PCR Master Mix

PCR reakciócső

Bővebben

• Mi az a PCR vagy RT-PCR mesterkeverék?
• Master Mix alkalmazások
• Master Mix összetevők
  
• A mesterkeverékek típusai
• Az általános PCR mesterkeverék receptje
• Standard PCR mesterkeverékek
  
• Nagy hűségű PCR mesterkeverékek
• RT-PCR mesterkeverékek
• RT-PCR mesterkeverékek
/a>
• qPCR mesterkeverékek
• Receptált PCR mesterkeverék termékek

Mi az a PCR vagy RT-PCR mesterkeverék?

A PCR mesterkeverék, amelyet néha szuperkeveréknek vagy kész keveréknek is neveznek, a PCR-reagensek optimális koncentrációjú, tételes keveréke, amely elkészíthető és felosztható számos PCR-cső vagy 96 lyukú PCR-lemez között. A mesterkeverék általában DNS-polimerázt, dNTP-ket, MgCl₂ -t és puffert tartalmaz. A mesterkeverék használata csökkenti a pipettázást és a szennyeződés kockázatát, kényelmes, időt takarít meg, és megelőzi a keverés esetleges hibáit, így ideális a nagy áteresztőképességű alkalmazásokhoz. 

A mesterkeverék lehetővé teszi a kutatók számára, hogy kontrollokat állítsanak be, és a cél-DNS- vagy RNS-templátumok különböző koncentrációit teszteljék anélkül, hogy az enzimek, pufferek, kofaktorok (általában MgCl₂), víz és dNTP pontos mennyiségét külön-külön kellene hozzáadniuk minden egyes reakciócsőbe vagy lemezkútba. Ehelyett egyszer kell elkészíteni egy nagy master mixet, amely tartalmazza az összes vagy a legtöbb PCR-reagenseket. A megfelelő mennyiségű mesterkeveréket pipettázni lehet a csövekbe vagy a lemezlyukakba, és kombinálni a reakciók között változó komponensekkel, például a DNS- vagy RNS-templátokkal vagy primerekkel.

A nagyméretű PCR-reakciók 2000 vagy annál több egyedi 25 μl-50 μl-es reakciót tartalmazhatnak. Még egy 20 reakcióból álló tétel esetében is időt takaríthatnak meg a kutatók, csökkenthetik a pipettázási hibákat, és javíthatják a konzisztenciát a mesterkeverékkel. Ezek a keverékek megkerülik, hogy a reagensek teljesen kimaradjanak a reakcióból, és ennek eredményeként hamis negatív eredményt adjanak.

A PCR Master Mix Calculator segítségével megtervezheti a PCR-reakciók egyedi tételének master mix receptjét.

PCR master mix alkalmazások

A PCR master mixeket általában a következő alkalmazásokban használják:

• Nagy áteresztőképességű PCR
• Rutin PCR

A hot start DNS-polimerázt tartalmazó mesterkeverékek ideálisak a következő alkalmazásokhoz:

• Multiplex PCR
• A primer dimerek csökkentése
• Kényelmes, automatizálással kompatibilis, környezeti hőmérsékleten történő beállítás

Az előzetes vizsgálati fázisban lévő laboratóriumok variálhatják a DNS- vagy RNS-templátokat, miközben támaszkodhatnak a többi előkevert komponens kényelmére.

PCR Master Mix komponensek

• Enzim
• Puffer(ek)
• Kofaktor - A magnézium-klorid (MgCl₂), a leggyakoribb. Néha MgSO₄ -t is használnak bizonyos enzimeknél.
• dNTP
• Primerek
• Template DNS (ha minden minta egységes lesz)
  
• Nukleázmentes vagy PCR-minőségű víz

A mesterkeverékek típusai

Sok előre elkészített PCR mesterkeverék áll rendelkezésre, amelyek segítenek időt megtakarítani és elkerülni a mérési és arányosítási hibákat.

A legtöbb kereskedelmi forgalomban kapható PCR mesterkeveréket egy adott PCR-típushoz, például hot starthoz vagy csak bizonyos termociklálókkal való kompatibilitáshoz jelölték ki. Ez különösen igaz a valós idejű PCR-re (más néven kvantitatív PCR vagy qPCR), amely olyan termociklálóra támaszkodik, amely a reakció előrehaladását a mesterkeverékben lévő festék fluoreszcenciájának megfelelő alakulása alapján képes érzékelni.

A kereskedelmi mesterkeverékek használat előtt még mindig szükség van némi előkészítésre, akár csak a sablon DNS vagy RNS hozzáadásához. Ezen felül szükség lehet felolvasztásra, hűtésre, PCR minőségű vízzel való hígításra és pipettával vagy centrifugával történő keverésre. Ügyeljen arra, hogy a kísérleti igényeinek és a PCR-beállításoknak megfelelő mesterkeveréket válasszon.

