Jegyzőkönyvek az X-tremeGENE™ transzfekciós reagensekkel történő transzfekcióhoz gyakori sejtvonalak transzfektálásához

Az X-tremeGENE™ transzfekciós reagensek megbízható transzfekciót biztosítanak a különböző nukleinsavak és CRISPR/Cas9 komponensek számára, ami kritikus lépés az Ön molekuláris és sejtes kutatásaihoz. Fedezze fel a leggyakoribb sejtvonalak alábbi listáját az X-tremeGENE™ portfólió használatára vonatkozó részletes utasításokért. Maximális rugalmasságot keres? Az új X-tremeGENE™ 360 transzfekciós reagens egy univerzális polimer, amely kiváló teljesítményt nyújt mind a gyakran használt, mind a nehezen transzfektálható sejtvonalak esetében.

• CHO-K1 sejtek transzfekciója
• CHO-K1 sejtek transzfekciója
• COS-7 sejtek transzfekciója
• HeLa sejtek
• NIH-3T3 sejtek
• HEK-293 sejtek
• PC-3 sejtek
• HCT 116 sejtek
• HCT 116 sejtek
/a>
• A549-Cells
• MCF-7 sejtek
• HuH-7 sejtek
• HuH-7 sejtek
/a>
• U-2 OS sejtek
a href="#HepG2-Cells">HepG2 sejtek
• Neuro-2a sejtek
• Primary MEF Cells
• Primary MEF Cells
• Humán primer fibroblasztok a bőr előtti bőrből
• Murine Mesenchymal őssejtek EK8
• Human Mesenchymal őssejtek
• HEK-293T sejtek lentivirális termeléshez
• SF9 rovarsejtek

CHO-K1 sejtek transzfekciója

A CHO-K1 sejteket 1 -es sűrűségben kell leültetni.5 X 10 X 10⁴ sejtek/lyuk. A sejteket üregenként 100 μL teljes tápfolyadékkal ültesse ki egy 96 lyukú lemezbe 18 - 24 órával a transzfekció előtt (65 - 75%-os konfluencia). Inkubálja a sejttenyészeteket egy éjszakán át.

Az X-tremeGENE™ 9 DNS transzfekciós reagens, a DNS és a hígítószer (Opti-MEM^® I redukált szérumos közeg vagy szérummentes közeg) melegedjen +15 °C és +25 °C közé, és óvatosan vortexelje.

• Tegyen 200 μL hígítót egy steril csőbe.
• Adjunk 6 μL X-tremeGENE™ 9 DNS-transzfekciós reagens -t a hígítószerhez. Óvatosan pipettázzon a keveréshez.
• Adjon hozzá 2 μg plazmid DNS-t. (3:1 arány a reagens és a DNS aránya). Óvatosan pipettázzon a keveréshez.
• Inkubáljon 15-30 percig +15 °C és +25 °C között.
• Adjon 5 μL transzfekciós komplexet a sejtekhez cseppenként.
• Óvatosan rázza vagy forgassa a kutakat vagy lombikokat, hogy biztosítsa az egyenletes eloszlást a teljes lemezen.
• Inkubálja a sejteket 24-72 órán át a fehérjeexpresszió mérése előtt.

Kísérleti eredmény: A CHO-K1 sejteket sikeresen transzfektáltuk pcDNA3.1-GFP plazmiddal az X-tremeGENE™ 9 DNS transzfekciós reagens használatával.

COS-7 sejtek transzfekciója

A COS-7 sejtek transzfekciója 8 sűrűségben.0 - 9,0 X 10³ sejtek/lyuk. A sejteket 96 lyukú lemezbe 18 - 24 órával a transzfekció előtt  (75 - 85%-os konfluencia) 100 μL teljes táptalajba ültessük. Inkubálja a sejtkultúrákat egy éjszakán át.

Az X-tremeGENE™ 9 DNS transzfekciós reagens, a DNS és a hígítószer (Opti-MEMR^® I redukált szérum médium vagy szérummentes médium) melegedjen +15 °C és +25 °C közé, és óvatosan vortexelje.

• Tegyünk 200 μL hígítót egy steril csőbe.
• Adjunk 6 μL X-tremeGENE™ 9 DNS-transzfekciós reagens -t a hígítószerhez. Óvatosan pipettázzon a keveréshez.
• Adjon hozzá 2 μg plazmid DNS-t. (3:1 arány a reagens és a DNS aránya). Óvatosan pipettázzon a keveréshez.
• Inkubáljon 15-30 percig +15 °C és +25 °C között.
• Adjon 5 μL transzfekciós komplexet a sejtekhez cseppenként.
• Óvatosan rázza vagy forgassa a kutakat vagy lombikokat, hogy biztosítsa az egyenletes eloszlást a teljes lemezen.
• Inkubálja a sejteket 24-72 órán át a fehérjeexpresszió mérése előtt.

