Globális DNS-metiláció kvantitatív meghatározása

Savita Bagga

A genom metilációjának általános mértéke hasznos mérőszáma lehet a globális szabályozási változásoknak. E paraméter mérését általában az egyetlen bázisig történő teljes feltárást követően végzik, majd HPLC vagy tömegspektrofotometria segítségével elemzik.

Global DNA Modification Kit

A Global DNA Modification Kit (MDQ1), lehetővé teszi a kutatók számára a DNS-metiláció nyomon követését egy szendvics ELISA teszthez hasonló formátumban. Ez a formátum barátságosabb a biológiai kutatók számára, és a maga nemében az első a piacon.

Tulajdonságok és előnyök

• ELISA-alapú formátum
br>         - Az eljárás négy könnyen követhető lépésben fejeződik be<
       - Minden reagens a csomagban, beleértve a metilált DNS kontrollt is
       

• Gyorsan méri a DNS-metiláció változásait
         - A kimutatási határ 5 ng teljesen metilált DNS
           - A bemeneti DNS lehet akár 10-200 ng is
         
  
• Teljes, rugalmas és gyors
          - Az eljárás teljes 3.5 óra
         - A 96 lyukú formátum lehetővé teszi az egyes minták vizsgálatát vagy a nagy áteresztőképességű tanulmányok elvégzését
         
• br>
• DNS-mintaforrások kibővített köre
          - Használható sejtekből, szövetekből, plazmából és más testfolyadékokból származó DNS-sel

1. ábra. A MDQ1 használatának lépésenkénti protokollja.

2. ábra. Két különbözőképpen metilált DNS-tétel összehasonlítása MDQ1 segítségével. Két tétel Sss I-vel kezelt DNS metilációs állapotát LC-MS segítségével mértük. A különböző mennyiségű DNS-t a MDQ1 kit segítségével is elemezték. Amint azt a grafikon mutatja, a metilációs állapotok közötti különbség könnyen kimutatható, és a keletkező jel arányos az eljárás során felhasznált DNS mennyiségével.

3. ábra. Azacitadin hatása a CHO-sejtek globális metilációjára. Azacitadint, egy ismert demetiláló szert közvetlenül a táptalajhoz adtuk. A sejteket 48 óra elteltével szedtük le. A DNS-t a GenElute&trade segítségével izoláltuk, és megmértük a globális metilációt. A kezelt és nem kezelt CHO sejtekből származó 40 ng DNS-t elemeztük.