COLLA-RO

Colagenasa A

from Clostridium histolyticum

• UNSPSC Code: 12352204
• Número CE: 3.4.24.3 (BRENDA, IUBMB)
• NACRES: NA.54
• Specific activity: >0.15 U/mg lyophilizate (Collagenase activity)
• Biological source: Clostridium histolyticum
• Concentration: 1 mg/mL (0.1%, w/v)

Propiedades

• biological source: Clostridium histolyticum
• sterility: non-sterile
• form: lyophilized
• specific activity: >0.15 U/mg lyophilizate (Collagenase activity)
• packaging: pkg of 100 mg (10103578001), pkg of 2.5 g (11088793001), pkg of 500 mg (10103586001)
• manufacturer/tradename: Roche
• concentration: 1 mg/mL (0.1%, w/v)
• color: brown
• optimum pH: 6.0-8.0
• solubility: water: soluble
• suitability: suitable for PCR
• NCBI accession no.: WP_138210331
• UniProt accession no.: A0A4U9RG91
• application(s): cell analysis; life science and biopharma; sample preparation
• foreign activity: Clostripain 9.489 U/mg, Proteases 6.067 U/mg (Azocoll ), Trypsin 0.144 U/mg (with BAEE)
• storage temp.: 2-8°C
• Gene Information: Clostridium histolyticum ... COLA_1(1668506084)

Descripción

General description

La colagenasa es una proteasa que rompe la triple hélice proteica denominada colágeno.[1] Clostridium histolyticum produce seis tipos de colagenasas: α, β, γ, δ, ε y λ. Estas colagenasas son activas frente al tejido conjuntivo y muestran más reactividad hacia la gelatina que hacia el colágeno.[2] La colagenasa obtenida de Clostridium histolyticum tiene una actividad muy fuerte, ya que digiere el colágeno desde ambos extremos, a temperaturas de tan sólo 4-10 °C.[3]

Application

La colagenasa de C. histolyticum es muy utilizada para:

• Desagregación de muchos tipos de tejidos (por ejemplo, pulmón, corazón, músculo, hueso, tejido adiposo, hígado, riñón, cartílago, glándula mamaria, placenta, vasos sanguíneos, cerebro, tumores)
• preparación de suspensiones monocelulares para el establecimiento de sistemas de cultivo celular primario.[4] La colagenasa A se recomienda cuando el rendimiento, la viabilidad y la funcionalidad son importantes.[5]Preparación de células de muchos tipos de tejido, como hepatocitos, adipocitos, islotes pancreáticos, células epiteliales, células musculares, células endoteliales, etc.. Sin embargo, debe determinarse empíricamente la idoneidad de cada lote de la enzima para la ruptura de un tejido concreto.[6][7]

Biochem/physiol Actions

La colagenasa degrada el colágeno nativo. La clostripaína, las enzimas tripsinoides y las proteasas neutras degradan también otras proteínas.
Actividad enzimática:
Actividad de la colagenasa: >0,15 U/mg (según Wünsch) (+25°C, 4-fenilazobenciloxicarbonil-Pro-Leu-Gly-Pro-D-Arg como sustrato)
Actividades enzimáticas contaminantes: tripsina, clostripaína y actividad proteolítica total
La colagenasa A tiene una proporción equilibrada de actividades enzimáticas.

Preparation Note

Activador: Ca²⁺
Inhibidores:
Inhibidores de la colagenasa: EDTA, EGTA, Cys, His, DTT, 2-mercaptoetanol
La colagenasa no es inhibida por el suero.
Inhibidores de la clostripaína: TLCK
Inhibidores de la tripsina: aprotinina, inhibidor de tripsina (clara de huevo, soja)
Concentración de trabajo: de 0,5 a 2,5 mg/ml
Condiciones de almacenamiento (disolución de trabajo): entre -15 y -25 °C
Roche recomienda reconstituir sólo la cantidad de liofilizado necesario para uso inmediato. La disolución reconstituida puede conservarse entre -15 y -25 °C durante un máximo de una semana. Evite la congelación y descongelación repetidas ya que la actividad disminuye después de la reconstitución.

Mantenga el recipiente herméticamente cerrado y en un lugar seco y bien ventilado.

Reconstitución en cualquier disolución salina equilibrada (por ejemplo, HBSS)

Other Notes

Contenido
Liofilizada, no estéril

Definición de unidad: La colagenasa de Roche se valora en unidades Wunsch (1 μmol de producto formado por minuto a +25 °C con sustrato Wunsch)
A menudo, las actividades colagenasa se dan en unidades Mandl (1 μmol de leucina liberada del colágeno en 5 horas a +37 °C).
Por desgracia, no hay un factor de conversión uniforme entre las dos unidades de actividad, ya que la unidad Mandl depende en parte de la concentración de las proteasas contaminantes en la preparación de la colagenasa, una variable indefinible. Una preparación de colagenasa más pura daría de hecho una menor actividad específica en unidades Mandl que una preparación bruta. Las preparaciones de Clostridium dan normalmente factores de conversión de aproximadamente 1:1800 (por ejemplo, un lote concreto de colagenasa de Clostridium contenía aproximadamente 0,15 U Wünsch/mg y 250 U Mandl/mg).

Sólo para investigación en ciencias de la vida. No indicada para procedimientos diagnósticos.

Disclaimer

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Información de seguridad

• pictograms: GHS07,GHS08
• signalword: Danger
• hcodes: H315,H319,H334,H335
• pcodes: P261 - P264 - P280 - P284 - P304 + P340 + P312 - P342 + P311
• Hazard Classifications: Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3
• target_organs: Respiratory system
• Clase de almacenamiento: 11 - Combustible Solids
• wgk: WGK 1
• flash_point_f: does not flash
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