Kísérleti eredmény: A COS-7 sejteket sikeresen transzfektáltuk pcDNA3.1-GFP plazmiddal az X-tremeGENE™ 9 DNS transzfekciós reagens használatával.

HeLa sejtek transzfekciója

HeLa sejtek transzfekciója 1 sűrűségben.5 X 10⁴ sejtek/lyuk. Tegyük a sejteket 100 μL teljes táptalajba lyukanként egy 96 lyukú lemezbe 18 - 24 órával a transzfekció előtt (70 - 90%-os konfluencia). Inkubálja a sejtkultúrákat egy éjszakán át.

Az X-tremeGENE™ 9 transzfekciós reagens, a DNS és a hígítószer (Opti-MEM^® I redukált szérumos közeg vagy szérummentes közeg) melegedjen +15 °C és +25 °C közé, és óvatosan vortexelje.

• Tegyünk 200 μL hígítót egy steril csőbe.
• Adjunk 6 μL X-tremeGENE™ 9 DNS-transzfekciós reagens -t a hígítószerhez. Óvatosan pipettázzon a keveréshez.
• Adjon hozzá 2 μg plazmid DNS-t.  (3:1 arány a reagens és a DNS aránya). Óvatosan pipettázzon a keveréshez.
• Inkubáljon 15-30 percig +15 °C és +25 °C között.
• Adjon 5 μL transzfekciós komplexet a sejtekhez cseppenként.
• Óvatosan rázza vagy forgassa a kutakat vagy lombikokat, hogy biztosítsa az egyenletes eloszlást a teljes lemezen.
• Inkubálja a sejteket 24-72 órán át a fehérjeexpresszió mérése előtt.

Kísérleti eredmény: A HeLa sejteket sikeresen transzfektáltuk pcDNA3.1-GFP plazmiddal az X-tremeGENE™ 9 DNS transzfekciós reagens használatával.

NIH-3T3 sejtek transzfekciója

NIH-3T3 sejtek transzfekciója 1 sűrűségben.5 X 10⁴ sejtek/lyuk. A sejteket egy 96 lyukú lemezbe üregenként 100 μL teljes tápfolyadékkal ültessük be 18 - 24 órával a transzfekció előtt  (70 - 80%-os konfluencia). Inkubálja a sejtkultúrákat egy éjszakán át.

Hagyja, hogy az X-tremeGENE™ 9 DNS transzfekciós reagens, a DNS és a hígítószer (Opti-MEM^® I redukált szérumos közeg vagy szérummentes közeg) +15 °C és +25 °C közé melegedjen, és óvatosan vortexelje.

• Tegyünk 200 μL hígítót egy steril csőbe.
• Adjunk 6 μL X-tremeGENE™ 9 DNS-transzfekciós reagens -t a hígítószerhez. Óvatosan pipettázzon a keveréshez.
• Adjon hozzá 2 μg plazmid DNS-t. (3:1 arány a reagens és a DNS aránya). Óvatosan pipettázzon a keveréshez.
• Inkubáljon 15-30 percig +15 °C és +25 °C között.
• Adjon 5 μL transzfekciós komplexet a sejtekhez cseppenként.
• Óvatosan rázza vagy forgassa a kutakat vagy lombikokat, hogy biztosítsa az egyenletes eloszlást a teljes lemezen.
• Inkubálja a sejteket 24 - 72 órán át a fehérjeexpresszió mérése előtt.

Kísérleti eredmény: Az NIH-3T3 sejteket sikeresen transzfektáltuk pcDNA3.1-GFP plazmiddal az X-tremeGENE™ 9 DNS transzfekciós reagens használatával.

HEK-293 sejtek transzfekciója

HEK-293 sejtek transzfekciója 3 sűrűségben.0 - 3,5 X 10⁴ sejtek/lyuk. A sejteket 96 lyukú lemezbe üregenként 100 μL teljes táptalajban ültessük le 18 - 24 órával a transzfekció előtt (50 - 70%-os konfluencia). Inkubálja a sejtkultúrákat egy éjszakán át.

