RNAINH-RO

Inhibidor de la ARNasa Protector

• Sinónimos: Inhibidor de la arnasa, protector
• NACRES: NA.21
• UNSPSC Code: 41181611

Propiedades

• assay: >95% (SDS-PAGE)
• mol wt: ~50 kDa
• packaging: pkg of 10,000 U (03335402001 [5 x 2,000 U]), pkg of 2,000 U (03335399001)
• manufacturer/tradename: Roche
• parameter: 25-55 °C optimum reaction temp.
• pH range: 5.0-9.0
• storage temp.: −20°C

Descripción

General description

Contenido
Inhibidor de ARNasa Protector ( (40 U/μ) en tampón de conservación: HEPES-KOH 20 mM, KCl 50 mM, ditiotreitol 8 mM, glicerol al 50 % (v/v), pH aproximadamente 7,6 (+ 4°C).

El inhibidor de ARNasas Protector inactiva un amplio espectro de ARNasas, entre ellas

• ARNasa A
• ARNasa B
• ARNasa T2

Por tanto, el inhibidor de ARNasas Protector puede contribuir a evitar la degradación de las ARNasas en cualquier aplicación en la que las ARNasas puedan causar problemas. Por ejemplo, puede:

• proteger el ARNm durante reacciones de síntesis de ADNc, RT-PCR (en termocicladores convencionales y sistemas qPCR) o reacciones de transcripción o traducción in vitro
• proteger el ARN vírico durante la replicación vírica in vitro
• inhibir las ARNasas durante el aislamiento y la purificación del ARN
• utilizarse en ensayos de protección de ARNasas
• ayudar a preparar anticuerpos exentos de ARNasa

Nota: el inhibidor de ARNasas Protector no interfiere en la actividad de las enzimas utilizadas comúnmente para preparar o analizar el ARN.

Application

El inhibidor de ARNasa Protector se utiliza para:

• Proteger el ARNm en las reacciones de síntesis del ADNc, la RT-PCR (en los cicladores térmicos convencionales y los sistemas de qPCR), por ejemplo, con los equipos LightCycler^®, el sistema de transcripción y traducción in vitro, el análisis de protección de la ARNasa, la síntesis de ARN in vitro[1][2]
• Proteger el ARN vírico durante la replicación vírica in vitro
• Inhibir las ARNasas durante el aislamiento y la purificación del ARN[3][4]
• Ayudar a preparar anticuerpos exentos de ARNasa
• Sintetizar sondas de ARN para hibridación in situ[5][6]

Es útil en cualquier aplicación en la que las ARNasas puedan constituir un posible problema.

Biochem/physiol Actions

El inhibidor de la ARNasa Protector (20 U/ 20 μl de reacción) inhibe la ARNasa A hasta 1 ng, la ARNasa B hasta 160 pg y la ARNasa T2 hasta 0,03 U/μl de volumen de reacción.


La ARNasa H no es inhibida por el inhibidor de la ARNasa Protector.


Termoinactivación: > 65 °C

Features and Benefits

• Confíe en el inhibidor de ARNasa termoestable: El inhibidor de ARNasa Protector permanece estable incluso cuando se utilizan transcriptasas inversas termoestables como la transcriptasa inversa Transcriptor.
• Aproveche una amplia variedad de condiciones de reacción: El inhibidor de la ARNasa Protector es activo a un pH comprendido entre 5,0 y 9,0 y a temperaturas comprendidas entre +25°C y +55°C (sigue midiéndose actividad parcial a +60°C).
• Elimine la interferencia en diferentes aplicaciones de análisis de ARN: Mantiene el rendimiento incluso cuando se añade a una concentración 16 veces superior a la concentración estándar.
• Insista en una preparación muy purificada: En cada lote se prueba la función utilizando técnicas como la RT-PCR cuantitativa para asegurar la ausencia de endonucleasas, ribonucleasas o actividad melladora, de acuerdo con los procedimientos de control de calidad vigentes.

Preparation Note

Concentración de trabajo:

• de 5 a 10 U en la RT-PCR en una etapa
• de 25 a 50 U en la RT-PCR en dos etapas
• 20 U para la transcripción in vitro

Pueden utilizarse concentraciones mayores del inhibidor de ARNasa Protector en la RT-PCR si se sospecha que la contaminación por ARNasa hace que ciertas muestras sean difíciles de amplificar. El inhibidor no interfiere en la reacción. (En un sistema problema, incluso una concentración 16 veces superior
del inhibidor no interfiere en la RT-PCR.)

