Sejttípusok és tenyésztési jellemzők
ECACC Laboratory Handbook 4th Edition
Immortalizált sejtvonalak
Folyamatos immortalizált sejtvonalak egyetlen sejttípusból állnak, amelyek sorozatosan szaporíthatók a kultúrában akár korlátozott számú sejtosztódásig (körülbelül harminc), akár egyébként korlátlan ideig. A véges élettartamú sejtvonalak általában diploidok, és fenntartják a differenciálódás bizonyos fokát. Az a tény, hogy az ilyen sejtvonalak körülbelül harminc osztódási ciklus után elöregednek, azt jelenti, hogy az ilyen vonalak hosszú távú fenntartásához elengedhetetlen a Mester- és Munkabankok rendszerének létrehozása.
A korlátlan ideig szaporítható, folyamatos immortalizált sejtvonalak általában azért rendelkeznek ezzel a képességgel, mert tumorsejtekké transzformálták őket. A tumorsejtvonalak gyakran tényleges klinikai tumorokból származnak, de az átalakulás vírusos onkogénekkel vagy kémiai kezelésekkel is előidézhető. A transzformált sejtvonalak előnye, hogy szinte korlátlanul rendelkezésre állnak, hátrányuk viszont, hogy nagyon keveset őriznek meg az eredeti in vivo tulajdonságaikból.
Primer sejtvonalak
A primer sejtvonalak közvetlenül kimetszett szövetekből és kultúrákból származnak, vagy explantátumkultúraként, vagy enzimes emésztéssel egyetlen sejtszuszpenzióvá történő disszociációt követően. Az ilyen kultúrák kezdetben heterogének, de később a fibroblasztok dominálnak. A primer kultúrák előállítása munkaigényes, és csak korlátozott ideig tarthatók fenn in vitro . A primer sejtek viszonylag korlátozott élettartamuk alatt általában megőrzik a sejtek számos differenciált jellemzőjét in vivo. Fontos megjegyzés: Az elsődleges tenyészetek definíció szerint nem passziváltak, amint passziválták őket, sejtvonallá válnak, és többé nem elsődlegesek.
Törzssejtvonalak
Újabban, a törzssejtvonalak korlátlan növekedési tulajdonságaik és plaszticitásuk miatt népszerű sejtmodellnek számítanak a kutatásban. Ezek a sejtek rendelkeznek azzal az egyedülálló képességgel, hogy a szervezeten belüli megfelelő jelzésekre reagálva önmegújításra vagy különböző sejttípusokká differenciálódnak. Ezek a tulajdonságok egyedülálló képességekkel ruházzák fel az őssejteket a szövetek javítására, pótlására és regenerálására.
Cellamorfológiai típusok
A növekedési mód tekintetében a sejtkultúrák kétféle formát öltenek: vagy szuszpenzióban (egyes sejtek vagy kis szabadon lebegő csomók formájában), vagy a szövettenyésztő lombikhoz rögzített monorétegként növekednek. A sejtvonal által felvett forma tükrözi azt a szövetet, amelyből származik. Például a vérből származó sejtvonalak (leukémia, limfóma) általában szuszpenzióban nőnek, míg a szilárd szövetekből (tüdő, vese) származó sejtek általában monoszlopként nőnek. A csatolt sejtvonalakat besorolhatjuk 1) endothelialis, mint például a BAE-1, 2) epithelialis, mint például a HeLa, 3) neuronális, mint például az SH-SY5Y, vagy 4) fibroblaszt, mint például az MRC-5.
1. ábra. Példák a csatolt sejttípusokra. A sejteket az általános morfológia alapján 4 különböző sejttípus-kategóriába sorolják: 1) epithelialis 2) endothelialis 3) neuronális vagy 4) fibroblaszt.
A European Collection of Authenticated Cell Cultures (ECACC) a világ egyik legnagyobb biológiai sejtbankja, amely hitelesített sejtvonalak széles skáláját kínálja. Mind a 3000+ sejtvonal megrendelhető rajtunk keresztül. Böngésszen az ECACC katalógusában.
.A sejtnövekedés fázisai
Nagyon fontos ismerni és rögzíteni a használt sejtvonal növekedési jellemzőit, mielőtt bármilyen kísérletet elkezdenénk, beleértve a sejtéletképesség és proliferáció arányok. A sejtek növekedésének megváltozása jelentős problémát jelezhet a sejtvonalon belül, és ha nem észlelik, káros hatással lehet a kísérleti eredményekre.
A tenyésztett sejtek tipikus növekedési görbéje a proliferáció szigmoid mintázatát mutatja. A normális sejtekhez tartozó növekedési fázisok a következők:
- Lag fázis - ebben a szakaszban a sejtek nem osztódnak. Ebben az időszakban a sejtek alkalmazkodnak a tenyésztési körülményekhez, és ennek a fázisnak a hossza a sejtvonal növekedési fázisától függ a szubkultúra idején és a beültetési sűrűségtől.
- Logaritmikus (Log) növekedési fázis - a sejtek aktívan szaporodnak, és a sejtsűrűség exponenciális növekedése következik be. A sejtpopuláció ebben a fázisban tekinthető a legéletképesebbnek, ezért a sejtfunkciót ebben a fázisban ajánlott értékelni. Az egyes sejtvonalak eltérő sejtproliferációs kinetikát mutatnak a log-fázisban, ezért ez az optimális fázis a populáció megduplázódási idejének meghatározásához. A sejteket általában a késői log-fázisban passziválják. A sejtek túl késői passziválása túlszaporodáshoz, apoptózishoz és szeneszcenciához vezethet.
- Plató (vagy stacionárius) fázis - a sejtproliferáció lelassul a sejtpopuláció konfluenssé válása miatt. Ebben a szakaszban az aktív sejtciklusban lévő sejtek száma 0-10%-ra csökken, és a sejtek a legérzékenyebbek a sérülésekre.
- >Hanyatlási fázis - ebben a fázisban a sejthalál dominál, és csökken az életképes sejtek száma. A sejthalál nem a tápanyagok csökkenése, hanem a sejtciklus természetes lefolyása miatt következik be.
In Vitro A sejtkultúra életkora
A sejtkultúra életkorának meghatározására két kifejezést használnak: (i) a passzázsszám - azt jelzi, hogy a sejtvonalat hányszor szubkultúrázták, és (ii) a populáció megduplázódásának (pd) száma - azt jelzi, hogy a sejtvonal hány sejtgeneráción ment keresztül i.azaz azt, hogy a sejtpopuláció hányszor duplázódott meg. Egy sejtkultúra in vitro életkorát különösen hasznos tudni a véges élettartamú vagy a folyamatos tenyésztés során idővel változó, instabil jellemzőkkel rendelkező sejtvonalak esetében.
Az olvasás folytatásához jelentkezzen be vagy hozzon létre egy felhasználói fiókot.
Még nem rendelkezik fiókkal?