Az X-tremeGENE™ HP DNS transzfekciós reagens, a DNS és a hígítószer (Opti-MEM^® I redukált szérumos közeg vagy szérummentes közeg) melegedjen +15 °C és +25 °C közé, és óvatosan vortexelje.

• Tegyük 200 μL hígítót egy steril csőbe.
• Adjunk 2 μg plazmid DNS-t. Óvatosan pipettázzon a keveréshez.
• Adjon 6 μLX-tremeGENE™ HP DNS transzfekciós reagens a hígított DNS-hez. (3:1 arány a reagens és a DNS között). Óvatosan pipettázzon a keveréshez.
• Inkubáljon 15-30 percig +15 °C és +25 °C között.
• Adjon 10 μL transzfekciós komplexet a sejtekhez cseppenként.
• Óvatosan rázza vagy forgassa a kutakat vagy lombikokat, hogy biztosítsa az egyenletes eloszlást a teljes lemezen.
• Inkubálja a sejteket 24 - 72 órán át a fehérjeexpresszió mérése előtt.

Kísérleti eredmény: A HEK-293 sejteket sikeresen transzfektáltuk pcDNA3.1-GFP plazmiddal az X-tremeGENE™ HP DNS transzfekciós reagens segítségével.

PC-3 sejtek transzfekciója

PC-3 sejtek transzfekciója 1 sűrűségben.0 - 1,2 X 10⁴ sejtek/lyuk. A sejteket 96 lyukú lemezbe üregenként 100 μl teljes tápfolyadékba ültessük 18 - 24 órával a transzfekció előtt  (75 - 85%-os konfluencia). Inkubálja a sejtkultúrákat egy éjszakán át.

Az X-tremeGENE™ HP DNS transzfekciós reagens, a DNS és a hígítószer (Opti-MEM^® I redukált szérumos közeg vagy szérummentes közeg) melegedjen +15 °C és +25 °C közé, és óvatosan vortexelje.

• Tegyük 200 μL hígítót egy steril csőbe.
• Adjunk 2 μg plazmid DNS-t. Óvatosan pipettázzon a keveréshez.

Adjon 2 μL X-tremeGENE™ HP DNS-transzfekciós reagens a hígított DNS-hez. (1:1 arány a reagens és a DNS között). Óvatosan pipettázzon a keveréshez.

Inkubáljon 15-30 percig +15 °C és +25 °C között.

• Adjon 10 μL transzfekciós komplexet a sejtekhez cseppenként.
• Óvatosan rázza vagy forgassa a kutakat vagy lombikokat, hogy biztosítsa az egyenletes eloszlást a teljes lemezen.
• Inkubálja a sejteket 24-72 órán át a fehérjeexpresszió mérése előtt.

Kísérleti eredmény: A PC-3 sejteket sikeresen transzfektáltuk pcDNA3.1-GFP plazmiddal az X-tremeGENE™ HP DNS transzfekciós reagens segítségével.

HCT 116 sejtek transzfekciója

HCT 116 sejtek transzfekciója 3 sűrűségben.0 - 4,0 X 10⁵ sejtek/lyuk. A sejteket 18 - 24 órával a transzfekció előtt  (80%-os konfluencia) 1 mL teljes táptalajban üregenként egy 12 lyukú lemezbe ültessük. Inkubálja a sejtkultúrákat egy éjszakán át.

Az X-tremeGENE™ HP DNS transzfekciós reagens, a DNS és a hígítószer (Opti-MEM^® I redukált szérumos közeg vagy szérummentes közeg) melegedjen +15 °C és +25 °C közé, és óvatosan vortexelje.

• Tegyünk 100 μL hígítót egy steril csőbe.
• Adjunk 1 μg plazmid DNS-t. Óvatosan pipettázzon a keveréshez.
• Adjon 2 μL X-tremeGENE™ HP DNS transzfekciós reagens -t a hígított DNS-hez. (2:1 arány a reagens és a DNS aránya). Óvatosan pipettázzon a keveréshez.
• Inkubáljon 15-30 percig +15 °C és +25 °C között.
• Adja a transzfekciós komplexet a sejtekhez cseppenként.
• Óvatosan rázza vagy forgassa a lyukakat vagy lombikokat, hogy biztosítsa az egyenletes eloszlást az egész lemezen.
• Inkubálja a sejteket 24 - 72 órán át a fehérjeexpresszió mérése előtt.

Az A549 sejtek transzfekciója

Az A549 sejteket 2 sűrűségű lemezbe helyezzük.8 X 10⁴ sejtek/lyuk. A sejteket lyukanként 150 μL teljes tápfolyadékkal ültessük be egy 96 lyukú lemezbe 18-24 órával a transzfekció előtt  (70%-os konfluencia). Inkubálja a sejtkultúrákat egy éjszakán át.

