This material may be reconstituted in 1X PBS without Calcium and Magnesium. However, when this product is prepared as recommended, in 50 mM HEPES/KOH (pH 7.4) with 150 mM NaCl to 10 mg/mL, or in 10 mM sodium acetate (pH 7.5) with 5 mM calcium acetate, solutions are expected to be stable for 2 weeks at 2-8°C and up to 2 months when stored in aliquots at -20°C. Solution stability in PBS has not been evaluated. Various sources indicate solutions diluted in PBS are stable for approximately 3 days at 2–8 °C.
D4693
Dispase® II
protease
Synonyme(s) :
Protéase from Bacillus polymyxa
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| Conditionnement | Référence | Disponibilité | Prix |
|---|
A propos de cet article
Specific activity:
≥0.5 units/mg solid
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Service technique
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Laissez-nous vous aiderQuality Segment
form
lyophilized solid
specific activity
≥0.5 units/mg solid
technique(s)
cell culture | mammalian: suitable, single cell analysis: suitable
solubility
10 mM NaAc (pH 7.5) and 5 mM CaAc: soluble
storage temp.
2-8°C
Application
L'enzyme proposée par Sigma a été utilisée pour mettre au point un protocole de culture ex vivo de bourgeons mammaires embryonnaires de souris.[1] Elle a servi à traiter des fragments de cœur de rat pour l'isolement de mitochondries de cette source.[2] Elle a également été utilisée pour l'isolement de cellules souches de pulpe dentaire par hydrolyse enzymatique. Ces cellules ont été comparées aux cellules souches de pulpe dentaire isolées par une méthode d'explantation en vue d'analyser leurs propriétés de cellules souches et de différenciation[3].
La dispase® II a été utilisée pour le triage de cellules marquées par fluorescence (FACS, fluorescence-activated cell sorting).[4] Elle a également été employée pour séparer les couches de la vésicule vitelline viscérale[5].
Ce produit peut être utilisé pour préparer des suspensions de cellules individuelles en vue d'un séquençage.
La dispase® II a été utilisée pour le triage de cellules marquées par fluorescence (FACS, fluorescence-activated cell sorting).[4] Elle a également été employée pour séparer les couches de la vésicule vitelline viscérale[5].
Ce produit peut être utilisé pour préparer des suspensions de cellules individuelles en vue d'un séquençage.
Biochem/physiol Actions
La Dispase® II est une protéase neutre qui hydrolyse les liaisons peptidiques N-terminales des résidus d′acides aminés non polaires. Elle peut être utilisée pour la dissociation de nombreux types de tissus et de cellules cultivées in vitro. Cette enzyme est d′une nature très douce et n′endommage pas les membranes cellulaires. Elle peut être utilisée pour empêcher les agglomérats de cellules dans les cultures en suspension. Cette protéase clive la fibronectine et le collagène de type IV, mais pas la laminine, le collagène de type V, l′albumine sérique ou la transferrine.[6] La Dispase® II clive spécifiquement les liaisons entre les résidus leucine et phénylalanine. Les cations Ca2+, Mg2+, Mn2+, Fe2+, Fe3+ et Al3+ activent l′enzyme. L′EDTA, l′EGTA, Hg2+ et les autres métaux lourds inhibent l′activité de cette enzyme.[7] Cette enzyme contient 1 atome-gramme de zinc par molécule-gramme d′enzyme purifiée. Si le coenzyme zinc est retiré par des agents chélateurs tels que l′EDTA ou l′EGTA, on obtient une apoenzyme inactive. Cette enzyme n′est pas inhibée par le sérum.
Physical form
poudre lyophilisée contenant de l′acétate de calcium et du sucre lactique
Preparation Note
Une solution mère à 50 U/ml peut être préparée en dissolvant la poudre dans un tampon contenant 10 mM NaAc (pH 7,5) et 5 mM CaAc. Il est recommandé de la conserver à 4 °C.
Analysis Note
L′enzyme peut être initialement dissoute à une concentration de 10 mg/ml dans un tampon HEPES/KOH 50 mM, pH 7,4 avec 150 mM NaCl. Les dilutions ultérieures doivent être réalisées dans le milieu de culture adapté aux cellules à dissocier. La Dispase est une métalloprotéinase activée par les cations divalents, notamment Ca2+, Mg2+, Mn2+ et Fe2+.
Other Notes
Une unité hydrolyse la caséine et produit une couleur équivalente à 1,0 μmole (181 μg) de tyrosine par min à pH 7,5 et à 37 °C (couleur obtenue avec le réactif de Folin-Ciocalteu), sauf indication contraire.