A PCR-hez és a valós idejű PCR-hez számos, különböző eszközökhöz validált mesterkeveréket kínálunk. A praktikus PCR Selection Guide segíthet a megfelelő mesterkeverék vagy a saját keverék elkészítéséhez szükséges összetevők azonosításában. A legkelendőbb PCR mesterkeverékeink közül néhányat PCR stílus szerint is profiloztunk:

• Standard PCR
• High-Fidelity PCR
• High-Fidelity PCR<./li>
• RT PCR
• qPCR

Az általános PCR mesterkeverék receptje

A PCR mesterkeverék alapreceptje.

Volumen	Komponens		Végleges koncentráció
5 µL	10X PCR puffer	1X
1 µL
1 µL./td>	dNTP-k (10 mM)	200 µM
1 - 2 µL	Előre irányuló primer		Külső primer	50 - 100 pmol
1 - 2 µL	Reverse primer	50 - 100 pmol
0.5 - 1 µL	Taq DNS-polimeráz (5U/µL)	2.5 - 5 U
1 - 5 µL	Minta DNS	MintadNS br>	1 - 200 ng
1 µL	MgCl2 (50 mM)	1 mM
Változó	Víz	Adjunk a q.s. 50 µl-ig
50 µl	Teljes térfogat

Kereskedelmi mesterkeverék elkészítése

Megjegyezzük, hogy ez a tipikus recept keverékenként és az egyes felhasználási módok között változik. Kérjük, olvassa el a mellékelt termékirodalmat az adott mesterkeverék vagy kész keverék elkészítéséhez.

Volumen	komponens	végleges koncentráció
25 µl	2X Master Mix	1X
1 µL	Forward primer	50 pmol	50 pmol	1 µL
1 µL	Fordított primer	50 pmol
1-5 µL	Sablon DNS	1 - 200 ng
17 - 22 µL	Víz	Hozzáadjuk a q.s. 50 µl-ig
50 µl	Teljes térfogat

Standard PCR mesterkeverékek

ReadyMix™ Taq PCR reakciókeverék MgCl-velsub>2

AReadyMix™ Taq PCR Reaction Mix egy olyan kész oldat, amely a specifikus primerek és a templát kivételével mindent tartalmaz, ami a PCR-reakcióhoz szükséges. A keverék tartalmazza a kiváló minőségű Taq DNS-polimerázunkat, 99%-os tisztaságú dezoxinukleotidokat és puffert egy 2× optimalizált reakciókoncentrátumban.

Roche PCR Master

A Roche PCR Master tartalmazza a standard PCR elvégzéséhez szükséges összes reagenseket. Mindössze a templát DNS-t, a primereket és a szükséges mennyiségű vizet kell hozzáadni.

REDTaq^® ReadyMix™ PCR reakciómix

Ez a keverék egyesíti a REDTaq^® DNS-polimerázunk teljesítményét és előnyeit a ReadyMix™ PCR-reakciókeverék kényelmével. A REDTaq^® ReadyMix™ egy használatra kész keverék Taq DNS-polimerázból, 99%-os tisztaságú dezoxinukleotidokból, reakciópufferből és inert vörös festékből álló 2X koncentrátumban.

High-Fidelity PCR Master Mixes

Roche High-fidelity PCR Master

Roche High-fidelity PCR Master<./p>

Válassza a kényelmes High-fidelity PCR Master-t, egy kétszeresen koncentrált, azonnal felhasználható keveréket, amely az Expand High Fidelity PCR rendszert PCR-minőségű dNTP-kkel, MgCl₂-val és egy optimalizált reakciópufferrel kombinálja.

Millipore KOD Hot Start Master Mix

Ez egy használatra kész 2X keverék, amely KOD Hot Start DNS-polimerázt, két monoklonális antitestet, nagytisztaságú dezoxinukleotidokat és MgSO₄-t tartalmazó reakciópuffert tartalmaz. Ez a keverék a kényelmes, nagy hűségű PCR-hez van optimalizálva.

RT-PCR mesterkeverékek

Roche Transcriptor High Fidelity cDNA Synthesis Kit az RNS reverz transzkripcióját más reverz transzkriptázokhoz képest nagyobb hűséggel tervezték. A kit a Transcriptor High Fidelity Reverse Transcriptase-t tartalmazza, amely egy rekombináns reverz transzkriptáz és egy kétlépéses RT-PCR-hez optimalizált proofreading-közvetítő enzim keveréke.

SYBR^® Green Quantitative RT-qPCR Kit nagy érzékenységű módszert biztosít a génexpresszió mennyiségi elemzéséhez. A QRT-PCR ReadyMix™ kombinálja az M-MLV RT és a JumpStart Taq előnyeit egy kényelmes kész keverékben.

KiCqStart^® One-Step Probe RT-qPCR ReadyMix™ reagens egy használatra kész, nagy érzékenységű mesterkeverék RNS templátok reverz transzkripciós kvantitatív PCR-hez (RT-qPCR), hibridizációs szondás detektáló vegyszerek, mint például TaqMan^® 5'-hidrolizáló szondák segítségével valós idejű PCR-rendszereken (a készülékhez való megfelelő reagens kiválasztásához lásd a készülék kompatibilitási szakaszát).

