjét a megfelelő tag-antitestek, anti-egér HRP és ECL segítségével detektáltunk.
Nagyon specifikus antitestek a FLAG® ellen. és 3xFLAG® epitópok ellen
A FLAG® és 3xFLAG® szekvenciák több, eltérő felismerési és kötődési tulajdonságokkal rendelkező, nagymértékben specifikus ANTI-FLAG® monoklonális (M1, M2, M5) és poliklonális antitest és konjugátum kötőhelyeit tartalmazzák. Az ANTI-FLAG® antitestek a legtöbb emlős- és baktériumsejt-lizátumban kevés vagy egyáltalán nem mutatnak keresztreaktivitást. Az egylépéses tisztítási formátumok közé tartoznak az affinitás gélek és a 96 lyukú lemezek.
SnapFast™ FLAG®<</sup> és 3xFLAG® Vector Legacy termékek összehasonlító táblázata
Megjegyzés: Ha korábban már használt FLAG® vektort, ez a táblázat segít kiválasztani a legközelebbi SnapFast™ FLAG® és 3xFLAG® vektort.
Az olvasás folytatásához jelentkezzen be vagy hozzon létre egy felhasználói fiókot.
Még nem rendelkezik fiókkal?