Epigenetika
Az epigenetika olyan stabil, de potenciálisan reverzibilis változásokat ír le a génexpresszióban, amelyek a DNS-szekvencia tartós változása nélkül következnek be, és amelyek még mindig továbbadhatók generációról generációra. Az epigenetikusan szabályozott gének a DNS bármiféle változása nélkül aktiválódnak vagy elnyomódnak. A kutatók három központi epigenetikai mechanizmust tanulmányoztak alaposan, amelyek alapvető szerepet játszanak a génszabályozásban: a DNS-metilációt, a hisztonmódosulást és az RNS-szabályozást. Kombinált, átfogó epigenetikai portfóliónk kiváló minőségű termékeket kínál mindhárom központi epigenetikai mechanizmus vizsgálatához használt technikák elvégzéséhez.
Bővebben
Hisztonmódosítás
A kromatin a genomi DNS és a hozzá kapcsolódó fehérjék komplexe a sejtmagban. A kromatin szerkezetének módosításai és a kromatinfehérjék kölcsönhatása közvetlen szerepet játszik az epigenetikai szabályozásban. A kromatin szerkezetét a hisztonok, a kromatinfehérjék egyik fő osztálya segíti elő. A hisztonok alkotják a nukleoszómát, egy olyan komplexet, amely a H2A, H2B, H3 és H4 hisztonok egyenként 2 alegységét tartalmazza. A magkomplex külső oldalán a H1 linker hiszton foglalja el az internukleoszomális DNS-t. Ez a nukleoszóma-komplex tartja fenn a kromatin tömör szerkezetét. A helyspecifikus hisztonmódosulások, mint például a metiláció, acetiláció, foszforiláció, ubikvitináció és citrullináció, megváltoztathatják a helyi kromatinszerkezetet, és szabályozhatják a transzkripciót, a javítást, a rekombinációt és a replikációt. A kromatinhoz kapcsolódó nem-hisztonfehérjék sokszínű csoportot alkotnak, több ezer különböző fehérjetípussal, beleértve a transzkripciós faktorokat, polimerázokat, hormonreceptorokat és más nukleáris enzimeket.
DNS-metiláció
A DNS-metiláció fontos epigenetikai mechanizmus, amely szabályozza a géncsendesítést, az imprintinget, az embrionális fejlődést és a kromoszóma stabilitását. A DNS-metiláció elsősorban a CpG-dinukleotidokon belül a citozin-maradékok 5 szénatomos helyzetén történik, 5-metil-citozinokat (5-mC) képezve. A reakciót a DNS-metiltranszferázok (DNMT-k) katalizálják. Az 5-metilcitozin-maradványokat a TET enzimek hidroxilálhatják is 5-hidroxi-metilcitozin (5-hmC) képződése érdekében, amelynek szerepe eltér az 5-mC-től. Olyan robusztus eszközöket kínálunk, amelyekkel nemcsak az 5-mC és az 5-hmC kimutatása és mennyiségi meghatározása, hanem e módosítások pontos megkülönböztetése is lehetséges.
Chromatin immunprecipitációs (ChIP) készletek
A hisztonmódosulások kvantitatív kimutatása fontos a sejtfolyamatok epigenetikai szabályozásának jobb megértéséhez a normál vagy rákos szövetekben. A legszélesebb körben használt technika annak vizsgálatára, hogy a hisztonmódosulások és más DNS-kötő fehérjék, például a transzkripciós faktorok hogyan befolyásolják a génexpressziót, a kromatin immunprecipitáció (ChIP), kombinálva a minőségi polimeráz láncreakcióval (qPCR). A ChIP során a fehérjéket kémiailag keresztkötik a DNS-szekvenciákhoz, majd a keresztkötésű komplexek immunprecipitációja következik antitestek és gyöngyök segítségével a módosított hiszton vagy más, érdeklődésre számot tartó fehérjék lehúzására. A leggyakrabban vizsgált és legjobban ismert hisztonmódosulások az acetiláció, a foszforiláció, a metiláció és az ubikvitináció. A hisztonmódosulások szabályozzák a DNS-transzkripciót, a javítást, a rekombinációt és a replikációt, és megváltoztathatják a helyi kromatinarchitektúrát. Fedezze fel a komplex hiszton-módosítási mintázatok elemzéséhez szükséges készletek széles választékát.
Transzkripciós és poszttranszkripciós kontroll: RNS-szabályozás
A génexpresszió kutatása hagyományosan a transzkripciós szabályozásra összpontosított a transzkripciós faktorok és a specifikus kötőhelyek kölcsönhatásán, a kromatinon belüli hisztonok módosításain és a génátírás változásaihoz kapcsolódó koordinált kromatin dinamikán keresztül. A mai génexpressziós kutatások az RNS-szabályozás dinamikájának megértésére törekednek, azzal a végső céllal, hogy áthidalják a transzkripciós szabályozás és a fehérjeexpresszió közötti szakadékot. Az RNS-kötő fehérjék (RBP-k) kulcsszerepet játszanak a génexpresszió poszt-transzkripcionális szabályozásában.
RNS-szabályozás: RNS-kötő fehérje immunprecipitációs (RIP) készletek
A RIP tekinthető a legismertebb ChIP alkalmazás RNS-analógjának. A RIP specifikus RNS-molekulák azonosítására használható, amelyek specifikus nukleáris vagy citoplazmatikus kötőfehérjékhez kapcsolódnak. A RIP az RNS-kötő fehérjék endogén komplexeinek immunprecipitációjával és az immunprecipitált komplexhez kapcsolódó RNS-fajok koizolálásával kezdődik. Ezen RNS fajok tisztítása után számos alkalmazással, többek között kvantitatív RT-PCR, microarray analízis (RIP-Chip) és nagy áteresztőképességű szekvenálás (RIP-Seq) segítségével vizsgálhatók és azonosíthatók mRNS-ként vagy nem kódoló RNS-ként.
Kapcsolódó termékforrások
- Article: ChIC/CUT&RUN Kits
Chromatin Immunocleavage (ChIC) kits and CUT&RUN technology overview for improved chromatin isolation and downstream analyses.
- Article: RNA Immunoprecipitation Chip (RIP) Assay
RNA Immunoprecipitation (RIP) is an essential method for analyzing proteins that interact with and modify the function of mRNAs, small RNAs, viral RNAs, or lncRNAs.
- Article: Chromatin Immunoprecipitation (ChIP) Assay
Use chromatin immunoprecipitation (ChIP) to detect and relatively quantify specific protein-DNA and protein-protein interactions in vivo at a single locus or multiple loci.
Az olvasás folytatásához jelentkezzen be vagy hozzon létre egy felhasználói fiókot.
Még nem rendelkezik fiókkal?