Az X-tremeGENE™ HP DNS transzfekciós reagens, a DNS és a hígítószer (Opti-MEM^® I redukált szérumos közeg vagy szérummentes közeg) melegedjen +15 °C és +25 °C közé, és óvatosan vortexelje.

Tegyük 500 μL hígítót egy steril csőbe.
Adjunk hozzá 5 μg plazmid DNS-t. Óvatosan pipettázzon a keveréshez.

• Adjon 10 μL X-tremeGENE™ HP DNS transzfekciós reagens -t a hígított DNS-hez. (2:1 arány a reagens és a DNS között). Óvatosan pipettázzon a keveréshez.
• Inkubáljon 15-30 percig +15 °C és +25 °C között.
• Adjon 15 μL transzfekciós komplexet a sejtekhez cseppenként.
• Óvatosan rázza vagy forgassa a lyukakat vagy lombikokat, hogy biztosítsa az egyenletes eloszlást a teljes lemezen.
• Inkubálja a sejteket 24-72 órán át a fehérjeexpresszió mérése előtt.

MCF-7 sejtek transzfekciója

Az MCF-7 sejteket 1,2-1,2 - 1 sűrűségű lemezre helyezzük.8 X 10⁴ sejtek/lyuk. A sejteket lyukanként 100 μL teljes táptalajban ültessük el egy 96 lyukú lemezbe 18 - 24 órával a transzfekció előtt (70 - 90%-os konfluencia). Inkubálja a sejtkultúrákat egy éjszakán át.

Az X-tremeGENE™ 9 DNS transzfekciós reagens, a DNS és a hígítószer (Opti-MEM^® I redukált szérumos közeg vagy szérummentes közeg) melegedjen +15 °C -25 °C-ra, és óvatosan vortexelje.

• Tegyen 200 μL hígítót egy steril csőbe.
• Adjunk 6 μL X-tremeGENE™ 9 DNS-transzfekciós reagens -t a hígítószerhez. Óvatosan pipettázzon a keveréshez.
• Adjon hozzá 2 μg plazmid DNS. (3:1 arány a reagens és a DNS aránya). Óvatosan pipettázzon a keveréshez.
• Inkubáljon 15-30 percig +15 °C és +25 °C között.
• Adjon 10 μL transzfekciós komplexet a sejtekhez cseppenként.
• Óvatosan rázza vagy forgassa a kutakat vagy lombikokat, hogy biztosítsa az egyenletes eloszlást a teljes lemezen.
• Inkubálja a sejteket 24-72 órán át a fehérjeexpresszió mérése előtt.

Kísérleti eredmény: Az MCF-7 sejteket sikeresen transzfektáltuk pcDNA3.1-GFP plazmiddal az X-tremeGENE™ 9 DNS transzfekciós reagens használatával.

HuH-7 sejtek transzfekciója

HuH-7 sejtek transzfekciója 1 sűrűségben.0 X 10 X 10⁵ sejtek/lyuk. A sejteket 6 lyukú lemezben 18-24 órával a transzfekció előtt üregenként 2,5 ml teljes táptalajban ültessük el. Inkubálja a sejtkultúrákat egy éjszakán át.

Az X-tremeGENE™ HP DNS transzfekciós reagens, a DNS és a hígítószer (Opti-MEM^® I redukált szérum médium vagy szérummentes médium) melegedjen +15 °C és +25 °C közé, és óvatosan vortexelje.

• Tegyen 100 μL hígítót egy steril csőbe.
• Adjunk hozzá 1,5 μg plazmid DNS-t. Óvatosan pipettázzunk, hogy összekeverjük.
• Adjon 1,5 μL X-tremeGENE™ HP DNS transzfekciós reagens -t a hígított DNS-hez. (1:1 arány a reagens és a DNS között). Óvatosan pipettázzon a keveréshez.
• Inkubáljon 15-30 percig +15 °C és +25 °C között.
• Egy órával a komplexek sejtekhez való hozzáadása előtt frissítse fel a táptalajt 1,5 ml Opti-MEM I redukált szérumos táptalajjal.
• Adjunk 100 μL transzfekciós komplexet a sejtekhez cseppenként.
• Óvatosan rázzuk vagy forgassuk a lyukakat vagy lombikokat, hogy biztosítsuk az egyenletes eloszlást a teljes lemezen.
• Másnap frissítsük fel a táptalajt teljes növekedési táptalajjal.
• Inkubáljuk a sejteket 24-72 órán át a fehérjeexpresszió mérése előtt.

