Przejdź do zawartości
Merck
  • Evaluation of the sensitivity, responsiveness and reproducibility of primary rainbow trout hepatocyte vitellogenin expression as a screening assay for estrogen mimics.

Evaluation of the sensitivity, responsiveness and reproducibility of primary rainbow trout hepatocyte vitellogenin expression as a screening assay for estrogen mimics.

Aquatic toxicology (Amsterdam, Netherlands) (2015-01-07)
Maria T Hultman, Jan Thomas Rundberget, Knut Erik Tollefsen
ABSTRAKT

Vitellogenin (Vtg) induction in primary fish hepatocytes has been proposed as an in vitro screening assay for ER agonists and antagonists, but has not yet been used extensively as a high-throughput screening tool due to poor reproducibility, sensitivity and overall feasibility. The present work has evaluated the role of seasonal variation, normalization, optimal culture and assay conditions on the sensitivity, responsiveness and reproducibility of in vitro vtg gene mRNA and protein expression in rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) primary hepatocytes using the xenoestrogen 17α-ethynylestradiol (EE2) as a test chemical. The results show that primary hepatocytes display a relatively high individual and seasonal variation in both Vtg mRNA and protein induction potential, although less variance was observed in assay sensitivity. Data normalization of assay response to maximum (3 nM EE2) and minimum (DMSO) Vtg production dramatically reduced this variance and led to improved assay reproducibility. A time-dependent response was observed both for mRNA and protein expression, reaching maximum Vtg induction after 96 h of exposure, although reproducible concentration response curves for both Vtg mRNA and protein could be obtained already after 48 h. A need for chemical re-exposure of the hepatocytes was identified to be important for sustaining exposure concentrations in extended studies (>48 h), whereas different plate formats (96, 24 or 6 wells) did not affect the bioassay performance. In conclusion, standardization of hepatocyte bioassay and test conditions as well as data-normalization procedures are proposed to be instrumental for more consistent and comparable results in future use of this in vitro assay.

MATERIAŁY
Numer produktu
Marka
Opis produktu

Sigma-Aldrich
Ammonium acetate, 99.999% trace metals basis
Informacje o cenach i dostępności nie są obecnie dostępne.
Sigma-Aldrich
Sodium bicarbonate, tested according to Ph. Eur.
Informacje o cenach i dostępności nie są obecnie dostępne.
Supelco
Ammonium acetate, LiChropur, eluent additive for LC-MS
Informacje o cenach i dostępności nie są obecnie dostępne.
Supelco
Sodium carbonate, reference material for titrimetry, certified by BAM, >99.5%
Informacje o cenach i dostępności nie są obecnie dostępne.
Sigma-Aldrich
3,3′,5,5′-Tetramethylbenzidine, ≥98.0% (NT)
Informacje o cenach i dostępności nie są obecnie dostępne.
Sigma-Aldrich
Dansyl chloride, suitable for fluorescence, BioReagent, ≥99.0% (HPLC)
Informacje o cenach i dostępności nie są obecnie dostępne.
Supelco
Acetone, analytical standard
Informacje o cenach i dostępności nie są obecnie dostępne.
Sigma-Aldrich
Ammonium acetate solution, BioUltra, for molecular biology, ~5 M in H2O
Informacje o cenach i dostępności nie są obecnie dostępne.
Sigma-Aldrich
Sodium carbonate, BioUltra, anhydrous, ≥99.5% (calc. on dry substance, T)
Informacje o cenach i dostępności nie są obecnie dostępne.
Sigma-Aldrich
Ammonium acetate, BioUltra, for molecular biology, ≥99.0%
Informacje o cenach i dostępności nie są obecnie dostępne.
Sigma-Aldrich
Acetone, ≥99%, meets FCC analytical specifications
Informacje o cenach i dostępności nie są obecnie dostępne.
Sigma-Aldrich
Copper(II) sulfate, anhydrous, powder, ≥99.99% trace metals basis
Informacje o cenach i dostępności nie są obecnie dostępne.
Sigma-Aldrich
Acetone, natural, ≥97%
Informacje o cenach i dostępności nie są obecnie dostępne.
Sigma-Aldrich
3,3′,5,5′-Tetramethylbenzidine, ≥99%
Informacje o cenach i dostępności nie są obecnie dostępne.
Sigma-Aldrich
Sodium carbonate, anhydrous, powder, 99.999% trace metals basis
Informacje o cenach i dostępności nie są obecnie dostępne.
Sigma-Aldrich
Sodium bicarbonate, BioXtra, 99.5-100.5%
Informacje o cenach i dostępności nie są obecnie dostępne.
Sigma-Aldrich
Dansyl chloride, BioReagent, suitable for amino acid labeling, powder and chunks, ≥99% (HPLC)
Informacje o cenach i dostępności nie są obecnie dostępne.
Sigma-Aldrich
Sodium bicarbonate, powder, BioReagent, for molecular biology, suitable for cell culture, suitable for insect cell culture
Informacje o cenach i dostępności nie są obecnie dostępne.
Sigma-Aldrich
Sodium carbonate, BioXtra, ≥99.0%
Informacje o cenach i dostępności nie są obecnie dostępne.
Sigma-Aldrich
Ammonium acetate, BioXtra, ≥98%
Informacje o cenach i dostępności nie są obecnie dostępne.
Sigma-Aldrich
Ammonium acetate solution, for molecular biology, 7.5 M
Informacje o cenach i dostępności nie są obecnie dostępne.
Sigma-Aldrich
Ammonium acetate, reagent grade, ≥98%
Informacje o cenach i dostępności nie są obecnie dostępne.
Sigma-Aldrich
3,3′,5,5′-Tetramethylbenzidine, tablet, 1 mg substrate per tablet
Informacje o cenach i dostępności nie są obecnie dostępne.
Sigma-Aldrich
3,3′,5,5′-Tetramethylbenzidine, ≥98% (TLC)
Informacje o cenach i dostępności nie są obecnie dostępne.
Supelco
3,3′,5,5′-Tetramethylbenzidine, standard for GC
Informacje o cenach i dostępności nie są obecnie dostępne.
Sigma-Aldrich
Sodium hydrogencarbonate, −40-+140 mesh, ≥95%
Informacje o cenach i dostępności nie są obecnie dostępne.
Supelco
Acetone, Pharmaceutical Secondary Standard; Certified Reference Material
Informacje o cenach i dostępności nie są obecnie dostępne.
Sigma-Aldrich
Sodium carbonate, anhydrous, free-flowing, Redi-Dri, ACS reagent, ≥99.5%
Informacje o cenach i dostępności nie są obecnie dostępne.
Supelco
Dansyl chloride, for HPLC derivatization, LiChropur, ≥99.0% (HPLC)
Informacje o cenach i dostępności nie są obecnie dostępne.
Sigma-Aldrich
Acetone, ACS reagent, ≥99.5%
Informacje o cenach i dostępności nie są obecnie dostępne.