X-tremeGENE™ HP DNS transzfekciós reagens protokollja

Cellák előkészítése a transzfekcióhozn

A sejteket körülbelül 24 órával a transzfekció előtt ültessük be,  ügyelve arra, hogy a sejtek optimális koncentrációban legyenek (70-90 % konfluencia).

Lépések a transzfekció előtt

1. Az X-tremeGENE™ HP DNS-transzfekciós reagens, a DNS és a hígítószer (Opti:MEM^®I redukált szérumos médium vagy szérummentes médium) melegedjen +15 °C és +25 °C közé, és óvatosan vortexelje.
2. Tegye a hígítót egy steril csőbe.
3. Adja hozzá a plazmid DNS-t. Óvatosan pipettázzon fel és le a keveréshez.
4. Adjon X-tremeGENE™ HP DNS transzfekciós reagens -t a hígított DNS-hez.
   
5. Inkubáljon 15 percig +15 °C és +25 °C között.
6. Adja a transzfekciós komplexet a sejtekhez cseppenként.
7. Óvatosan rázza vagy forgassa a kutakat vagy lombikokat, hogy biztosítsa az egyenletes eloszlást a teljes lemezen.
8. Inkubálja a sejteket 18-72 órán át a fehérjeexpresszió mérése előtt.

Az X-tremeGENE™ HP DNS-transzfekciós reagens térfogata és a DNS mennyisége különböző arányok esetén.

		Ratio transzfekciós reagens : DNS	Minimális transzfekciós komplex térfogat	Térfogat egy teljes 96 lyukú lemezhez
td>	Szérummentes közeg a végső térfogatig	100 μL	500 μL
1 : 1	X-tremeGENE™ HP DNS transzfekciós reagens DNS	1 μ.L 1 μg	5 μL 5 μg
2 : 1	X-tremeGENE™ HP DNS transzfekciós reagens DNS	2 μL 1 μg	10 μL 5 μg
3 : 1	X-tremeGENE™ HP DNS transzfekciós reagens DNS	3 μL	15 μL 5 μg

Tippek a sikeres transzfekciókhoz a  X-tremeGENE™ DNS transzfekciós reagens használatával 

1. Tárolja az X-tremeGENE™ 9 DNS-transzfekciós reagenseket +2 és +8 °C között, az X-tremeGENE™ HP DNS-transzfekciós reagenseket pedig -15 és -25 °C között.
2. Hozza az X-tremeGENE™ DNS-transzfekciós reagens tartalmazó injekciós üveget +15 és +25 °C közötti hőmérsékletre, és egy másodpercig keverje fel, mielőtt kivenné a kívánt mennyiséget.
3. Ne aliquotálja az X-tremeGENE™ DNS-transzfekciós reagenseket; a megmaradt transzfekciós reagenseket az eredeti üveg fiolákban tárolja.
4. Minimalizálja a hígítatlan transzfekciós reagens érintkezését a műanyag felületekkel.
5. A szükséges mennyiség eltávolítása után, használat után azonnal szorosan zárja le az injekciós üveg fedelét.
6. Az X-tremeGENE™ DNS transzfekciós reagens minimális mennyisége: DNS-komplex transzfekcióhoz való felhasználásához 100 μl. A komplexképződés kisebb térfogatnál jelentősen csökkenti a transzfekció hatékonyságát.
7. Ne használjon polisztirolból készült csöveket vagy mikrolemezeket az X-tremeGENE™ DNS transzfekciós reagens: DNS-komplexek előállításához. Ha nem tudja elkerülni a polisztirol anyagokat, mindenképpen pipettázza a transzfekciós reagens közvetlenül a szérummentes közegbe, vagy csökkentett szérumtartalmú (szérumot nem tartalmazó) közegbe.
8. Ne használjon szilikonizált pipettahegyeket vagy csöveket.
9. Győződjön meg arról, hogy a sejtek a transzfekció idején még aktívan növekednek.
10. A transzfekciók elvégzésekor megfelelő kontrollokat kell beépíteni, olyan kutakkal, amelyekben:
    (1) nem transzfektált sejtek
    (2) csak transzfekciós reagenssel rendelkező sejtek
    (3) csak DNS-t tartalmazó sejtek
11. A transzfekciós reagens optimális aránya: DNS és a komplex optimális teljes mennyisége a sejtvonaltól, a sejtsűrűségtől, a sejtnövekedés állapotától a vizsgálathoz és a kifejezett géntől függően változhat.