Značení a detekce nukleových kyselin
Škála metod značení a detekce nukleových kyselin, produktů PCR a oligonukleotidů se značně liší. Činidla a metody, které se často používají ke značení a detekci nukleových kyselin, jsou určeny několika faktory, včetně typu molekuly, která bude značena, a následné aplikace. Následně se ke značení nukleových kyselin používají enzymatické i chemické metody, které zahrnují různé molekuly, například fluorofory, enzymy a radioaktivní prvky.
Související technické články
- Metody a soupravy pro značení digoxigeninem (DIG) pro DNA a RNA DIG sondy, značení DNA s náhodným primedem, značení nick translací, značení 5' a 3' oligonukleotidů na konci.
- Ethidium bromid je dobře známé a široce používané fluorescenční barvivo v biotechnologickém výzkumu.
- Dostupné postupy, činidla a vybavení pro fluorescenční in situ hybridizaci (FISH).
- Background and protocols describing the various methods used by molecular biologists to detect samples of protein or nucleic acids bound to membranes.
- Prozkoumejte uzamčenou nukleovou kyselinu a MGB. Tyto oligo modifikace nabízejí stabilitu a specifičnost při molekulární analýze, takže jsou ideální pro výzkumné a diagnostické aplikace.
- Zobrazit vše (12)
Související protokoly
- There are several counterstains possible in combination with BM Purple (or NBT/BCIP in general), including FastGreen FCF and Nuclear Fast Red.
- NBT/BCIP
- NBT/BCIP Ready-to-Use Tablets Protocol Troubleshooting
- NBT Protocol
- Seznamte se s metodami výpočtu teploty tání oligonukleotidů (Tm).
- Zobrazit vše (15)
Další články a protokoly
Značení nukleových kyselin a sondy
Nukleové kyseliny lze značit v celé molekule nebo na 5' a 3' konci. Sondy nukleových kyselin jsou zvláště užitečné pro hybridizační testy, jako je detekce RNA v northern blotu nebo DNA v Southern blotu. K distribuci značky v celé sondě se používají různé metody značení, včetně PCR se značenými deoxynukleotidy (dNTP) nebo nukleotidtrifosfáty (NTP), náhodného primingu a překladu niklu. Značení na konci je zvláště užitečné pro testy zkoumající interakce nukleových kyselin s proteiny, aby se zabránilo sterickým překážkám.
Testy značení a detekce nukleových kyselin
V závislosti na způsobu značení se pro enzymově značené sondy často používá kolorimetrická detekce, zatímco pro radioaktivní sondy je vhodná autoradiografická detekce. Mezi běžné sondy patří digoxigenin (DIG) a fluoresceinem značené sondy a lze je použít v kombinaci, která usnadňuje vícebarevnou detekci sond ve spojení s kolorimetrickými reakcemi (např. alkalická fosfatáza). Podobně je možné inkorporovat Biotin-16-dUTP pomocí PCR s většinou DNA polymeráz jako dodatečnou metodu značení a detekce. Fluorescenční in situ hybridizace (FISH) používá k detekci sekvencí DNA fluorescenční sondy a úspěšná detekce a následná analýza je částečně závislá na citlivosti a rozlišení fluorescenčního mikroskopu, který má výzkumník k dispozici.
Použití značené DNA a RNA
Přenos makromolekul na membrány na pevné fázi je znám jako blotování. Díky specifičnosti značených sond poskytuje hybridizace nukleové kyseliny a sondy výzkumníkům možnost detekovat sekvence DNA i RNA ve složitých směsích nukleových kyselin. Kromě toho tyto metody umožňují získat další cenné informace včetně analýzy genové exprese, velikosti mRNA a počtu kopií v závislosti na testu. Hybridizaci in situ výzkumníci také běžně používají k detekci jedné nebo více různě značených sond (např. sondy značené DIG a fluoresceinem).
Abyste mohli pokračovat ve čtení, přihlaste se nebo vytvořte účet.
Nemáte účet?