qPCR
A kvantitatív valós idejű PCR (qPCR) fluoreszcens riportmolekulákat használ az amplifikált termékek mennyiségi meghatározásához. A hagyományos PCR-hez hasonlóan egy DNS-, cDNS- vagy RNS-templátot amplifikálnak, de minden egyes ciklusban fluoreszcens jeleket figyelnek a relatív vagy abszolút mennyiségi meghatározás érdekében.
Ez a technika a kutatás számos területén hasznos, beleértve a génexpresszió elemzését, genotipizálást, mikroRNS-elemzést, genetikai variációelemzést és fehérjeelemzést.
Kiemelt kategóriák
A polimeráz láncreakció (PCR) a molekuláris biológiai laboratóriumok egyik legfontosabb eleme. A PCR-t a DNS több nagyságrenddel történő felerősítésére használják, és reagensünk és erőforrásaink számos kutatási munkafolyamathoz alkalmasak, beleértve a génexpressziós elemzést, a genotipizálást, a szekvenálást és a mutagenezis alkalmazási igényeit.
Molekuláris klónozási és fehérjeexpressziós módszerek és protokollok a megbízható klónozáshoz és a robusztus fehérjeexpresszióhoz rovar, baktérium és emlős fehérjeexpressziós vektorokból.
Epigenetikai reagensek és erőforrások az RNS-fajok, a DNS-metiláció, a kromatinmódosulások és a hisztonmódosulások vizsgálatához.
Körű bélmikrobiom-elemzés: Fedezzen fel egy holisztikus megoldást, amely magában foglalja a minta előkészítését, a szekvenálást, a bioinformatikát és a statisztikát. A 16S-től a WGS-ig.
Hogyan elemezzük a qPCR adatokat
A riportmolekulák fluoreszcenciáját mérjük és számszerűsítjük; ezek jellemzően vagy festékek (i.pl. SYBR® Green, etídium-bromid), amelyek a kettős szálú DNS bázisai között interkalálódnak, vagy olyan szondák, amelyeket úgy terveztek, hogy egy adott szekvenciához kötődjenek (i.pl. Molecular Beacons, TaqMan® szondák) a DNS-en.
A qPCR-adatok relatív mennyiségi meghatározása
A qPCR-adatok esetében két fő mennyiségi meghatározási módszer létezik. A relatív mennyiségi meghatározás, a gyakoribb módszer, ΔΔCt információt használ, amellyel a célgén expresszióját vagy abundanciaarányát határozzák meg a mintában, összehasonlítják egy kontroll génhez, és normalizálják egy referencia gén expressziós arányával. Mivel a célgének és a referenciagének hatékonysági E értékei különböznek, ez a módszer figyelembe veszi az E értékek közötti különbségeket is. Ezt a módszert gyakrabban alkalmazzák a génexpressziós elemzésekben.
Az qPCR-adatok abszolút mennyiségi meghatározása
A második módszer, az abszolút mennyiségi meghatározás a környezeti mikrobiológiában elterjedtebb, és a standardgörbét (SC) használja. Az SC-módszer ismert templátkoncentrációjú hígítási sorozatokat (N0) használ, hogy a log(N0) és a CT (küszöbciklus) lineáris regressziója segítségével standardgörbét hozzon létre. Ezt azután a minta sablonkoncentrációjának kiszámítására használják. A módszer alapja az, hogy a minta hatékonysági értéke megegyezik a standardéval.
Specifikusabb információkat keres?
Látogasson el dokumentumkeresőnkbe adatlapok, tanúsítványok és műszaki dokumentációk kereséséhez.
Kapcsolódó cikkek
- A hagyományos PCR elvégzése után a PCR/qPCR-adatok elemzése agarózgélen vagy újabban kapillárison keresztül történő felbontással történik.
- A valós idejű polimeráz láncreakció lehetővé teszi a kutatók számára, hogy megbecsüljék a mintában lévő kiindulási anyag mennyiségét. Az elemzés dinamikai tartománya sokkal szélesebb, mint a hagyományos PCR-é.
- PCR assay guide navigates you through primer validation and other assay optimization factors to ensure high sensitivity and specificity for optimum DNA/ RNA quantification.
- A PCR munkafolyamatok változékonyságát befolyásolja a mintaforrás, a reverz transzkripció és a vizsgálat tervezése, ami hatással van a reprodukálhatóságra.
- The purpose of Hot Start PCR is to inhibit the PCR reaction in order to reduce nonspecific amplification, prevent the formation of primer dimers, and increase product yields.
- Mindent látni (42)
Kapcsolódó protokollok
- A SYBR Green qPCR protokoll egy olyan módszer, amelyet a génexpresszió és az RT-PCR reakciók pontos mennyiségi meghatározására terveztek.
- Chromatin Immunoprecipitation qPCR for studying gene regulation across conditions.
- Primer Concentration Optimization Protocol creates reaction matrix for testing primer concentrations against various partners.
- Optimization of qPCR conditions is important for the development of a robust assay. The two main approaches are optimization of primer concentration and/or annealing temperatures.
- Multiplex qPCR employing probe-based chemistries is a demanding application that often requires extensive optimization and validation.
- Mindent látni (29)
További cikkek és protokollok keresése
Miben segíthetünk
Kérdés esetén kérjük, küldjön ügyféltámogatási kérelmet
vagy beszéljen ügyfélszolgálatunkkal:
Emailt küldjön custserv@sial.com
vagy hívja a +1 (800) 244-1173-as telefonszámot
További támogatás
- Számológépek és alkalmazások
Web Toolbox - tudományos kutatási eszközök és források az analitikai kémia, az élettudomány, a kémiai szintézis és az anyagtudomány számára.
- Customer Support Request
Ügyfélszolgálat, beleértve a megrendelésekkel, termékekkel, számlákkal és a weboldal technikai kérdéseivel kapcsolatos segítséget.
- FAQ
Explore our Frequently Asked Questions for answers to commonly asked questions about our products and services.
Az olvasás folytatásához jelentkezzen be vagy hozzon létre egy felhasználói fiókot.
Még nem rendelkezik fiókkal?