U-2 OS sejtek transzfekciója

Az U-2 OS sejteket 2 sűrűségű lemezre helyezzük.5 - 3,0 X 10⁴ sejtek/lyuk. A sejteket lyukanként 100 μL teljes tápfolyadékkal ültessük be egy 96 lyukú lemezbe 18 - 24 órával a transzfekció előtt (70 - 90%-os konfluencia). Inkubálja a sejtkultúrákat egy éjszakán át.

Az X-tremeGENE™ HP DNS transzfekciós reagens, a DNS és a hígítószer (Opti-MEM^® I redukált szérumos közeg vagy szérummentes közeg) melegedjen +15 °C és +25 °C közé, és óvatosan vortexelje.

• Tegyük 200 μL hígítót egy steril csőbe.
• Adjunk hozzá 2 μg plazmid DNS-t. Óvatosan pipettázzon a keveréshez.
• Adjon 4 μL X-tremeGENE™ HP DNS transzfekciós reagens -t a hígított DNS-hez. (2:1 arány a reagens és a DNS aránya). Óvatosan pipettázzon a keveréshez.
• Inkubáljon 15-30 percig +15 °C és +25 °C között.
• Adjon 10 μL transzfekciós komplexet a sejtekhez cseppenként.
• Óvatosan rázza vagy forgassa a kutakat vagy lombikokat, hogy biztosítsa az egyenletes eloszlást a teljes lemezen.
• Inkubálja a sejteket 24-72 órán át a fehérjeexpresszió mérése előtt.

Kísérleti eredmény: Az U-2 OS sejteket sikeresen transzfektáltuk pcDNA3.1-GFP plazmiddal az X-tremeGENE™ HP DNS transzfekciós reagens használatával.

HepG2 sejtek transzfekciója

HepG2 sejtek transzfekciója 2 sűrűségben.0 - 2,5 X 10⁴ sejtek/lyuk. A sejteket 96 lyukú lemezen lyukanként 100 μL teljes táptalajban ültessük el 18 - 24 órával a transzfekció előtt  (60 - 70%-os konfluencia). Inkubálja a sejtkultúrákat egy éjszakán át.

Az X-tremeGENE™ 9 DNS transzfekciós reagens, a DNS és a hígítószer (Opti-MEM^® I redukált szérumos közeg vagy szérummentes közeg) melegedjen +15 °C és +25 °C közé, és óvatosan vortexelje.

• Tegyen 500 μL hígítót egy steril csőbe.
• Adjunk 30 μL X-tremeGENE™ 9 DNS-transzfekciós reagens -t a hígítószerhez. Óvatosan pipettázzon a keveréshez.
• Adjon hozzá 10 μg plazmid DNS-t.  (3:1 arány a reagens és a DNS aránya). Óvatosan pipettázzon a keveréshez.
• Inkubáljon 15-30 percig +15 °C és +25 °C között.
• Adjon 5 μL transzfekciós komplexet a sejtekhez cseppenként.
• Óvatosan rázza vagy forgassa a kutakat vagy lombikokat, hogy biztosítsa az egyenletes eloszlást a teljes lemezen.
• Inkubálja a sejteket 24-72 órán át a fehérjeexpresszió mérése előtt.

Kísérleti eredmény: A HepG2 sejteket sikeresen transzfektáltuk pcDNA3.1-GFP plazmiddal az X-tremeGENE™ 9 DNS transzfekciós reagens használatával.

Neuro-2a sejtek transzfekciója

Egy ügyfél által megadott protokoll.
A Neuro-2a sejteket 1,0 X 10⁵ sűrűségű sejtek/lyuk lappal ültessük be. Tegyük a sejteket egy 24 lyukú lemezbe, lyukanként 500 μL teljes tápfolyadékba, 24 órával a transzfekció előtt (30-40%-os konfluencia). Inkubálja a sejtkultúrákat egy éjszakán át.

Az X-tremeGENE™ 9 DNS transzfekciós reagens, a DNS és a hígítószer (Opti-MEM^® I redukált szérumos közeg vagy szérummentes közeg) melegedjen +15 °C és +25 °C közé, és óvatosan vortexelje.

