Polimeráz láncreakció (PCR) alkalmazások
A polimeráz láncreakció (PCR) egy hatékony molekuláris biológiai alaptechnika, amely hatékony és gyors in vitro módszer a különböző forrásokból származó specifikus DNS- vagy RNS-szekvenciák enzimatikus amplifikációjára. A standard PCR a cél-DNS-ből, a cél-DNS-szekvenciát szegélyező szintetikus oligonukleotid-primerekből, egy termosztatibilis DNS-polimerázból (általában Taq-polimeráz) és nukleotidokból áll. Termikus ciklert használva minden egyes amplifikációs ciklus során három szakasz zajlik, beleértve a kettős szálú DNS (dsDNS) denaturálását különálló egyszálú DNS-é, a primerek lágyítását a cél-DNS-szekvenciához, és a hosszabbítást, amikor a DNS-polimeráz meghosszabbítja a DNS-t a primerekről, új dsDNS-t hozva létre egy régi és egy új szálból álló új dsDNS-t. Az egyik ciklusban szintetizált szálak a következő ciklusban templátként szolgálnak, így a DNS mennyisége mindössze 20 ciklus alatt milliószorosára nő.
Kiemelt kategóriák
Molekuláris klónozási és fehérjeexpressziós módszerek és protokollok a megbízható klónozáshoz és a robusztus fehérjeexpresszióhoz rovar, baktérium és emlős fehérjeexpressziós vektorokból.
Epigenetikai reagensek és erőforrások az RNS-fajok, a DNS-metiláció, a kromatinmódosulások és a hisztonmódosulások vizsgálatához.
Körű bélmikrobiom-elemzés: Fedezzen fel egy holisztikus megoldást, amely magában foglalja a minta előkészítését, a szekvenálást, a bioinformatikát és a statisztikát. A 16S-től a WGS-ig.
Reverse transzkriptáz PCR (RT-PCR)
Az RT-PCR vagy reverz transzkriptáz PCR a standard PCR technika egy változata, amely nagyon kis mintákból nyert specifikus mRNS felerősítését foglalja magában. Ez kiküszöböli a hagyományos klónozási technikákhoz szükséges fáradságos mRNS-tisztítási folyamatot. Az RT-PCR esetében a standard PCR-reagensek mellett reverz transzkriptázt és RNS-mintát is használnak. A reakcióelegyet 37 ˚C-ra melegítjük, ami lehetővé teszi a komplementer cDNS-kópia előállítását az RNS-mintából a reverz transzkriptáz segítségével. Ez a cDNS ezután az egyik primerhez kapcsolódik, ami az első szál szintéziséhez vezet. Innen következik a standard PCR, amelyben végül dsDNS keletkezik. Az RT-PCR-t gyakran kombinálják valós idejű PCR-rel (qPCR), amelyet széles körben használnak a sejtekben és szövetekben lévő transzkriptumok szintjének számszerűsítésére.
Hot Start PCR
A Hot Start PCR olyan technológia, amely a reakció beállítása során gátolja a forró indítású Taq-polimerázt vagy a módosított dNTP-k beépítését, amíg egy hőaktiválási lépés meg nem történik. A hot start polimeráz aktivitásának megállítására különböző módszerek állnak rendelkezésre, többek között a kémiai módosítás, az antitest-közvetített és az aptamer-közvetített módszerek.
Endpont PCR a hosszú és pontos célpont-amplifikációhoz
A végpont PCR-t gyakran használják a célpontok jelenlétének és relatív mennyiségének kimutatására a reakció befejezésekor. A standard PCR során előállított szekvenciák korlátozott, körülbelül 5 kb-os hosszát részben a "korrektúrázó" aktivitást biztosító további faktorok beépítésével hidalják át. A hosszú és pontos (LA) PCR egy második, 3′→5′ exonukleázzal rendelkező termosztatibilis polimeráz használatát foglalja magában a terminális nukleotid-hibák javítására, ami jelentősen megnövelt hűséget és akár 40 kb hosszúságú DNS-célpontok amplifikálásának képességét eredményezi.
Látogasson el dokumentumkeresőnkbe adatlapok, tanúsítványok és műszaki dokumentációk kereséséhez.
Kapcsolódó cikkek
- A PCR és az RT-PCR problémái a gélelektroforézis elemzése során azonosíthatók, mint például a sávok hiánya, a nem specifikus tiltások jelenléte, a túlzott elkenődés és a sávok elkenődése.
- Digital PCR enables absolute quantification and detection of minority sequences against similar majority sequences, such as somatic mutations.
- Ethidium bromide is a well-known and widely used fluorescent dye in biotechnology research.
- A polimeráz láncreakció a molekuláris biológia egyik legszélesebb körben használt technikája. A PCR folyamat három fő lépésből áll: denaturálás, lágyítás és hosszabbítás.
- The purpose of Hot Start PCR is to inhibit the PCR reaction in order to reduce nonspecific amplification, prevent the formation of primer dimers, and increase product yields.
- Mindent látni (71)
Kapcsolódó protokollok
- Ismerje meg a standard PCR protokoll lépéseit, és tekintse át a reagenslistákat vagy a ciklikus paramétereket. Ez a módszer a DNS rutin PCR-amplifikációjához standard Taq DNS-polimerázt használ.
- Az izzítás két egyszálú, komplementer szekvenciájú oligonukleotid melegítésének és hűtésének folyamata.
- Learn about methods for calculating oligonucleotide melting temperature (Tm).
- A PCR munkafolyamatok változékonyságát befolyásolja a mintaforrás, a reverz transzkripció és a vizsgálat tervezése, ami hatással van a reprodukálhatóságra.
- Extract-N-Amp kit protocol provides rapid DNA extraction yielding PCR-ready samples in 15 minutes with optimized PCR ReadyMix.
- Mindent látni (63)
További cikkek és protokollok keresése
Hogyan tudunk segíteni
Kérdés esetén kérjük, küldjön ügyféltámogatási kérelmet
vagy beszéljen ügyfélszolgálatunkkal:
Emailt küldjön custserv@sial.com
vagy hívja a +1 (800) 244-1173-as telefonszámot
További támogatás
- Chromatogram Search
Use the Chromatogram Search to identify unknown compounds in your sample.
- Számológépek és alkalmazások
Web Toolbox - tudományos kutatási eszközök és források az analitikai kémia, az élettudomány, a kémiai szintézis és az anyagtudomány számára.
- Customer Support Request
Ügyfélszolgálat, beleértve a megrendelésekkel, termékekkel, számlákkal és a weboldal technikai kérdéseivel kapcsolatos segítséget.
- FAQ
Explore our Frequently Asked Questions for answers to commonly asked questions about our products and services.
Az olvasás folytatásához jelentkezzen be vagy hozzon létre egy felhasználói fiókot.
Még nem rendelkezik fiókkal?