Legal Information
Dispase is a registered trademark of Godo Shusei Co., Ltd.
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Cet article | |||
|---|---|---|---|
| technique(s) cell culture | mammalian: suitable, single cell analysis: suitable | technique(s) cell culture | mammalian: suitable, single cell analysis: suitable | technique(s) cell culture | mammalian: suitable | technique(s) cell culture | mammalian: suitable, single cell analysis: suitable |
| specific activity ≥0.5 units/mg solid | specific activity ≥10 unit/mg solid | specific activity ≥9,000 BAEE units/mg protein | specific activity ≥125 CDU/mg solid, 0.5-5.0 FALGPA units/mg solid |
| form lyophilized solid | form lyophilized solid | form essentially salt-free, lyophilized powder | form essentially salt-free, lyophilized powder |
| solubility 10 mM NaAc (pH 7.5) and 5 mM CaAc: soluble | solubility - | solubility hydrochloric acid: soluble 1 mM | solubility TESCA buffer (50 mM TES, 0.36 mM Calcium chloride, pH 7.4): soluble |
| storage temp. 2-8°C | storage temp. 2-8°C | storage temp. −20°C | storage temp. −20°C |
| Quality Level 100 | Quality Level 200 | Quality Level 200 | Quality Level 200 |
signalword
Danger
hcodes
Hazard Classifications
Eye Irrit. 2 - Resp. Sens. 1 - Skin Irrit. 2 - STOT SE 3
target_organs
Respiratory system
Classe de stockage
11 - Combustible Solids
flash_point_f
Not applicable
flash_point_c
Not applicable
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Numéro d'article de commerce international
| Référence | GTIN |
|---|---|
| D4693-1G | 04061833574041 |
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Can I also dissolve the powder in 1x PBS?
1 answer-
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Can I aliquot in 10 mM sodium acetate (pH 7.5) + 5 mM calcium acetate, freeze once, and thaw as needed? I need small amounts from the same lot over several months, therefore I cannot store it at 2-8°degrees for only 2 weeks,
1 answer-
Aliquots of this product prepared in 10 mM sodium acetate (pH 7.5) + 5 mM calcium acetate can be stored at -20 °C, where stability is known for up to 2 months.
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How long can I store the powder at -80°C?
1 answer-
In powder form, this product is quite stable and stored at 2-8°C. This product is not assigned an expiration or retest date. A warranty period of 1 year from the date of shipment applies. The long term stability of this material when stored at -20°C or -80°C has not been investigated. Prepared solutions are expected to be stable for 2 weeks at 2-8°C and up to 2 months when stored in aliquots at -20°C.
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Could I dissolve in another work solution instead Hepes/KOH 50 mM pH 7,4, NaCl 150 mM?
1 answer-
Two approaches are available for reconstituting this lyophilized enzyme formulation. The first approach is for making a solution used in cell dissociation, and the second is a more generic method, such as for assaying Dispase activity:
1. Dissolve in 50 mM Hepes/KOH pH 7.4, 150 mM NaCl at 10 mg/mL. Further dilutions should be made in the cell culture media most appropriate for the cells being dissociated.
2. A 50 U/mL stock solution may be prepared by dissolving the powder in a buffer containing 10 mM sodium acetate (pH 7.5) and 5 mM calcium acetate.
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how many units in 1 mg for the product D4693
1 answer-
The enzymatic activity varies from lot to lot and is reported in the Certificate of Analysis. A brief survey of recent lots reveals an average activity of 1.2 u/mg solid. Please see the link below to review a sample or lot specific Certificate:
https://www.sigmaaldrich.com/product/sigma/d4693*product-documentationHelpful?
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Once dissolved into a stock solution, how long is it stable at 4 degrees C?
1 answer-
The reconstituted stock solution can be stored at 2 to 8 °C for 2 weeks. Alternatively, it can be stored at - 20 deg C in aliquots to minimize freeze-thaw cycles where it should be stable for up to 2 months. The working solution, diluted in PBS from the stock solution, is stable for approximately 3 days at 2 to 8 °C.
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Is Dispase II esteril for isolating cells from tissues for doing cell cultures? Thanks Monica
1 answer-
This product has been used in the ex vivo culture of mouse embryonic mammary buds. Please see protocols in the published article: https://link.springer.com/article/10.1007/s10911-013-9288-2
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What is the Department of Transportation shipping information for this product?
1 answer-
Transportation information can be found in Section 14 of the product's (M)SDS.To access the shipping information for this material, use the link on the product detail page for the product.
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