• Tegyünk  100 μL hígítót egy steril csőbe.
• Adjunk 8 μL X-tremeGENE™ 9 DNS-transzfekciós reagens -t a hígítószerhez. Óvatosan pipettázzon a keveréshez.
• Adjon hozzá 2 μg plazmid DNS-t. (4:1 arány a reagens és a DNS aránya). Óvatosan pipettázzon a keveréshez.
• Inkubáljon 15-30 percig +15 °C és +25 °C között.
• Adjon 100 μL transzfekciós komplexet a sejtekhez cseppenként.
• Óvatosan rázza vagy forgassa a mélyedéseket vagy lombikokat, hogy biztosítsa az egyenletes eloszlást az egész lemezen.
• Inkubálja a sejteket 24-72 órán át, mielőtt megmérné a fehérjeexpressziót.

Megjegyzés: Az "Ügyfelek által biztosított protokollok" című részben szereplő adatokért és kísérleti feltételekért kizárólag az azokat benyújtó ügyfelek felelnek. A Roche nem vett részt sem a kísérleti feltételek kialakításában, sem a speciális vizsgálatok elvégzésének kritériumainak definiálásában. A Roche ezért nem vállal felelősséget a szerzők vagy más, hasonló kísérleti megközelítést alkalmazó felhasználók által leírt biológiai célparaméter(ek)re kapott eredmények teljesítményéért vagy értelmezéséért.

Kísérleti eredmény: A Neuro-2a sejteket sikeresen transzfektáltuk CMV6-GFP plazmiddal az X-tremeGENE™ 9 DNS transzfekciós reagens használatával.

Primer MEF-sejtek transzfekciója

Primer MEF-sejtek transzfekciója 0 sűrűséggel.5 - 1,0 X 10⁵ sejtek/lyuk. A sejteket lyukanként 1 mL teljes táptalajban ültessük el egy 12 lyukú lemezen 18 - 24 órával a transzfekció előtt (60%-os konfluencia). Inkubálja a sejtkultúrákat egy éjszakán át.

Az X-tremeGENE™ HP DNS transzfekciós reagens, a DNS és a hígítószer (Opti-MEM^® I redukált szérumos közeg vagy szérummentes közeg) melegedjen +15 °C és +25 °C közé, és óvatosan vortexelje.

• Tegyünk 100 μL hígítót egy steril csőbe.
• Adjunk 1 μg plazmid DNS-t. Óvatosan pipettázzon a keveréshez.
• Adjon 4 μL X-tremeGENE™ HP DNS transzfekciós reagens -t a hígított DNS-hez. (4:1 arány a reagens és a DNS aránya). Óvatosan pipettázzon a keveréshez.
• Inkubáljon 15-30 percig +15 °C és +25 °C között.
• Adja a transzfekciós komplexet a sejtekhez cseppenként.
• Óvatosan rázza vagy forgassa a lyukakat vagy lombikokat, hogy biztosítsa az egyenletes eloszlást az egész lemezen.
• Inkubálja a sejteket 24 - 72 órán át a fehérjeexpresszió mérése előtt.

Humán primer fibroblasztok transzfekciója a pre-Skinből

Humán primer fibroblaszt sejtek transzfekciója a  sűrűség 1.0 X 10⁵ sejtek/lyuk. A sejteket 6 lyukú lemezen lyukanként 2 mL teljes táptalajban ültessük el 18 - 24 órával a transzfekció előtt (40 - 50%-os konfl uencia). Inkubálja a sejtkultúrákat egy éjszakán át.

Az X-tremeGENE™ HP DNS transzfekciós reagens, a DNS és a hígítószer (Opti-MEM^® I redukált szérum médium vagy szérummentes médium) melegedjen +15 °C és +25 °C közé, és óvatosan vortexelje.

• Tegyünk 200 μL hígítót egy steril csőbe.
• Adjunk 2 μg plazmid DNS-t. Óvatosan pipettázzon a keveréshez.
• Adjon 6 μL X-tremeGENE™ HP DNS transzfekciós reagens -t a hígított DNS-hez. (3:1 arány a reagens és a DNS aránya). Óvatosan pipettázzon a keveréshez.
• Inkubáljon 15-30 percig +15 °C és +25 °C között.
• Adjon 200 μL transzfekciós komplexet a sejtekhez cseppenként.
• Óvatosan rázza vagy forgassa a kutakat vagy lombikokat, hogy biztosítsa az egyenletes eloszlást a teljes lemezen.
• Inkubálja a sejteket 24-72 órán át a fehérjeexpresszió mérése előtt.

Kísérleti eredmény: A humán primer fibroblasztokat sikeresen transzfektáltuk GFP-t kódoló plazmiddal az X-tremeGENE™ HP DNS transzfekciós reagens segítségével.

