Referencia standardok a polifenol-katechinek analíziséhez

James S, Walbridge, Kathleen Kiefer

Reporter US Vol 25.4

techservice@sial.com

A katechinek napjaink egészségtudatos világában forró témává váltak. A jelenlegi kutatások szerint a katechinek az alábbiak révén segítik az egészséget:

• csökkentik az atteroszklerotikus plakkok kialakulását
• gátolják a daganatok növekedését a rákos sejtek terjedésében szerepet játszó enzimek gátlásával, a daganatot elősegítő anyagok kiirtásával és a kémiai rákkeltő anyagok blokkolásával
• gátolják a daganatok növekedését
/li>
• A magas vérnyomás csökkentése
• Véd az emésztőrendszeri és légúti fertőzésekkel szemben
• A koleszterinszint csökkentése
• A vércukorszint csökkentése
• A vesekövesség megelőzése
• A reumás ízületi gyulladás kialakulásának esélyének csökkentése
• Erősebb csontok előállítása
• A gyulladások csökkentése

A katechinek a polifenolos vegyületek egy csoportja, amely erős antioxidáns, valamint figyelemre méltó antibakteriális, vírusellenes és gyulladáscsökkentő tulajdonságokkal rendelkezik. Nagy koncentrációban a Camellia sinensis (tea) levelében, kisebb mennyiségben pedig a csokoládéban, a szőlőben, a málnában, az almában, a körtében és a borban találhatók. A fehér tea készítéséhez használt Camellia sinensis nagyon fiatal levelei és bimbói tartalmazzák a legmagasabb koncentrációt; őket követik a zöld tea készítéséhez használt, kissé érettebb levelek. Az Oolong és fekete teák készítéséhez használt idősebb levelek oxidáltabbak, és magasabb koncentrációban tartalmaznak más polifenolokat, köztük aaflavaninokat és aarubigineket.

A katechinek, más antioxidánsokhoz hasonlóan, segítenek megvédeni a sejteket az oxidatív stressztől. Az oxigén létfontosságú az élethez; azonban reaktív oxigénfajokba is beépül, beleértve a hidrogén-peroxidot, a hipoklórsavat és az olyan szabad gyököket, mint a hidroxilgyök és a szuperoxid-anion. A reaktív oxigénfajok károsítják a sejteket, és szerepet játszanak a szívbetegségekhez, rákhoz és számos más betegséghez vezető lassú láncreakcióban. Az antioxidánsok úgy működnek, hogy megakadályozzák a reaktív oxigénfajok kialakulását, vagy reagálnak velük, mielőtt azok károsíthatnák a sejteket.

A Camellia sinensis levelei legalább nyolc polifenol katekint tartalmaznak. A tealevelekben található hat uralkodó katechin a katechin, a gallokatechin-gallát (GCG), az epigallokatechin (EGC), az epikatekin (EC), az epikatekin-gallát (ECG) és az epigallokatechin-gallát (EGCG), melyek közül az EGCG a legnagyobb mennyiségben előforduló.

Analitikai kihívás

A katechinkoncentrációt meghatározó elemzők számára kihívást jelent a kereskedelmi forgalomban kapható katechin-referenciaoldatok hiánya. Az egyik lehetőség a referencia standardok házon belüli előállítása az egyes katechinvegyületekből. Ez általában nem költséghatékony megoldás a következők miatt:

• A nagy tisztaságú katechinvegyületeket gyakran nehéz beszerezni, és nagyon drágák.
• A katechinek, mind tisztán, mind oldatban megfelelő tárolást igényelnek.
• Hőre, fényre és levegőre érzékenyek.
• A standardok elkészítése időigényes folyamat

A megoldások

Az igény kielégítésére nyolc katechin analitikai referencia standard oldatot fejlesztettünk ki. Ezeket a Supelco márkájú standardokat úgy állítják elő, adagolják, csomagolják és tárolják, hogy minimalizálják a kémiai bomlást és maximális eltarthatóságot biztosítsanak. Minden standardhoz analitikai tanúsítvány tartozik, amely tartalmazza a tisztaság meghatározását. A katechinek a koncentráció, a komponensek és az oldószer kifejezetten testre szabott kombinációiban is elkészíthetők az egyedi kémiai standardok programunk segítségével. Ezenkívül egy egyszerű, robusztus LC-UV módszert fejlesztettünk ki az Ascentis RP-Amide oszlop használatával (1. ábra). A módszer az MS detektálással is kompatibilis. Reprodukálható analitikai eredményeket és kiváló csúcsformát biztosít.

1. ábra. Hat elsődleges zöldtea-katechin HPLC-analízise (565324-U)

Hivatkozások

1. Zhu X, Chen B, Ma M, Luo X, Zhang F, Yao S, Wan Z, Yang D, Hang H. 2004. Simultaneous analysis of theanine, chlorogenic acid, purine alkaloids and catechins in tea samples with the help of multi-dimension information of on-line high performance liquid chromatography/electrospray?mass spectrometry. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 34(3):695-704. https://doi.org/10.1016/s0731-7085(03)00605-8

2. Bell DS, Campbell W, Cramer HM. Molecular Interactions Contributing to Alternative Selectivity of Polar-Embedded HPLC Stationary Phases. Supelco Publication. T405014

3. Lun Su Y, Leung LK, Huang Y, Chen Z. 2003. Stability of tea theaflavins and catechins. Food Chemistry. 83(2):189-195. https://doi.org/10.1016/s0308-8146(03)00062-1

4. Friedman M, Jürgens HS. 2000. Effect of pH on the Stability of Plant Phenolic Compounds. J. Agric. Food Chem.. 48(6):2101-2110. https://doi.org/10.1021/jf990489j

5. American Chemical Society. [Internet]. Available from: http://pubs.acs.org/journals/jafcau/index

6. American Chemical Society. [Internet]. Available from: http://pubd.scs.org/journals/jacau/index.html

7. He L, Penzotti S, Bedu-Addo F. Cardinal Health Pharmaceutical Development. 14 Schoolhouse Road, Somerset, NJ 08873..