Analysis Note

Se prueba la función de cada lote de inhibidor de ARNasa Protector con el kit Titan One Tube RT-PCR y el kit LightCycler PDP. También se comprueban las actividades contaminantes del inhibidor de ARNasa Protector como se describe a continuación.
Disolución tampón problema: Tris-HCl 50 mM, MgCl₂ 10 mM, EDTA 0,1 mM , β-mercaptoetanol 7 mM; pH 7,5 (+37°C).
Ausencia de endonucleasas: Se incuba 1 μg de los fragmentos EcoR l/Hind III* de λADN con el inhibidor de ARNasa Protector en 50 μl de disolución tampón problema a +37°C durante 1 hora. La cantidad de inhibidor que no produce alteración en el patrón de bandas se especifica debajo de «Endo».
Ausencia de actividad melladora (nicking): Se incuba 1 μg de ADN superenrollado pBR322 con el inhibidor de ARNasa Protector en 50 μl de disolución tampón problema a +37°C durante 1 hora. La cantidad de inhibidor que no produce relajación del ADN superenrollado se especifica debajo de «Act. Nick.»
Ausencia de ribonucleasa (1): Se incuban 5 μg de ARN MS2 con el inhibidor de ARNasa Protector durante 1 hora a +37 ºC en un volumen final de 50 μl. La cantidad de inhibidor que no produce degradación del ARN MS2 se especifica debajo de «RNase 1».
Ausencia de ribonucleasa (2): Se incuban 5 μg de ARN MS2 con el inhibidor de ARNasa Protector durante 1 hora a +37 ºC, luego 10 minutos a +65 ºC en un volumen final de 50 μl. La cantidad de inhibidor que no produce degradación del ARN MS2 se especifica debajo de «RNase 2».

Other Notes

Especificaciones del producto:
Origen: Pulmón de rata; El producto se produce mediante recombinación en E. coli
Punto isoeléctrico: pH 4,5
Temperatura en la que el inhibidor de ARNasa Protector es activo: de 25°C a +55°C; sigue midiéndose actividad parcial a +60°C
Inactivación: Bajo intensas condiciones de desnaturalización (temperaturas por encima de +65°C) el inhibidor está inactivado
Carga bacteriana biológica: <50 ufc/ml
Contenido de ADN: <100 pg/mg

Sólo para investigación en ciencias de la vida. No indicada para procedimientos diagnósticos.

Una unidad de inhibidor de la ARNasa Protector se define como la cantidad de proteína requerida para inhibir el 50 % de la actividad de 5 ng de ARNasa A.

Valoración unitaria: La actividad se mide de acuerdo con Blackburn como la capacidad para inhibir la hidrólisis de la citidina-2′ cíclica: ácido 3′-monofosfórico. En condiciones analíticas, 200 U del inhibidor de ARNasa Protector inhiben el 50 % de la actividad de 1 μg de ARNasa A.

Volumen de actividad: 40 U/μ

Legal Information

ADVERTENCIA PARA EL COMPRADOR: RENUNCIA DE LICENCIA
Este producto está optimizado para ser utilizado en la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) cubierta por patentes propiedad de F. Hoffmann-La Roche Ltd ("Roche"). Mediante la compra de este producto no se transfiere al comprador del producto al comprador del producto licencia alguna bajo estas patentes para el uso del proceso de PCR. Una licencia de uso del Proceso de PCR para ciertas actividades de investigación y desarrollo acompaña a la adquisición de ciertos′ reactivos de Roche, Applied Biosystems u otros proveedores cuando se utilizan junto con un ciclador térmico autorizado o están disponibles en Applied Biosystems. La utilización para diagnóstico requiere una licencia de Roche. Para más información sobre las licencias de compra, contacte con el Director de Licencias de Applied Biosystems, 850 Lincoln Centre Drive, Foster City, California 94404, EE.UU.

LightCycler is a registered trademark of Roche

Información de seguridad

• Clase de almacenamiento: 12 - Non Combustible Liquids
• wgk: WGK 1
• flash_point_f: does not flash
• flash_point_c: does not flash