Murine Mesenchymal Stem Cells EK8

Az EK8 sejteket 3 sűrűségben ültettük el.0 X 10⁴ sejtek/lyuk. Tegyük a sejteket (3 X 10⁵ sejtek/ml) egy 96 lyukú lemezbe 100 μL teljes táptalajban üregenként 24 órával a transzfekció előtt (50%-os konfluencia). Inkubálja a sejtkultúrákat egy éjszakán át.

Az X-tremeGENE™ HP DNS transzfekciós reagens, a DNS és a hígítószer (Opti-MEM^® I redukált szérumos közeg vagy szérummentes közeg) melegedjen +15 °C és +25 °C közé, és óvatosan vortexelje.

• Tegyük 392 μL hígítót egy steril csőbe.
• Adjunk 8 μg plazmid DNS-t. Óvatosan pipettázzon a keveréshez.
• Adjon 8 μL X-tremeGENE™ HP DNS transzfekciós reagens a hígított DNS-hez. (1:1 arány a reagens és a DNS között). Óvatosan pipettázzon a keveréshez.
• Inkubáljon 15-30 percig +15 °C és +25 °C között.
• Adjon 10 μL transzfekciós komplexet a sejtekhez cseppenként.
• Óvatosan rázza vagy forgassa a lyukakat vagy lombikokat, hogy biztosítsa az egyenletes eloszlást a teljes lemezen.
• Inkubálja a sejteket 24-72 órán át a fehérjeexpresszió mérése előtt.

Humán mesenchymális őssejtek transzfekciója

A hMSC-ket 8-as sűrűségben ültessük be a lemezbe.0 X 10 X 10⁴ sejtek/lyuk. A sejteket 6 lyukú lemezben 2 mL teljes táptalajban üregenként ültessük el 18 - 24 órával a transzfekció előtt (50%-os konfluencia). Inkubálja a sejtkultúrákat egy éjszakán át.

Az X-tremeGENE™ HP DNS transzfekciós reagens, a DNS és a hígítószer (Opti-MEM^® I redukált szérumos közeg vagy szérummentes közeg) melegedjen +15 °C és +25 °C közé, és óvatosan vortexelje.

• Tegyük 200 μL hígítót egy steril csőbe.
• Adjunk 2 μg plazmid DNS-t. Óvatosan pipettázzon a keveréshez.
• Adjon 6 μL X-tremeGENE™ HP DNS transzfekciós reagens -t a hígított DNS-hez. (3:1 arány a reagens és a DNS között). Óvatosan pipettázzon a keveréshez.
• Inkubáljon 15-30 percig +15 °C és +25 °C között.
• Adjon 200 μL transzfekciós komplexet a sejtekhez cseppenként.
• Óvatosan rázza vagy forgassa a mélyedéseket vagy lombikokat, hogy biztosítsa az egyenletes eloszlást az egész lemezen.
• Inkubáljuk a sejteket 24-72 órán át, mielőtt mérnénk a fehérjeexpressziót.

Kísérleti eredmény: a humán mesenchymális őssejteket sikeresen transzfektáltuk GFP-t kódoló plazmiddal az X-tremeGENE™ HP DNS transzfekciós reagens segítségével.

HEK-293T sejtek transzfekciója lentivirális termeléshez

HEK-293T sejtek transzfekciója 5.0 X 10 X 10⁵ sejtek/lyuk. A sejteket 6 lyukú lemezben lyukanként 2 mL teljes táptalajban ültessük el 18 - 24 órával a transzfekció előtt  (60 - 80%-os konfluencia). Inkubálja a sejtkultúrákat egy éjszakán át.

Az X-tremeGENE™ HP DNS transzfekciós reagens, a DNS és a hígítószer (Opti-MEM^® I redukált szérum médium vagy szérummentes médium) melegedjen +15 °C és +25 °C közé, és óvatosan vortexelje.

• Tegyük 180 μL hígítót egy steril csőbe.
• Adjunk hozzá 2 μg plazmid DNS-t. (20 μL plazmid DNS-keveréket 1: 2: 2 = könyvtári plazmid : csomagoló plazmid : burkoló plazmid moláris arányban). Óvatosan pipettázzon a keveréshez.
• Adjon 6 μL X-tremeGENE™ HP DNS transzfekciós reagens -t a hígított DNS-hez. (3:1 arányban a reagens és a DNS között). Óvatosan pipettázzon a keveréshez.
• Inkubáljon 15-30 percig +15 °C és +25 °C között.
• Adjon 200 μL transzfekciós komplexet a sejtekhez cseppenként.
• Óvatosan rázza vagy forgassa a kutakat vagy lombikokat, hogy biztosítsa az egyenletes eloszlást a teljes lemezen.
• Inkubálja a sejteket 24-72 órán át a fehérjeexpresszió mérése előtt.

