Fehérjekoncentráció és puffercsere
A fehérjekoncentrációt és a puffercserét gyakran használják a fehérje- és antitesttisztítás, a bioprocesszálás és a proteomikai analízis munkafolyamatok során. A makromolekuláris oldatok, például fehérjék, enzimek, antitestek és vírusok mintakészítése során gyakran nagy mennyiségű hígított fehérjék és más biomolekulák keletkeznek olyan pufferekben, amelyek nem kompatibilisek a későbbi folyamatokkal vagy detektálással. A minta extrakcióját követően a hígított fehérjéket gyakran koncentrálni és tisztítani kell az elemzés vagy felhasználás előtt.
Fehérjekoncentrálás
A fehérjék koncentrálására több módszer is létezik, beleértve a porózus membránszűrőkkel történő szűrést, a dialízist hiperozmotikus oldatokban és a kicsapást/sózást. Az ultraszűrés olyan kényelmes módszert biztosít, amely félig áteresztő membránokat használ a fehérjék nyomás vagy centrifugális erő alatti koncentrálására, a fehérjék minimális denaturációja, inaktiválása és lebomlása mellett. Ezzel a technikával a felesleges folyadék áthalad a szűrőn, miközben a célfehérje visszatartásra kerül, így a minta térfogatának csökkentésével nő a fehérjekoncentráció.
Fehérje dúsítás
A fehérje dúsítás során a biológiai mintában lévő fehérjék meghatározott csoportjait vagy típusait koncentrálják további elemzés céljából. A fehérjedúsítási módszereket az alacsonyabundanciájú fehérjék izolálására és a minta összetettségének csökkentésére használják. A dúsítással a célfehérjéket elkülönítik és koncentrálják a jobb downstream proteomikai elemzés érdekében. Az ultraszűrést gyakran használják a fehérjedúsítás során a fehérjék molekulatömeg alapján történő elkülönítésére.
Puffercsere és sótalanítás
A purifizett fehérjéket gyakran át kell helyezni egy megfelelő pufferbe a további elemzéshez. A puffercsere, a sótalanítás és a detergensek eltávolítása többek között a következő módszerekkel valósítható meg:
- Dialízis: Az olyan kis áteresztő molekulákat, mint a sók, mosószerek, oldószerek és egyéb szennyeződések eltávolítása a membránon való átjutási képességük alapján történik.
- oszlopkromatográfia: A sókat gélszűrő oszlopok segítségével távolítják el, amelyek méretkizárásra támaszkodnak az elválasztás során.
- Diafiltráció: A sókat, mosószereket és egyéb szennyeződéseket molekulaméretük alapján porózus ultraszűrő membránok segítségével nyomás vagy centrifugális erő hatására távolítják el.
Kapcsolódó műszaki cikkek
- Large-volume centrifugal filter devices are a convenient alternative to stirred cell ultrafiltration devices for purifying proteins from large volumes of solution.
- Desalting at laboratory scale is a well-proven, simple, and fast method that will rapidly remove low molecular weight contaminants at the same time as transferring the sample into the desired buffer in a single step.
- Amicon Stirred Cells concentrate and buffer-exchange macrosolutes efficiently with pressure-driven filtration.
- For filtering large volumes of biological solutions, we manufacture specialized equipment including centrifugal filtering devices, discs, cells and solvents.
- Explore ultrafiltration membrane principles and benefits for protein sample preparation, including solvent exchange and sample concentration.
- Mindent látni (8)
Kapcsolódó protokollok
- Ezek a táblázatok segítenek eligazodni számos gyakori pufferoldat pH és pKa szerinti elkészítésében. Válasszon egy olyan puffert, amelynek pH-tartománya az adott vizsgálathoz megfelelő.
- This page shows how to perform sample desalting, buffer exchange and concentration for affinity chromatography of tagged proteins.
- User guide for Amicon® Stirred cells including features, operation, specifications, and troubleshooting.
- Detergents are frequently used to solubilize proteins and nucleic acids during purification, but the presence of detergents may interfere with downstream analyses.
- If an antibody must be purified from a small sample volume (0.5-10 mL), then the Amicon® Pro Purification System is recommended.
- Mindent látni (21)
További cikkek és protokollok keresése
Az olvasás folytatásához jelentkezzen be vagy hozzon létre egy felhasználói fiókot.
Még nem rendelkezik fiókkal?