Ugrás a tartalomra
Merck
KezdőlapApplicationsGenomicsPolimeráz láncreakció alkalmazások

Polimeráz láncreakció (PCR) alkalmazások

RT-PCR lépések az RNS izolálásától az amplifikációig - A fordított transzkriptáz (RT) PCR a következő lépésekből áll: az RNS vagy mRNS izolálása, a primer lágyítása, az első szál szintézise és a PCR-amplifikáció.

A polimeráz láncreakció (PCR) egy hatékony molekuláris biológiai alaptechnika, amely hatékony és gyors in vitro módszer a különböző forrásokból származó specifikus DNS- vagy RNS-szekvenciák enzimatikus amplifikációjára. A standard PCR a cél-DNS-ből, a cél-DNS-szekvenciát szegélyező szintetikus oligonukleotid-primerekből, egy termosztatibilis DNS-polimerázból (általában Taq-polimeráz) és nukleotidokból áll. Termikus ciklert használva minden egyes amplifikációs ciklus során három szakasz zajlik, beleértve a kettős szálú DNS (dsDNS) denaturálását különálló egyszálú DNS-é, a primerek lágyítását a cél-DNS-szekvenciához, és a hosszabbítást, amikor a DNS-polimeráz meghosszabbítja a DNS-t a primerekről, új dsDNS-t hozva létre egy régi és egy új szálból álló új dsDNS-t. Az egyik ciklusban szintetizált szálak a következő ciklusban templátként szolgálnak, így a DNS mennyisége mindössze 20 ciklus alatt milliószorosára nő.



Kiemelt kategóriák

Molekuláris klónozás és fehérjeexpresszió
Molekuláris klónozás és fehérjeexpresszió

Molekuláris klónozási és fehérjeexpressziós módszerek és protokollok a megbízható klónozáshoz és a robusztus fehérjeexpresszióhoz rovar, baktérium és emlős fehérjeexpressziós vektorokból.

Termékek boltja
Epigenetika
Epigenetika

Epigenetikai reagensek és erőforrások az RNS-fajok, a DNS-metiláció, a kromatinmódosulások és a hisztonmódosulások vizsgálatához.

Termékek boltja
ReagentPlus oldószer minőségű termékek
Mikrobiom

Körű bélmikrobiom-elemzés: Fedezzen fel egy holisztikus megoldást, amely magában foglalja a minta előkészítését, a szekvenálást, a bioinformatikát és a statisztikát. A 16S-től a WGS-ig.

Termékek boltja

Reverse transzkriptáz PCR (RT-PCR)

Az RT-PCR vagy reverz transzkriptáz PCR a standard PCR technika egy változata, amely nagyon kis mintákból nyert specifikus mRNS felerősítését foglalja magában. Ez kiküszöböli a hagyományos klónozási technikákhoz szükséges fáradságos mRNS-tisztítási folyamatot. Az RT-PCR esetében a standard PCR-reagensek mellett reverz transzkriptázt és RNS-mintát is használnak. A reakcióelegyet 37 ˚C-ra melegítjük, ami lehetővé teszi a komplementer cDNS-kópia előállítását az RNS-mintából a reverz transzkriptáz segítségével. Ez a cDNS ezután az egyik primerhez kapcsolódik, ami az első szál szintéziséhez vezet. Innen következik a standard PCR, amelyben végül dsDNS keletkezik. Az RT-PCR-t gyakran kombinálják valós idejű PCR-rel (qPCR), amelyet széles körben használnak a sejtekben és szövetekben lévő transzkriptumok szintjének számszerűsítésére.

Hot Start PCR

A Hot Start PCR olyan technológia, amely a reakció beállítása során gátolja a forró indítású Taq-polimerázt vagy a módosított dNTP-k beépítését, amíg egy hőaktiválási lépés meg nem történik. A hot start polimeráz aktivitásának megállítására különböző módszerek állnak rendelkezésre, többek között a kémiai módosítás, az antitest-közvetített és az aptamer-közvetített módszerek. 

Endpont PCR a hosszú és pontos célpont-amplifikációhoz

A végpont PCR-t gyakran használják a célpontok jelenlétének és relatív mennyiségének kimutatására a reakció befejezésekor. A standard PCR során előállított szekvenciák korlátozott, körülbelül 5 kb-os hosszát részben a "korrektúrázó" aktivitást biztosító további faktorok beépítésével hidalják át. A hosszú és pontos (LA) PCR egy második, 3′→5′ exonukleázzal rendelkező termosztatibilis polimeráz használatát foglalja magában a terminális nukleotid-hibák javítására, ami jelentősen megnövelt hűséget és akár 40 kb hosszúságú DNS-célpontok amplifikálásának képességét eredményezi.

Dokumentum keresés
Konkrétabb információkat keres?

Látogasson el dokumentumkeresőnkbe adatlapok, tanúsítványok és műszaki dokumentációk kereséséhez.

Dokumentumok keresése

A folytatáshoz jelentkezzen be

Az olvasás folytatásához jelentkezzen be vagy hozzon létre egy felhasználói fiókot.

Még nem rendelkezik fiókkal?