Kísérleti eredmény: A HEK-293T sejteket sikeresen transzfektáltuk pGIPZ-eGFP plazmiddal az X-tremeGENE™ HP DNS transzfekciós reagens segítségével.

SF9 rovarsejtek transzfekciója

Az SF9 sejteket 0 sűrűséggel 0.5 X 10⁶ sejtek/lyuk. A sejteket 12 lyukú lemezbe közvetlenül a transzfekció előtt üregenként 1 ml teljes táptalajba ültessük. A sejtkultúrákat egy éjszakán át inkubáljuk.

Az X-tremeGENE™ HP DNS transzfekciós reagens, a DNS és a hígítószer (Opti-MEM^® I redukált szérumos közeg vagy szérummentes közeg) melegedjen +15 °C és +25 °C közé, és óvatosan vortexelje.

• Tegyen 100 μL hígítót egy steril csőbe.
• Adjunk hozzá 1 μg plazmid DNS-t. Óvatosan pipettázzunk a keveréshez.
• Adjon 8 μL X-tremeGENE™ HP DNS transzfekciós reagenshez a hígított DNS-hez. (8:1 arány a reagens és a DNS között). Óvatosan pipettázzon a keveréshez.
• Inkubáljon 15-30 percig +15 °C és +25 °C között.
• Adja transzfekciós komplexet a sejtekhez cseppenként.
• Óvatosan rázza vagy forgassa a lyukakat vagy lombikokat, hogy biztosítsa az egyenletes eloszlást a teljes lemezen.
• Inkubálja a sejteket 24-72 órán át a fehérjeexpresszió mérése előtt.

Kizárólag élettudományi kutatásokra. Nem diagnosztikai eljárásokban való felhasználásra.

Kérem, vegye figyelembe, hogy a protokollok javaslatok, és az optimális feltételeket empirikusan kell meghatározni.

1. Az X-tremeGENE™ 9 DNS transzfekciós reagens +2 és +8 °C között, az X-tremeGENE™ HP DNS transzfekciós reagens pedig -15 és -25 °C között tárolható.
2. Hozza az X-tremeGENE™ DNS-transzfekciós reagens tartalmazó injekciós üveget +15 és +25 °C közötti hőmérsékletre, és egy másodpercig keverje fel, mielőtt kivenné a kívánt mennyiséget.
3. Ne aliquotálja az X-tremeGENE™ DNS-transzfekciós reagenset; a maradék transzfekciós reagens az eredeti üveg fiolákban tárolja.
4. Minimalizálja a hígítatlan X-tremeGENE™ DNS-transzfekciós reagens érintkezését a műanyag felületekkel.
5. A szükséges mennyiség eltávolítása után, használat után azonnal szorosan zárja le az injekciós üveg fedelét.
6. Az X-tremeGENE™ DNS transzfekciós reagens minimális mennyisége: DNS-komplex transzfekcióhoz való felhasználásához 100 μl. A komplexképződés kisebb térfogatnál jelentősen csökkenti a transzfekció hatékonyságát.
7. Ne használjon polisztirolból készült csöveket vagy mikrolemezeket az X-tremeGENE™ DNS transzfekciós reagens: DNS-komplexek előállításához. Ha nem tudja elkerülni a polisztirol anyagokat, mindenképpen pipettázza a transzfekciós reagens közvetlenül a szérummentes közegbe, vagy csökkentett szérumtartalmú (szérumot nem tartalmazó) közegbe.
8. Ne használjon szilikonizált pipettahegyeket vagy csöveket.
9. Győződjön meg arról, hogy a sejtek a transzfekció idején még aktívan növekednek.
10. A transzfekciók elvégzésekor vonjon be megfelelő kontrollokat, olyan kutak bevonásával, amelyekben:
    (1) nem transzfektált sejtek
    (2) csak transzfekciós reagenssel rendelkező sejtek
    (3) csak DNS-t tartalmazó sejtek
11. A transzfekciós reagens optimális aránya: DNS és a komplex optimális teljes mennyisége a sejtvonaltól, a sejtsűrűségtől, a sejtnövekedés állapotától a vizsgálathoz és a kifejezett géntől függően változhat.