Klónozás és expresszió
Rekombináns fehérje expressziója emlőssejtekben
A klónozási és génexpressziós technológiákat a kutatók különböző területeken használják a biológiai kérdések széles körének vizsgálatára, beleértve a génműködés megértését, a molekuláris útvonalak elemzését, az embrionális fejlődést, a betegségek kutatását, valamint a biológiai és terápiás készítmények biológiai feldolgozását, hogy csak néhányat említsünk. A gén vagy genetikai szekvencia azonosítása után a kutatóknak a konkrét alkalmazási igény alapján kell kiválasztaniuk a legjobb molekuláris klónozási stratégiát és sejtalapú fehérje-expressziós rendszert. A CRISPR technológiával történő génexpresszióval vagy az RNAi reagensekkel történő géncsendesítéssel kapcsolatos további információkért kérjük, látogasson el gén-expresszió és géncsendesítés oldal.
Kapcsolódó műszaki cikkek
- A "restrikciós enzim" kifejezés az Enterobacteria λ-fág (lambda-fág) vizsgálataiból származik Werner Arber és Matthew Meselson laboratóriumaiban.
- Ez a klónozási protokoll tartalmazza a klónozási rendszer és a plazmidvektor kiválasztását, a plazmid restrikciós emésztését, a fragmentum restrikciós emésztését, a gélkiválasztást, a DNS defoszforilálását és még sok mást.
- A transzfekció genetikai anyagot juttat a sejtekbe, segítve a génexpresszió és a sejtbiológia kutatását.
- The 3xFLAG system enhances fusion protein detection, offering improved sensitivity over traditional methods.
- For best results, ligation reactions must be heat inactivated at 70º C for 15 minutes before transformation. Alternately, the reactions may be purified.
- Mindent látni (33)
Kapcsolódó protokollok
- Restriction enzyme collection has been optimized for digestion using five unique buffers.
- Ez az oldal a Cytiva termékekkel használt pGEX expressziós vektorok jellemzőit ismerteti.
- Cloning process, joining linear DNA into a vector, is crucial for biotechnological experiments, enabling DNA fragment recombinant technology.
- Technikai cikk a kompetens sejtekről. A transzformáció olyan folyamat, amelynek során egyes baktériumok idegen genetikai anyagot (csupasz DNS-t) vesznek fel a környezetből.
- Dephosphorylation of DNA using Calf Intestinal Alkaline Phosphatase, Shrimp Alkaline Phospha, Bovine Intestinal Alkaline Phosphatase
- Mindent látni (36)
További cikkek és protokollok keresése
Fehérjeexpressziós vektorok
A plazmidok vagy fehérjeexpressziós vektorok olyan kör alakú DNS-darabok, amelyek számos funkcionális elemet tartalmaznak a kívánt fehérje klónozásához és expressziójához. A megfelelő expressziós vektor kiválasztását részben a fehérje típusa, a fehérjét expresszálni szándékozó szervezet, valamint a konkrét alkalmazás és a kutató által megválaszolni kívánt tudományos kérdések határozzák meg. A rendelkezésre álló expressziós vektorok széles választéka lehetővé teszi a kutatók számára, hogy kiválasszák, melyik klónozás, klónszelekció és fehérjeexpressziós elem a legalkalmasabb a vizsgálatukhoz. Miután kiválasztották az érdeklődésre számot tartó génszekvenciát és az expressziós vektort, a kutatók általában nukleázokat használnak a vektor specifikus helyeken történő pontos vágásához, hogy lehetővé tegyék az érdeklődésre számot tartó genetikai szekvencia in-frame klónozását és végső soron a gazdaszervezetben történő kifejeződését. Fontos, hogy a kutatók általában kémiailag kompetens sejteket és bakteriális transzformációt használnak a rekombináns DNS-plazmidok befogadására, mivel ezek -70 °C-on fagyasztva tárolva stabilak.
Hogyan transzfektáljuk a sejteket
A sejtek transzfekciója a DNS vagy RNS, illetve fehérjék eukarióta sejtekbe történő bevitelének folyamatát jelenti. A kutatók számára számos fizikai, kémiai és biológiai technológia áll rendelkezésre a fehérjeexpressziós munkafolyamat ezen részének elvégzéséhez. A kutatók általánosan használják a fizikai módszereket, például az elektroporációt, vagy a kémiai módszereket, beleértve a kalcium-foszfátot (CaPi), a polietilénimint (PEI) és a lipofekciós reagenseket. A tudósok rendelkezésére állnak a vírusos transzdukciós rendszerek is, beleértve a lentivirális, onkoretrovirális és adenovirális rendszereket. A vírusos átviteli módszerek használata azonban gyakran további elkülönítést és megfigyelést igényel biológiai biztonsági okokból.
Protein expressziós rendszerek
A kutatók különböző organizmusokat használnak az őket érdeklő fehérjék expressziójára. A kutatók általában baktériumokat használnak, mivel hatékonyan veszik fel az expressziós vektorokat, gyors megduplázódási idővel rendelkeznek, és optimális körülmények között nagy mennyiségű rekombináns fehérjét képesek előállítani. Mivel azonban a baktériumok prokarióta szervezetek, nem képesek a fehérjék poszttranszlációs módosítására, amelyre egyes fehérjéknek szükségük van. Az eukarióta sejtek, beleértve az élesztő és emlős sejtvonalakat, megkönnyítik a fehérjék poszt-transzlációs módosítását (módosításait), és a kutatók általánosan használják őket. A rekombináns fehérjék expressziójához legmegfelelőbb sejtvonal és a fehérjeexpressziós stratégia kiválasztása nagymértékben függ a konkrét alkalmazási igényektől és a tudós által megválaszolni kívánt kérdésektől.
Az olvasás folytatásához jelentkezzen be vagy hozzon létre egy felhasználói fiókot.
Még nem rendelkezik fiókkal?