MystiCq^® microRNA cDNS szintézis keverék tartalmazza az összes olyan komponenst, amely az érett microRNS-ek qPCR-hez szükséges cDNS-templátokká történő átalakításához szükséges. Ez a kit külön poliadenilációs és reverz transzkripciós lépéseket tartalmaz, ami szükség esetén lehetővé teszi a protokoll optimalizálását.

Real Time qPCR mesterkeverékek

Szondás qPCR

A FastStart TaqMan® Probe Master a Roche-tól egy használatra kész, 2× koncentrált mesterkeverék, amely tartalmazza az összes olyan reagenseket (kivéve a primereket, a szondát és a templátot), amelyek a kvantitatív, valós idejű DNS-detektálási próbák - beleértve a qPCR-t és a kétlépéses qRT-PCR-t - elvégzéséhez szükségesek a hidrolízisszondás detektálási formátumban.

Roche EagleTaq Universal Master Mix (ROX) egy használatra kész, 2× koncentrált PCR master mix, amely tartalmazza a kvantitatív, valós idejű PCR hidrolízis szondás reakciók elvégzéséhez szükséges összes reagens (kivéve a primereket, szondákat és a templátot). Speciális ROX referenciafestéket tartalmaz, ami alkalmassá teszi minden olyan valós idejű műszerhez, amelyen a kvantitatív elemzéshez ROX referenciafestékre van szükség.

SYBR^® Green PCR

SYBR^® green master mixek alkalmasak valós idejű PCR-hez. Aszimmetrikus cianin festéket alkalmaznak. Legnépszerűbb SYBR^® zöld keverékünk a Roche's FastStart SYBR^® Green. A FastStart SYBR^®  Green Master egy használatra kész reagenskeverék, amely leegyszerűsíti a qPCR és a kétlépéses qRT-PCR reakciók előkészítését a SYBR^®  Green I interkaláló festéket használva a DNS kimutatására és elemzésére.

KiCqStart^® qPCR ReadyMix™ Reagensek

KiCqStart qPCR ReadyMix™ Reagensek

KiCqStartsup>® qPCR ReadyMix™ master mixek koncentrált formában, felhasználásra készen állnak rendelkezésre. Tartalmaznak puffert, stabilizátorokat és hot-start Taq-ot. Használja őket gyors vagy hagyományos ciklikus protokollokban bármelyik termikus cikleren. Válasszon a SYBR^® zöld vagy szonda alapú keverékek közül.

A KiCqStart^® SYBR^® Green qPCR ReadyMix™ master mix kompatibilis a Bio-Rad, Cepheid, Eppendorf, Illumina, Corbett és Roche rendszerekkel. Az összetevők között szerepel egy 2× reakciópuffer, amely optimalizált koncentrációjú MgCl₂, dNTP-k (dATP, dCTP, dGTP, dTTP), KiCqStart^® Taq DNS-polimeráz, SYBR^® zöld festék és stabilizátorok.

Low ROX™ az ABI és Stratagene műszerekhez való Low ROX™ készülékkel működik.

LuminoCt™ qPCR reagensek

A rendkívül optimalizált ReadyMix™ kémián alapuló, LuminoCt™ qPCR reagensek felülmúlhatatlan vizsgálati sebességet biztosítanak a pontosság, precizitás és érzékenység feláldozása nélkül. És ami a legjobb, a LuminoCt™ reagensek zökkenőmentesen működnek együtt a legtöbb qPCR-műszerrel, így a reakciókörülmények optimalizálása a lehető legkevesebbre csökken. Gyakran a felhasználók egyszerűen kiválaszthatják a kitet, összeállíthatják az assay-t, és elkezdhetik. A lehető legjobb qPCR-adatok előállítása még soha nem volt ilyen gyors és egyszerű.

A LuminoCt™ SYBR^® Green qPCR ReadyMix™ reagens úgy lett megtervezve, hogy felülmúlhatatlan vizsgálati sebességet biztosítson anélkül, hogy a pontosság, a precizitás vagy az érzékenység feláldozódna. A ReadyMix™ kémia kiterjedt tervezése és validálása gyakorlatilag kiküszöbölte az optimalizálás szükségességét, amikor a LuminoCt™ reagens megfelelően tervezett primerekkel együtt kerül alkalmazásra. A JumpStart™ Taq antitest ReadyMix™ reagensbe való beépítése megszünteti a polimeráz aktivitását környezeti hőmérsékleten anélkül, hogy a kémiailag módosított hot-start Taq-hoz kapcsolódó teljesítményproblémákat okozna.

A LuminoCt™ qPCR ReadyMix™ kitet a szonda alapú qPCR-vizsgálatok elvégzésére tervezték az általánosan elérhető valós idejű műszerplatformokon. A ReadyMix™ reagenshez referenciafesték hozzáadása szükséges (a készletben található), ha olyan valós idejű műszereken használják, amelyek a qPCR-vizsgálatok normalizálásához ROX passzív referenciafestéket igényelnek.

Referált Master Mix termékek